针对GPC3的抗体及其用途制造技术

本发明专利技术公开了针对GPC3的抗体及其用途，特别是针对GPC3的单克隆抗体、针对GPC3和CD3的双特异性抗体、包含所述抗体的核酸、包含所述核酸的载体以及包含所述核酸或所述载体的宿主细胞。还公开了包含抗体的药物组合物和缀合物，以及使用抗体的治疗方法。以及使用抗体的治疗方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对GPC3的抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及针对GPC3的抗体，以及这种抗体的用途，特别是它们在癌症治疗中的用途。
[0002]专利技术背景
[0003]磷脂酰肌醇蛋白聚糖(GPC)代表高度保守的硫酸乙酰肝素蛋白聚糖家族，其通过C末端糖基
‑
磷脂酰肌醇(GPI)锚连接到质膜上。迄今为止，哺乳动物中已鉴定出GPC家族的六名成员：GPC1到GPC6。磷脂酰肌醇蛋白聚糖具有相似的结构，包含60
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70kDa核心蛋白，其通过GPI和C
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末端硫酸乙酰肝素侧链连接到细胞膜。所有GPC蛋白质在胚胎发育期间都高度表达，并且在成人中剧烈变化。在成人中，GPC2不再表达；GPC3仅在卵巢中表达；GPC5特异性地在大脑中表达；而GPC1、GPC4和GPC6在各种组织中广泛表达。
[0004]已经表明GPC与肿瘤发育高度相关。GPC1与胰腺癌生长、迁移和血管生成有关。GPC1还在乳腺癌、食管鳞状细胞癌和胶质瘤中上调，表明较差的预后。GPC2主要与神经系统肿瘤相关，例如神经母细胞瘤。一些研究表明，GPC4在胰腺癌中高度表达，GPC6在卵巢癌中上调并与预后呈正相关。在所有GPC家族成员中，GPC3是最令人感兴趣的并且已得到充分研究，已被证明是肿瘤诊断的潜在标志物以及靶向治疗的肿瘤抗原。
[0005]人GPC3是由580个氨基酸残基组成的70kDa蛋白质。它包含位于Arg358和Cys359之间的弗林蛋白酶限制位点。GPC3蛋白在该位点被分为两个片段：40kDa的N
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末端结构域和30kDa的C
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末端结构域，它们随后通过一个或多个二硫键连接。C
‑
末端残基Cys495和Cys508由硫酸乙酰肝素修饰，残基Ser560与GPI连接。
[0006]先前的研究表明，GPC3与包含肝细胞癌(HCC)在内的癌症高度相关。GPC3在超过70％的肝细胞癌患者中高度表达，而未在非癌症患者如肝炎、肝硬化和脂肪肝的肝细胞中检测到其表达。目前，使用索拉非尼、乐伐替尼和瑞戈非尼的标准疗法在晚期肝细胞癌中仍不令人满意。由于GPC3与包含肝细胞癌在内的肿瘤的发生和发展的高相关性，其已成为包含肝癌在内的各种癌症的有希望的治疗靶标。
[0007]专利技术概述
[0008]本公开提供了结合GPC3的新型抗体或其抗原结合片段，其可以是单克隆抗体或双特异性抗体的形式，例如双特异性T细胞衔接器(BiTE)。本专利技术公开的抗体能够结合GPC3并介导效应细胞对表达GPC3的靶细胞(例如各种癌细胞)的杀伤。
[0009]在一个方面，本公开提供了特异性结合GPC3的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中(i)VL包含分别具有如SEQ ID NO：1
‑
3所示的氨基酸序列的LCDR 1
‑
3，并且VH包含分别具有如SEQ ID NO：6
‑
8所示的氨基酸序列的HCDR 1
‑
3；或(ii)VL包含分别具有如SEQ ID NO：23
‑
25所示的氨基酸序列的LCDR 1
‑
3，并且VH包含分别具有如SEQ ID NO：60
‑
62所示的氨基酸序列的HCDR 1
‑
3。
[0010]在本专利技术公开的抗体或其抗原结合片段的一些实施方案中，(i)VL包含与SEQ ID NO：4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VH包含与SEQ ID NO：9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少
95％、至少98％、至少99％、或100％序列同一性的氨基酸序列；或(ii)VL包含与SEQ ID NO：26具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且VH包含与SEQ ID NO：28具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，(i)VL包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，并且VH包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列；或者(ii)VL包含如SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，并且VH包含如SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列。
[0011]在一些实施方案中，抗体可以是选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同种型。在一些实施方案中，抗体可以是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚型。
[0012]在一些实施方案中，抗原结合片段可选自Fab、Fab
’
、F(ab')2、Fv、scFv和ds
‑
scFv。
[0013]在一些实施方案中，抗体可以是单克隆抗体。在一些实施方案中，抗体包含(i)轻链，其包含与SEQ ID NO：5具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，以及重链，其包含与SEQ ID NO：10具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；或者(ii)轻链，其包含与SEQ ID NO：27具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，以及重链，其包含与SEQ ID NO：29具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。
[0014]在其他实施方案中，抗体可以是双特异性或多特异性抗体。在一些实施方案中，抗体是双特异性抗体，其进一步包含与第二抗原结合的第二抗原结合区。在一些实施方案中，第二抗原可以是肿瘤相关抗原或免疫细胞抗原。在一些实施方案中，第二抗原是T细胞抗原。在一些实施方案中，T细胞抗原可以选自T细胞受体(TCR)、CD3、CD4、CD8、CD16、CD25、CD28、CD44、CD62L、CD69、ICOS、41
‑
BB(CD137)和NKG2D。
[0015]在一些实施方案中，第二抗原是CD3，并且第二抗原结合区包含VL和VH，其中VL包含分别具有如SEQ ID NO：11
‑
13所示的氨基酸序列的LCDR1
‑
3，并且VH包含分别具有如SEQ ID NO：16
‑
18所示的氨基酸序列的HCDR1
‑
3。
[0016]在一些实施方案中，第二抗原结合区包含VL和VH，所述VL包含与SEQ ID NO：14具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且所述VH包含与SEQ ID NO：19具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少9本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.特异性结合GPC3的抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区(VL)和重链可变区(VH)，其中(i)所述VL包含分别具有如SEQ ID NO：1
‑
3所示的氨基酸序列的LCDR1
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3，并且所述VH包含分别具有如SEQ ID NO：6
‑
8所示的氨基酸序列的HCDR 1
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3；或者(ii)所述VL包含分别具有如SEQ ID NO：23
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25所示的氨基酸序列的LCDR 1
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3，并且所述VH包含分别具有如SEQ ID NO：60
‑
62所示的氨基酸序列的HCDR 1
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3。2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其中(i)所述VL包含与SEQ ID NO：4具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且所述VH包含与SEQ ID NO：9具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；或者(ii)所述VL包含与SEQ ID NO：26具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，并且所述VH包含与SEQ ID NO：28具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其中(i)所述VL包含如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列，并且所述VH包含如SEQ ID NO：9所示的氨基酸序列；或者(ii)所述VL包含如SEQ ID NO：26所示的氨基酸序列，并且所述VH包含如SEQ ID NO：28所示的氨基酸序列。4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是选自IgG、IgA、IgM、IgE和IgD的同种型。5.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的亚型。6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv和ds
‑
scFv。7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为单克隆抗体。8.根据权利要求7所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体包含(i)轻链，其包含与SEQ ID NO：5具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和重链，其包含与SEQ ID NO：10具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；或者(ii)轻链，其包含与SEQ ID NO：27具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和重链，其包含与SEQ ID NO：29具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。9.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为双特异性抗体或多特异性抗体。
10.根据权利要求9所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体为双特异性抗体，其进一步包含与第二抗原结合的第二抗原结合区。11.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原为肿瘤相关抗原或免疫细胞抗原。12.根据权利要求11所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原是T细胞抗原。13.根据权利要求12所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述T细胞抗原选自T细胞受体(TCR)、CD3、CD4、CD8、CD16、CD25、CD28、CD44、CD62L、CD69、ICOS、41
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BB(CD137)和NKG2D。14.根据权利要求10所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原是CD3，并且所述第二抗原结合区包含VL和VH，其中所述VL包含分别具有如SEQ ID NO：11
‑
13所示的氨基酸序列的LCDR 1
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3，并且所述VH包含分别具有如SEQ ID NO：16
‑
18所示的氨基酸序列的HCDR 1
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3。15.根据权利要求14所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原结合区包含VL和VH，所述VL包含与SEQ ID NO：14具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列，所述VH包含与SEQ ID NO：19具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。16.根据权利要求15所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原结合区包含VL和VH，所述VL包含如SEQ ID NO：14所示的氨基酸序列，所述VH包含如SEQ ID NO：19所示的氨基酸序列。17.根据权利要求14至16中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第二抗原结合区的VL任选地通过第一接头与所述特异性结合GPC3的抗体的VL的C端连接，并且所述第二抗原结合区的VH任选地通过第二接头与所述特异性结合GPC3的抗体的VH的C端连接，其中所述第一接头和所述第二接头是相同或不同的。18.根据权利要求17所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述第一接头包含如SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：32所示的氨基酸序列，并且所述第二接头包含如SEQ ID NO：22所示的氨基酸序列。19.根据权利要求14至18中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述双特异性抗体包含(i)轻链，其包含与SEQ ID NO：15具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和重链，其包含与SEQ ID NO：20具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；或者(ii)轻链，其包含与SEQ ID NO：30具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列；和重链，其包含与SEQ ID NO：31具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％序列同一性的氨基酸序列。20.根据权利要求10至19中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述双特异性抗体是双特异性T细胞衔接器(BiTE)。21.双特异性抗体或其抗原结合片段，其包含含有VL和VH的结合GPC3的第一抗原结合
区，和含有VL和VH的结合CD3的第二抗原结合区，其中(i)所...

【专利技术属性】
技术研发人员：孝作祥，彭佳萍，周东文，周炜，缪杭斌，王冠女，
申请(专利权)人：浙江时迈药业有限公司，
类型：发明
国别省市：