BUB1在宫颈癌诊断和治疗中的应用制造技术

本发明专利技术属于生物医学领域，具体涉及BUB1在宫颈癌诊断和治疗中的应用。本发明专利技术发现宫颈癌患者中BUB1的表达显著升高，特别是在宫颈鳞癌和宫颈管腺癌中高表达，表明了BUB1可作为宫颈癌的诊断标志物。BUB1基因敲低可抑制宫颈癌细胞增殖，诱导宫颈癌细胞凋亡。BUB1通过调控PI3K/AKT/mTOR通路在自噬体形成和降解过程中调控宫颈癌细胞自噬。通过敲低BUB1基因可抑制宫颈癌细胞自噬，增加宫颈癌细胞凋亡，并通过抑制mTOR功能部分逆转细胞凋亡。动物模型实验也证明敲低BUB1可以显著抑制皮下移植肿瘤的生长。生长。生长。

【技术实现步骤摘要】
BUB1在宫颈癌诊断和治疗中的应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，具体涉及BUB1在宫颈癌诊断和治疗中的应用。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]宫颈癌仍然是全球排名第四的妇科癌症，2020年估计有604,127例新发病例和341,831例死亡。高危型人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因。尽管筛查和HPV疫苗可用于预防，但全球范围内的宫颈癌负担很大。从上皮内病变转变为浸润性癌的分子机制仍不清楚。除HPV感染外，多种辅助因素和分子事件也参与了宫颈癌的发生发展。早期宫颈癌的5年总生存率>90％，但局部晚期和转移性疾病的生存率显著下降。随着宫颈癌分子生物学和基因组学的发展，以抗血管生成、免疫检查点抑制剂等为代表的靶向治疗极大地改变了宫颈癌的治疗。然而，这些药物还远远不够；因此，有必要开发新的靶点和药物。
[0004]BUB1是纺锤体组装检查点(SAC)的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，据报道在许多癌症中发生了改变。BUB1表达上调与乳腺癌、前列腺癌、肝癌、淋巴瘤和卵巢癌等多种癌症的发生发展密切相关。然而，BUB1在宫颈癌中的作用机制尚未被研究。

技术实现思路

[0005]为了解决现有技术的不足，本专利技术的目的是提供BUB1在宫颈癌诊断和治疗中的应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术是通过如下的技术方案来实现：
[0007]第一方面，本专利技术提供了BUB1的检测试剂在制备宫颈癌诊断产品中的应用。
[0008]第二方面，本专利技术提供了抑制BUB1表达的试剂在制备宫颈癌治疗产品中的应用。
[0009]上述本专利技术的一种或多种技术方案取得的有益效果如下：
[0010]本专利技术发现宫颈癌患者中BUB1的表达显著升高，特别是在宫颈鳞癌和宫颈管腺癌中高表达，表明了BUB1可作为宫颈癌的诊断标志物。
[0011]BUB1基因敲低可抑制宫颈癌细胞增殖，诱导宫颈癌细胞凋亡。BUB1通过调控PI3K/AKT/mTOR通路在自噬体形成和降解过程中调控宫颈癌细胞自噬。通过敲低BUB1基因可抑制宫颈癌细胞自噬，增加宫颈癌细胞凋亡，并通过抑制mTOR功能部分逆转细胞凋亡。动物模型实验也证明敲低BUB1可以显著抑制皮下移植肿瘤的生长。
附图说明
[0012]构成本专利技术的一部分的说明书附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。
[0013]图1为使用GEO和TCGA数据集进行生物学分析的数据图，其中A为使用GSE6791差异表达基因的鉴定，B为GSE6791验证BUB1的表达，C为使用GEPIA数据库比较宫颈鳞状细胞癌组织和正常宫颈组织中BUB1 mRNA水平，D为宫颈鳞状细胞癌组织中BUB1表达与Ki67水平呈正相关的验证数据图；
[0014]图2为BUB1的mRNA和蛋白水平在宫颈癌组织和正常宫颈组织中的对比图，其中A为qRT
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PCR检测BUB1的mRNA水平数据图，B为蛋白印迹检测6例配对的宫颈癌组织和癌旁组织中BUB1蛋白的表达数据图，其中T1
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T6代表宫颈癌组织，N1
‑
N6代表癌旁组织；
[0015]图3为采用免疫组织化学染色法检测80例宫颈鳞癌组织和10例正常宫颈组织中BUB1的表达，其中A为代表性染色图像，B为评分结果对比图；
[0016]图4为BUB1
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KD抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡的验证数据图，其中A为HeLa、CaSki、和SiHa细胞系中BUB1蛋白丰度对比图，B为Western blotting验证转染效率数据图，C为EdU实验数据图，D为长期效应试验数据图，E为CCK
‑
8实验数据图，F为流式细胞术检测结果；
[0017]图5为全转录组测序鉴定差异表达基因结果图和检测PI3K/AKT通路相关蛋白的表达数据图，其中A为差异表达基因鉴定结果，B为差异表达基因进行Gene Ontology分类和富集分析数据图，C为通路富集结果，D为HeLa、CaSki和SiHa细胞系中检测PI3K/AKT通路相关蛋白表达的数据图；
[0018]图6为氯喹(CQ)、巴非洛霉素
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a1(Baf
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A1)和3
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甲基腺嘌呤(3
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MA)阻断BUB1
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KD和BUB1过表达模型中细胞自噬的数据结果图；
[0019]图7为共聚焦荧光成像检测sh
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NC和sh
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BUB1转染CaSki细胞后自噬体
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溶酶体接触情况的结果，A为共聚焦荧光成像图像，B为A中LC3B
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LAMP1图像线段上的灰度值变化；
[0020]图8为免疫荧光法检测LC3B水平的图像及数据图；
[0021]图9为蛋白印迹检测雷帕霉素和WAY
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600对CaSki细胞自噬的影响的图像及统计数据图；
[0022]图10为流式细胞术检测不同处理后细胞凋亡情况，其中A为自噬抑制剂、CQ和Baf
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A1处理后的细胞凋亡情况，B为雷帕霉素和WAY
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600处理后的细胞凋亡情况；
[0023]图11为小鼠移植瘤模型的构建及肿瘤参数对比，其中A为小鼠移植瘤模型图像，B为小鼠移植瘤图像及移植瘤质量对比图，C为小鼠移植瘤体积对比；
[0024]图12为蛋白印迹法检测移植瘤组织中BUB1、p
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4EBP1和pAKT的表达水平；
[0025]图13为肿瘤组织中BUB1、Ki67、LC3B、P62IHC染色代表性图像。
具体实施方式
[0026]本专利技术的第一种典型实施方式，BUB1的检测试剂在制备宫颈癌诊断产品中的应用。
[0027]该实施方式的一种或多种实施例中，所述BUB1的检测试剂包括检测BUB1蛋白水平的检测试剂或检测BUB1的mRNA表达水平的检测试剂中的一种或多种。
[0028]该实施方式的一种或多种实施例中，所述宫颈癌诊断产品的检测样本包括人体组织、血液、尿液或唾液中的一种或多种。
[0029]该实施方式的一种或多种实施例中，所述宫颈癌诊断产品包括引物、探针、芯片、核酸膜条、制剂或试剂盒中的一种或多种。
[0030]本专利技术的第二种典型实施方式，抑制BUB1表达的试剂在制备宫颈癌治疗产品中的应用。
[0031]该实施方式的一种或多种实施例中，所述宫颈癌治疗产品的功能包括以下一种或多种：
[0032](1)抑制宫颈癌细胞增殖；
[0033](2)诱导宫颈癌细胞凋亡；
[003本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BUB1的检测试剂在制备宫颈癌诊断产品中的应用。2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述BUB1的检测试剂包括检测BUB1蛋白水平的检测试剂或检测BUB1的mRNA表达水平的检测试剂中的一种或多种。3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述宫颈癌诊断产品的检测样本包括人体组织、血液、尿液或唾液中的一种或多种。4.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述宫颈癌诊断产品包括引物、探针、芯片、核酸膜条、制剂或试剂盒中的一种或多种。5.抑制BUB1表达的试剂在制备宫颈癌治疗产品中的...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩赛，孙雨，张友忠，崔保霞，刘昕，吴淑霞，郭玲宇，张俊华，刘露，张静静，刘洪丽，钱秋红，甄千玮，鞠双，杨佳奇，
申请(专利权)人：山东大学齐鲁医院，
类型：发明
国别省市：