ATMLP蛋白及在制备肿瘤早期诊断试剂盒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了ATMLP蛋白在制备肿瘤早期诊断试剂盒中的应用，涉及肿瘤早期诊断技术领域，其中，所述ATMLP蛋白序列如SEQ ID NO.1所示，为临床中肿瘤的早期诊断和治疗提供了理论基础。基础。基础。

【技术实现步骤摘要】
ATMLP蛋白及在制备肿瘤早期诊断试剂盒中的应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤早期诊断
，更具体地说是涉及ATMLP蛋白及在制备肿瘤早期诊断试剂盒中的应用。

技术介绍

[0002]癌症严重危害人类的生命健康，是目前全球高发的疾病种类。国内每年新发病例406余万人，达到了186人/10万人，每年死亡俞240万人，造成了严峻的防治压力。在临床中，肿瘤的早期干预对于肿瘤患者的长期生存和预后意义重大，但是由于早期诊断的准确性误差、某些肿瘤缺少早期的诊断方式等问题，导致很多肿瘤新发病人初诊就进展到中后期，影响肿瘤的治疗和预后。早期肿瘤生长位置隐秘、临床特征不明显，无法找到病灶开展更加精确的活体检测，所以目前很多早期诊断标志物都是血清或其它体液标志物。但是目前临床应用的血清标志物也存在灵敏度不高，无法更早预测肿瘤发生，因此研发更加灵敏的肿瘤体液早期标志物在临床早期诊断工作中意义重大。
[0003]哺乳动物基因组在转录过程中产生的RNA98％都是非编码的。其中，长链非编码RNA(lncRNA)发挥了包括转录激活的调节、染色体失活、异染色质的形成和端粒的维持等许多细胞功能。传统上认为，非编码RNA(ncRNAs)是从基因组转录而来，但不具备翻译蛋白质的能力。但是近些年来，越来越多的证据表明，在注释为长链非编码RNA的转录本中可以发现微小开放式阅读框(mORF)。许多由长链非编码RNA编码的产物在疾病或发育过程中发挥重要作用，如调节细胞内离子转运、免疫或炎症、肌肉再生、脂质代谢和肿瘤发生，等等。
[0004]因此，如何筛选到一种由长链非编码RNA编码的产物并验证其是否可以作为肿瘤检测的标志物是本领域技术人员亟需解决的问题。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术发现长链非编码RNAAFAP1
‑
AS1具有翻译短肽的能力，其翻译的90个氨基酸的蛋白质(ATMLP)定位于线粒体。实验结果显示，在肿瘤发生的过程中，ATMLP能够更早的在血清中被检测出来，结果提示ATMLP具有肿瘤早期预测和诊断的能力
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]ATMLP蛋白在制备肿瘤早期诊断试剂盒中的应用，其中，所述ATMLP蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]优选地，所述ATMLP蛋白由长链非编码RNAAFAP1
‑
AS1编码而成。
[0009]优选地，所述肿瘤包括头颈部肿瘤、非小细胞肺癌肿瘤、肝脏肿瘤、前列腺肿瘤、骨和软组织肉瘤、直肠肿瘤、恶性黑色素瘤、脑肿瘤、胰腺肿瘤、食道肿瘤、大肠肿瘤、乳腺肿瘤、子宫肿瘤、卵巢肿瘤、主腹膜肿瘤。
[0010]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护ATMLP蛋白在作为肿瘤标志物中的应用。
[0011]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护以ATMLP蛋白为靶点在
制备治疗肿瘤的药物中的应用。
[0012]优选的，所述药物包括ATMLP衍生物在药学上可接受的糖基化修饰物、乙酰化修饰物、磷酸化修饰物、乳酸化修饰物、盐、酯、水合物或它们的组合。
[0013]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护抑制ATMLP蛋白表达的化合物在制备治疗肿瘤药物中的应用。
[0014]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护一种ATMLP蛋白，所述蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。
[0015]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护编码所述ATMLP蛋白的基因，所述基因序列如SEQ ID NO.2所示。
[0016]作为与上述技术方案相同的专利技术构思，本专利技术还请求保护ATMLP蛋白在制备线粒体标记物中的应用。
[0017]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术提供了长链非编码RNAAFAP1
‑
AS1翻译的多肽ATMLP的新应用，并提供了该蛋白作为制备线粒体标记物产品和肿瘤治疗药物中的应用，为临床中肿瘤的早期诊断和治疗提供了理论基础。
附图说明
[0018]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0019]图1附图为ATMLP蛋白抗体杂交验证图；
[0020]图2附图为ATMLP蛋白定位验证图；
[0021]图3附图为ATMLP蛋白定位验证，结果显示ATMLP的线粒体定位不受膜电位影响；
[0022]图4附图为ATMLP在临床非小细胞肺癌患者癌症组织和癌旁组织中的免疫组化染色结果图；
[0023]图5附图为ATMLP蛋白在正常人群血清和肺癌患者血清中的含量；
[0024]图6附图为ATMLP蛋白工作特征曲线图；
[0025]图7附图为癌胚抗原CEA蛋白工作特征曲线图。
具体实施方式
[0026]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0027]下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0028]下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0029]人非小细胞肺癌细胞系A549购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，其编号为TCHu150。
[0030]PRMI1640培养基：购自Gibco，产品目录编号为12633012。
[0031]血清：购自Gibco，产品目录编号为10100147。
[0032]胰酶：购自碧云天生物，产品目录编号为C0201。
[0033]抗体：ATMLP抗体为Abclonal制备
[0034]ELISA试剂盒：人CEAELISA试剂盒购自Abcam(ab264604)、小鼠CEA ELASA试剂盒购自JINING(JN16800)。
[0035]实施例1ATMLP蛋白的表达和定位
[0036]1)细胞培养
[0037]选用传代次数较低的稳定的A549细胞系，用RPMI1640培养基添加10％胎牛血清和1％青链霉素作为细胞培养介质。细胞在37℃恒温，5％二氧化碳浓度的培养箱培养。细胞传代时先用预热的无菌磷酸盐缓冲液清洗细胞，然后加入0.25％胰蛋白酶消化2min，待细胞脱落后，用上述配置的RPMI1640培养基重悬细胞，并按照需求合理分入新的培养皿中培养。
[0038]2)免疫荧光实验
[0039]选取状态良好的对数生长期细胞，按照上述细胞培养方法接种细胞到带有盖玻片的培养皿中，按照本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ATMLP蛋白在制备肿瘤早期诊断试剂盒中的应用，其中，所述ATMLP蛋白序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ATMLP蛋白由长链非编码RNAAFAP1
‑
AS1编码而成。3.根据权利要求1
‑
2任一所述的应用，其特征在于，所述肿瘤包括头颈部肿瘤、非小细胞肺癌肿瘤、肝脏肿瘤、前列腺肿瘤、骨和软组织肉瘤、直肠肿瘤、恶性黑色素瘤、脑肿瘤、胰腺肿瘤、食道肿瘤、大肠肿瘤、乳腺肿瘤、子宫肿瘤、卵巢肿瘤、主腹膜肿瘤。4.ATMLP蛋白在作为肿...

【专利技术属性】
技术研发人员：周光明，裴海龙，李冰燕，张永胜，聂晶，黑国庆，胡文涛，刘宁昂，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：