一种血清肿瘤标志物及其在制备癌症诊断试剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种血清肿瘤标志物及其在制备癌症诊断试剂中的应用，属于肿瘤诊断试剂技术领域。本发明专利技术首次公开了一种新的肿瘤标志物Endophilin A2抗体，通过实验证实其在乳腺癌、肝癌、胃癌患者血清中显著升高。Endophilin A2抗体的发现补充了现有肿瘤标志物的不足，更有利于乳腺癌的早期诊断。Endophilin A2抗体作为一种新的肿瘤标志物，对于乳腺癌的诊断价值最高，更有利于乳腺癌患者的分期诊断和治疗指导，以解决乳腺癌现有肿瘤标志物不理想问题，达到了提高乳腺早期诊断敏感性和和准确性的目标。的目标。的目标。

【技术实现步骤摘要】
一种血清肿瘤标志物及其在制备癌症诊断试剂中的应用


[0001]本专利技术属于肿瘤诊断试剂
，具体涉及一种血清肿瘤标志物及其在制备癌症诊断试剂中的应用。

技术介绍

[0002]癌症是严重威胁人类生命和社会发展的重大疾病，自上世纪起，癌症发病人数日益增加(Bray,F.,Cancer,2021,127:3029
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3030)。恶性肿瘤发病率逐年升高且呈年轻化趋势，同时恶性肿瘤早期诊断相对困难，其死亡率高，对人类健康造成严重威胁(Chen W.,CA:A Cancer Journal for Clinicians,2015,66:115
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132)。最新数据表明，乳腺癌的新病例数量已经超过了肺癌，成为全世界发病率最高的恶性肿瘤(Sung,H.,CA Cancer J Clin,2021,71:209
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249)。这一方面是由于环境和生活习惯等，使乳腺癌等恶性肿瘤高发；另一方面随着人们自我保健意识的日益增强、主动体检的人群比例增大，临床乳腺癌的检出率越来越高。早发现、早诊断、早治疗，可明显降低乳腺癌患者的病死率，提高治愈率(Harbeck,N.,Lancet,2017,389:1134
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1150)。但乳腺癌早期多无明显的临床症状或体征，寻找简便、可行且有效的检查手段对乳腺的早期诊断有重要意义(Jafari,S.H.,J Cell Physiol,2018,233:5200
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5213)。
[0003]乳腺癌的诊断需要根据患者的病史、体征、影像学检查、生物标志物监测、组织病理等结果进行综合判断。肿瘤标志物检测、影像学检查及组织病理是诊断恶性肿瘤的三大重要方法。其中，肿瘤标志物检测具有高效、方便及创伤小等优点，其在协助肿瘤筛查、早期诊断、组织学分型、临床分期、监测肿瘤复发和转移等方面发挥了重要的作用(Seale,K.N.,Clin Breast Cancer,2022,22:e319
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e331)。随着对肿瘤标志物研究的深入，其应用目前已不仅限于对恶性肿瘤的诊断和随访，在诊断、鉴别诊断、疗效评价、预后及监测复发等各方面都发挥着不可替代的作用。
[0004]近年来，发现了大量新型肿瘤标志物，这些标志物也成为了研究的热点。CA15
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3、CA125和癌胚抗原是最常用的乳腺癌血清标志物，但它们对早期疾病缺乏敏感性，更适合于提供预后信息(Duffy,M.J.,Clin Chem,2006,52:345
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351；Barzaman,K.,Int Immuno pharmacol,2020,84:106535)。由于下一代测序的出现和发展，现在可以用液体活检等技术在血样中检测到突变的癌症基因序列(Diaz,L.A.,J Clin Oncol,2014,32:579
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586)。然而，由于这些基因的浓度较低，需要先进行扩增，这使得检测方案更加费时和复杂(Bettegowda,C.,Sci Transl Med,2014,6:224ra224)。在临床应用中不能仅根据单一肿瘤标志物的检测结果而确诊肿瘤，同时也提倡针对不同疾病同时进行多种肿瘤标志物联合检测以及动态观察，以提高诊断的准确性、敏感性及特异性。
[0005]现有肿瘤标志物的研究进展缓慢，临床应用价值有限。临床实验室急需以开发特异、敏感的肿瘤标志物为目标，加强肿瘤标志物的基础与转化研究，尤其对组织学形态不典型、鉴别诊断困难、组织来源难以确定的肿瘤发挥重要作用。

技术实现思路

[0006]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种新的血清肿瘤标志物及其在制备乳腺癌诊断试剂中的应用，以辅助多种癌症的早期诊断和鉴别诊断。
[0007]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0008]本专利技术公开了一种血清肿瘤标志物，该血清肿瘤标志物为Endophilin A2抗体，其识别的抗原Endophilin A2的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
[0009]优选地，所述肿瘤包括乳腺癌、肝癌、胃癌、肠癌、肺癌及白血病。
[0010]进一步优选地，所述肿瘤为乳腺癌。
[0011]本专利技术还公开了上述的血清肿瘤标志物在制备诊断癌症的试剂/试剂盒中的应用。
[0012]优选地，所述癌症为乳腺癌，用于对乳腺癌的早期诊断、分期诊断、监测治疗效果或预后评估。
[0013]本专利技术还公开了一种诊断癌症或评价癌症风险的试剂盒，该试剂盒包括：
[0014]Endophilin A2抗原包被的ELISA板；
[0015]1％BSA封闭液；
[0016]对待测血清进行检测的阳性标准品、阴性标准品；
[0017]HRP偶联的山羊抗人IgG；
[0018]ABTS显色液；
[0019]所述Endophilin A2抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；
[0020]所述癌症包括乳腺癌、肝癌、胃癌、肠癌、肺癌及白血病。
[0021]优选地，所述Endophilin A2抗原包被的ELISA板为应用特异表达或商业化购得的Endophilin A2抗原进行包被酶标板。
[0022]优选地，包被抗原的工作浓度为20μg/mL，待测血清稀释度为1:100，酶联抗体HRP偶联的山羊抗人IgG的稀释度为1:5000。
[0023]优选地，该试剂盒使用方法包括：
[0024]1)ELISA板制备：用Endophilin A2抗原液包被酶联板4℃过夜，洗涤；
[0025]2)封闭：使用1％BSA封闭液37℃封闭2h，洗涤；
[0026]3)样本收集和处理：抽待测外周血，分离待测血清；
[0027]4)加样：加入稀释待检血清，同时设立阴、阳性参照，37℃孵育2h，洗涤；
[0028]5)加入检测抗体：加入HRP标记山羊抗人IgG二抗，37℃孵育1h，洗涤；
[0029]6)显色：加入ABTS底物显色液，室温避光反应10～20min；
[0030]7)读板：在酶标仪下405nm波长处读取OD值；
[0031]8)根据OD值判断结果：使用阳性参照绘制标准曲线，用空白对照孔调零后，根据ELISA板待测血清OD值对应标准曲线得出不同患者血清的相对浓度。
[0032]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0033]本专利技术首次公开了一种新的肿瘤标志物Endophilin A2抗体，通过实验证实其在乳腺癌、肝癌、胃癌患者血清中显著升高。实验结果显示，该标志物对于乳腺癌的诊断效果最好，受试者工作曲线下面积(AUC)可达0.8014。大样本乳腺癌患者检测结果显示，该指标对于早期和有远端转移的乳腺癌患者具有较好的诊断效果，AUC分别为0.8014和0.7885。目
前，大多肿瘤标志物均为肿瘤抗原，而在血清中检测到自身抗体可先于肿瘤抗原，有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血清肿瘤标志物，其特征在于，该血清肿瘤标志物为Endophilin A2抗体，其识别的抗原Endophilin A2的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.根据权利要求1所述的血清肿瘤标志物，其特征在于，所述肿瘤包括乳腺癌、肝癌、胃癌、肠癌、肺癌及白血病。3.根据权利要求2所述的血清肿瘤标志物，其特征在于，所述肿瘤为乳腺癌。4.权利要求1所述的血清肿瘤标志物在制备诊断癌症的试剂/试剂盒中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述癌症为乳腺癌，用于对乳腺癌的早期诊断、分期诊断、监测治疗效果或预后评估。6.一种诊断癌症或评价癌症风险的试剂盒，其特征在于，该试剂盒包括：Endophilin A2抗原包被的ELISA板；1％BSA封闭液；对待测血清进行检测的阳性标准品、阴性标准品；HRP偶联的山羊抗人IgG；ABTS显色液；所述Endophilin A2抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；所述癌症包括乳腺癌、肝癌、胃癌、肠癌、肺癌及白血病。7.根据权利要求6所述的诊断癌症或评价癌症风险的试剂盒，其特征在于，所述Endophilin A...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟列素，李晓伟，李晓萌，王晓琴，朱文华，武倩，管阳龙，吕社民，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：