FABP5基因调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层细胞的新用途制造技术

本发明专利技术FABP5基因调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层细胞的新用途，属于基因工程技术领域。本发明专利技术提供了FABP5基因调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层细胞的新用途。本发明专利技术提出了新的调控因子FABP5可以调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层，通过靶向该因子的表达模式，可以进一步研究人类胚胎着床机制，丰富滋养层细胞分化手段。同时，将从基因分子层面提供人类胚胎和胎盘质量评价的新标准，方便临床通过检测胚胎中FABP5表达情况进行最佳移植胚胎的筛选，分析流产胎盘的具体流产原因并针对性处理，最终可能提高胚胎种植率、提高辅助生殖成功率、提高妊娠率等服务临床。提高妊娠率等服务临床。提高妊娠率等服务临床。

【技术实现步骤摘要】
FABP5基因调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层细胞的新用途


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体涉及提供一种调节细胞滋养层向绒毛外滋养层细胞分化的基因FABP5的新用途。

技术介绍

[0002]限于生殖医学伦理因素，人类胚胎着床具体机制尚缺乏有效的系统性研究，特别是针对着床的调控因子知之甚少，因此临床治疗中也没有有效的胚胎评价标准、对胚胎种植失败尚缺乏有效的分析和干预手段，从而导致了较低的辅助生殖胚胎成功率。
[0003]胚胎植入能力是影响胚胎种植结果的关键之一。哺乳动物由受精卵发育而来，经过多次分裂分化建立细胞极性形成囊胚，囊胚由滋养外胚层和内细胞团组成。内细胞团会逐步发育成胎儿，滋养外胚层细胞会在囊胚着床时和子宫上皮细胞接触，并相互作用，进一步分化成成熟的滋养层细胞，包括细胞滋养层(CTB)，及其互相融合形成的合胞体滋养层(STB)和分化形成的侵袭性绒毛外滋养层(EVT)，并最终形成哺乳动物特有的胎盘组织。胎盘是孕妇与胎儿之间的联系纽带，在维持正常妊娠和胚胎正常发育中起到重要作用。胎盘
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滋养层细胞的分化发育异常将影响胚胎植入能力，同时也可导致各种妊娠异常及妊娠疾病，包括胚胎种植失败、流产、先兆子痫、胎儿生长受限等，严重的可致孕妇及胎儿死亡。胎盘的绒毛由外层的STB及内层的CTB组成，CTB负责增殖，并向STB和EVT分化，维持细胞数量；EVT具有更强的侵袭性，可以侵袭进入子宫蜕膜间质完成胚胎种植，侵入母体螺旋动脉，重塑子宫脉管系统，影响胎儿血供的氧分压。因此围植入期滋养层细胞正常分化发育是胚胎成功种植、建立胎盘、保证后续胎儿成长发育的关键步骤之一。
[0004]脂肪酸结合蛋白5(FABP5)基因编码表皮细胞中发现的脂肪酸结合蛋白，因其在银屑病组织中上调而被发现并鉴定。脂肪酸结合蛋白(Fatty Acid Binding Protein，FABP)是一个高度保守的细胞质蛋白家族，可结合长链脂肪酸和其他疏水配体，在脂肪酸摄取、运输和代谢中发挥作用。目前报道该基因与银屑病、皮肤病及2型糖尿病相关，相关途径包括先天免疫系统和甘油三酯代谢。FABP5在人类多种组织中表达，根据人类蛋白图谱中的器官转录组测序(human protein atlas RNA
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seq，HPA RNA
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seq)结果，其在食管、皮肤、甲状旁腺、膀胱和胎盘中表达最高。但是以前的研究发现都未阐明在围植入期FABP5表达变化以及FABP5调节滋养层细胞分化发育的功能。
[0005]与本专利技术最相近似的实现方案公开号为CN110669124A的专利申请，一种基因TBX3的新用途，TBX3基因具有在调节细胞滋养层(CTB)分化为合胞体滋养层(STB)方面的应用。本专利技术公开了FABP5具有在调节细胞滋养层(CTB)分化为绒毛外滋养层(EVT)方面的应用，更进一步补充扩展了滋养层细胞分化手段、滋养层细胞和胎盘质量的检测标准，用于提高胚胎植入效率、辅助生殖成功率。

技术实现思路

[0006]针对上述现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于设计提供FABP5基因调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层细胞的新用途。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0008]FABP5基因调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层细胞的新用途。
[0009]所述的用途，所述FABP5基因在胎盘发育过渡态、细胞滋养层、绒毛外滋养层中高表达。
[0010]所述的用途，所述FABP5基因在合胞体滋养层中不表达。
[0011]FABP5基因在调控胚胎着床至子宫内膜常规深度中的应用。
[0012]一种检测胚胎/胎盘质量试剂盒，包含FABP5基因。
[0013]FABP5基因在制备胚胎种植、辅助生殖的药物中的应用。
[0014]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0015]本专利技术提出了新的调控因子FABP5可以调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层，通过靶向该因子的表达模式，可以进一步研究人类胚胎着床机制，丰富滋养层细胞分化手段。同时，将从基因分子层面提供人类胚胎和胎盘质量评价的新标准，方便临床通过检测胚胎中FABP5表达情况进行最佳移植胚胎的筛选，分析流产胎盘的具体流产原因并针对性处理，最终可能提高胚胎种植率、提高辅助生殖成功率、提高妊娠率等服务临床。
附图说明
[0016]图1为单细胞聚类分析图；
[0017]图2为过渡态细胞亚群GO分析结果；
[0018]图3为FABP5在过渡态2细胞亚群和STB亚群中的表达情况图。
具体实施方式
[0019]以下将通过附图和实施例对本专利技术作进一步说明。
[0020]实施例1：
[0021]通过在体外人胚胎培养体系中加入人子宫内膜细胞，建立了子宫内膜细胞与围植入期胚胎共培养模型，模拟围植入期滋养层细胞的分化和发育过程。收集临床子宫内膜样本，无菌生理盐水冲洗后，放入4℃预冷的含1％青霉素
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链霉素的DMEM/F12培养基中，2h内转移至洁净超净台中。超净台中用无菌PBS洗涤3次，去除样本中的血块和粘液，用无菌眼科剪将其剪碎并转移至15ml离心管中。配置含1％胶原酶I、胶原酶Ⅳ和0.05％ DNA酶的消化液，并加入离心管充分混匀，37℃水浴锅中消化30分钟，期间反复摇动离心管使离心管充分混匀、均匀受热。用200目筛网过滤去除未消化的组织碎片，过滤后的悬液1000转每分钟离心5分钟，去除上清消化液，用1ml含青霉素
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链霉素的DMEM/F12培养液重悬细胞沉淀。
[0022]将重悬液继续1000转每分钟离心5分钟，去除上清，洗涤细胞沉淀。所得细胞沉淀用含10％胎牛血清和1％青霉素
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链霉素的DMEM/F12培养液吹打均匀，计数，按5*106的密度接种于10cm培养皿中，放置在37℃、5％ CO2细胞培养箱中进行培养，之后传代至4孔板培养板继续培养，并换液成IVC1培养液。取第5
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6天人类胚胎，通过激光辅助孵化的方法削薄胚胎透明带。将完全孵出的囊胚放入铺有子宫内膜细胞的4孔板中，每孔放入1个囊胚，放置于
37℃培养箱中进行培养。待孔中胚胎稳定黏附在底部时，移除IVC1培养基并替换成IVC2培养基继续37℃培养。
[0023]之后将胚胎
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子宫内膜细胞共培养模型消化成单细胞，并挑取了单细胞进行Smart
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seq2单细胞转录组建库。胚胎
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内膜共培养模型吸去IVC1或IVC2培养基，PBS清洗去除剩余培养基，加入0.25％胰酶溶液，轻微震荡，此时胚胎会从培养板底部脱落，在显微镜下用手持胚胎转移笔将胚胎转移至另一滴胰酶溶液液滴中，37℃消化5分钟，期间用胚胎转移笔反复吹打，分散胚胎细胞。消化完的单细胞转入含血清的培养基中终止消化，利用胚胎转移笔吸取单个细胞至PBS液滴中清洗干净。最后将含有单个细胞的液体(总本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.FABP5基因调节细胞滋养层分化为绒毛外滋养层细胞的新用途。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述FABP5基因在细胞滋养层、绒毛外滋养层中高表达。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述FABP5基因在...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦佳颖，薛金锋，吕波，薛志刚，
申请(专利权)人：同济大学，
类型：发明
国别省市：