黄曲条跳甲致死基因Spt16及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其序列如SEQ ID NO.1所示。本发明专利技术还公开了一种黄曲条跳甲致死基因片段Spt16的克隆方法。本发明专利技术又公开了一种黄曲条跳甲致死基因Spt16的dsRNA序列(SEQ ID NO.4)及其dsRNA制备方法。本发明专利技术再公开了一种dsRNA在杀死黄曲条跳甲中的应用。本发明专利技术利用该基因片段的dsRNA喂食黄曲条跳甲，对黄曲条跳甲进行RNA干扰，可有效致死黄曲条跳甲，致死率高达75.9％，可以应用于黄曲条跳甲的防治。可以应用于黄曲条跳甲的防治。可以应用于黄曲条跳甲的防治。

【技术实现步骤摘要】
黄曲条跳甲致死基因Spt16及其应用


[0001]本专利技术属于农业生物
，尤其是涉及一种黄曲条跳甲致死基因Spt16及其克隆方法、其dsRNA制备方法和在害虫防治中的应用。

技术介绍

[0002]黄曲条跳甲(Phyllotreta striolata)是一种寡食性的世界性重要害虫，可为害多种蔬菜，尤其喜食芥菜、白菜、萝卜、菜心等十字花科蔬菜。黄曲条跳甲已超越小菜蛾成为蔬菜生产上第一大害虫。黄曲条跳甲幼虫取食植物的根部，影响根部吸收和传送营养物质，从而影响植物生长，严重时导致植物枯死；成虫取食叶片，影响植物的光合作用和蔬菜品质。目前黄曲条跳甲的防治主要以综合防治包括物理防治、化学防治等，然而化学农药的使用会引起害虫抗药性增强，同时污染环境、破坏生态甚至会带来一系列的食品安全问题。所以发展环境友好型、靶标特异的害虫防治策略迫在眉睫。
[0003]双链RNA(dsRNA)介导的RNA干扰(RNA interference，RNAi)通过特异性降解目的基因的mRNA，使特定的基因发生沉默，抑制基因表达。RNAi作为一种新型、高效、高特异本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：其序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：还包括SEQ ID NO.1的互补序列。3.根据权利要求1所述的黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：还包括SEQ ID NO.1的至少19个连续核苷酸的片段。4.根据权利要求1所述的黄曲条跳甲致死基因片段Spt16，其特征在于：还包括SEQ ID NO.1的至少19个连续核苷酸的片段的互补序列。5.一种黄曲条跳甲致死基因片段Spt16的克隆方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取黄曲条跳甲总RNA，以提取的总RNA合成cDNA第一条单链，以cDNA第一条链为模板，进行RT
‑
PCR扩增Spt16基因；扩增黄曲条跳甲Spt16基因片段的上游引物序列为SEQ ID NO.2(P1)，下游引物序列为SEQ ID NO.3(P2)，通过琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物，回收目标DNA片段；RT
‑
PCR扩增体系为：5
×
Phusion GC Buffer 20μL,10mMdNTPs 2μL,DMSO 3μL,Phusion DNA Polymerase 1μL,cDNA模板2μL，ddH2O 64μL，引物P1(SEQ ID NO.2)4μL，引物P2(SEQ ID NO.3)4μL。PCR反...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈梦丽，陈冬平，徐展益，吴慧明，余银芳，朱国念，
申请(专利权)人：浙江农林大学，
类型：发明
国别省市：