本发明专利技术公开了一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，具体涉及生物医疗技术领域，通过将发酵纯化的原料作为主要修复剂，添加尿囊素、乙酰羟脯氨酸和保湿因子，并且进行原料的精准配比，在修复基础上给予皮肤充分补水，且重组的人源性胶原蛋白基因工程菌、乙酰羟脯氨酸为天然有机高效健康安全的愈合修复成分，能促进多种生长因子释放并上调其活性，刺激自身肌肤细胞产生胶原蛋白对敏感肌、痤疮以及过敏修复具有明显的修复功效，同时，重组人胶原蛋白改善细胞生长微环境，促进皮肤组织新陈代谢，修复皮肤屏障，能够引导机体组织再生，促进伤口愈合，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料
[0001]本专利技术涉及生物医疗
，更具体地说，本专利技术涉及一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料。
技术介绍
[0002]重组人源化胶原蛋白是基于人体皮肤Ⅲ型胶原蛋白的原始基因序列，优化选择其中水溶性强、生物活性高的部分进行密码子优化和拼接重组，得到了全新的重组人源化Ⅲ型胶原蛋白序列，利用生物发酵技术实现可规模化生产，通过实验证实此胶原蛋白表达量大，水溶性好，生物活性高，其性能优于人天然胶原蛋白，在生物医用材料、美容化妆品、食品保健等领域有着广大的应用前景。
[0003]胶原蛋白是生物高分子，动物结缔组织中的主要成分，也是哺乳动物体内含量最多、分布最广的功能性蛋白，占蛋白质总量的25％～30％，某些生物体甚至高达80％以上，胶原蛋白是人体最丰富的蛋白质之一，已经证明胶原蛋白水解物具有显著生物活性，如抗氧化特性，抗高血压活性，降脂活性，以及修复受损皮肤性质，胶原蛋白在皮肤中具有双重作用：提供弹性蛋白和胶原蛋白形成的构建模块，充当配体或结合成纤维细胞受体刺激合成透明质酸。
[0004]肤是人体最大的免疫屏障，阻止微生物及有害物质的入侵，能够维持人体内环境的稳定，对身体健康起着关键作用，而伤口会对人体皮肤的完整性及连续性造成破坏，研究表明，伤口表皮细胞的迁移速度在湿润的愈合环境下较暴露的创面环境快，而无菌修复敷料可以为皮肤的修复提供湿润环境，调节PH及油脂平衡，重建皮肤微环境，为小创口或非慢性伤口的修复提供辅助治疗及护理，亦可用于因皮肤微环境失调引起的干燥、脱屑、红血丝、红斑、痤疮等皮肤损伤的修复。
[0005]医用敷料作为伤口处的覆盖物，在伤口愈合过程中，可以替代受损的皮肤起到暂时性屏障作用，避免或控制伤口感染，提供有利于创面愈合的环境，常规医用敷料由棉纤维经过脱脂加工而成的棉纱敷料，是使用历史最长，目前仍广泛使用的敷料，它通过物理作用保护创面伤口，可以重复使用，但是吸收能力有限，在使用时无法保持创面愈合所需的湿润环境，其对皮肤具有一定的刺激性，延迟创面愈合，对创面的愈合无促进作用，不利于患处的康复，因而适用范围窄、应用价值低。
技术实现思路
[0006]为了克服现有技术的上述缺陷，本专利技术提供了一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，本专利技术所要解决的技术问题是：常规医用敷料由棉纤维经过脱脂加工而成的棉纱敷料，是使用历史最长，目前仍广泛使用的敷料，它通过物理作用保护创面伤口，可以重复使用，但是吸收能力有限，在使用时无法保持创面愈合所需的湿润环境，其对皮肤具有一定的刺激性，延迟创面愈合，对创面的愈合无促进作用的问题。
[0007]本专利技术的目的为：
[0008]通过对原料的精准配比，重组的人源性胶原蛋白基因工程菌、乙酰羟脯氨酸为有机高效健康安全的愈合修复成分，能促进多种生长因子释放并上调其活性，刺激自身肌肤细胞产生胶原蛋白对敏感肌、痤疮以及过敏修复具有明显的修复功效，同时，重组人胶原蛋白改善细胞生长微环境，促进皮肤组织新陈代谢，修复皮肤屏障，能够引导机体组织再生，促进伤口愈合，具有良好的应用前景。
[0009]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，包括以下重量百分比的原料：
[0010]基因工程菌：5％
‑
8.5％；
[0011]大肠杆菌0.3％
‑
1.5％；
[0012]预混液5.5％
‑
9％；
[0013]限制性内切酶0.5％
‑
1.2％；
[0014]Ⅰ型胶原酶3.0％
‑
6.5％；
[0015]毕赤酵母菌株0.2％
‑
0.7％；
[0016]遗传霉素0.25％
‑
0.45％；
[0017]柠檬酸缓冲液1.2％
‑
1.8％；
[0018]NaCl溶液2％
‑
3％；
[0019]尿囊素0.1％
‑
0.2％；
[0020]乙酰羟脯氨酸0.1％
‑
1％；
[0021]保湿因子0.3％
‑
0.6％；
[0022]防腐剂0.5
‑
1.0％；
[0023]精氨酸0.1％
‑
0.5％；
[0024]其余纯化水。
[0025]作为本专利技术的进一步方案：所述大肠杆菌为重组大肠杆菌pPIC9K，且具体对大肠杆菌基因5709bp处的XhoⅠ位点进行突变。
[0026]作为本专利技术的进一步方案：所述预混液包含TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸、氯化镁、PCR buffer、PCR反应增强剂、稳定剂和蓝色示踪染料。
[0027]作为本专利技术的进一步方案：所述限制性内切酶包括XhoⅠ限制性内切酶和EcoRⅠ限制性内切酶两种。
[0028]作为本专利技术的进一步方案：所述基因工程菌根据Ⅰ型胶原蛋白氨基酸序列，取清水性的原胶原Gly
‑
X
‑
Y胶原肽段设计合成人源性胶原蛋白氨基酸序列，其中X和Y可以是任何一种氨基酸，分子量为35
‑
38kDa，等电点为9.7，同时按照毕赤酵母密码子偏好性设计对应的DNA序列。
[0029]作为本专利技术的进一步方案：所述在DNA序列中，得出氨基酸序列及对应核苷酸序列，在5
′
端添加XhoⅠ限制性内切酶切位点CTCGAG和KEX2酶切位点序列AAAAGA，3
′
端添加EcoRⅠ限制性内切酶酶切位点GAATTC，将设计的核苷酸序列进行全基因合成，并且对合成的产物进行XhoⅠ和EcoRⅠ双酶切，连接至载体重组大肠杆菌pPIC9K，获得pPIC9K
‑
COL表达载体，其次，将pPIC9K
‑
COL电转化至毕赤酵母GS115菌株，经遗传霉素及摇瓶筛选，得到重组人源性胶原蛋白基因工程菌。
[0030]一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，制备步骤如下：
[0031]S1、对人源性胶原蛋白基因工程菌进行发酵处理，在PH5.0，温度25
‑
29℃，溶氧控制大于30％的发酵环境下进行发酵处理，待发酵液湿菌重达200g/L时进行甲醇诱导，诱导时间约为48h放罐，经离心机进行固液分离，即完成人源性胶原蛋白基因工程菌的发酵工作；
[0032]S2、将尿囊素0.1％
‑
0.2％、乙酰羟脯氨酸0.1％
‑
1％、保湿因子0.3％
‑
0.6％以及余量的纯化水倒入乳化锅加热85
‑
90℃搅拌溶解均匀，并保温搅拌25
‑
40min，通过冷凝水进行降温，直至温度降低40
‑
45℃，得到原液A；
[0033]S3、将S1中发酵完成的人源性胶原蛋白基本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，其特征在于，包括以下重量百分比的原料：基因工程菌：5％
‑
8.5％；大肠杆菌0.3％
‑
1.5％；预混液5.5％
‑
9％；限制性内切酶0.5％
‑
1.2％；Ⅰ型胶原酶3.0％
‑
6.5％；毕赤酵母菌株0.2％
‑
0.7％；遗传霉素0.25％
‑
0.45％；柠檬酸缓冲液1.2％
‑
1.8％；NaCl溶液2％
‑
3％；尿囊素0.1％
‑
0.2％；乙酰羟脯氨酸0.1％
‑
1％；保湿因子0.3％
‑
0.6％；防腐剂0.5
‑
1.0％；精氨酸0.1％
‑
0.5％；其余纯化水。2.根据权利要求1所述的一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，其特征在于：所述大肠杆菌为重组大肠杆菌pPIC9K，且具体对大肠杆菌基因5709bp处的XhoⅠ位点进行突变。3.根据权利要求1所述的一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，其特征在于：所述预混液包含TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核苷三磷酸、氯化镁、PCR buffer、PCR反应增强剂、稳定剂和蓝色示踪染料。4.根据权利要求1所述的一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，其特征在于：所述限制性内切酶包括XhoⅠ限制性内切酶和EcoRⅠ限制性内切酶两种。5.根据权利要求1所述的一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，其特征在于：所述基因工程菌根据Ⅰ型胶原蛋白氨基酸序列，取清水性的原胶原Gly
‑
X
‑
Y胶原肽段设计合成人源性胶原蛋白氨基酸序列，其中X和Y可以是任何一种氨基酸，分子量为35
‑
38kDa，等电点为9.7，同时按照毕赤酵母密码子偏好性设计对应的DNA序列。6.根据权利要求5所述的一种精准配比的医用重组人源胶原蛋白修复敷料，其特征在于：所述在DNA序列中，得出氨基酸序列及对应核苷酸序列，在5
′
端添加XhoⅠ限制性内切酶切位点CTCGAG和KEX2酶切位点序列AAAAGA，3
′
端...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐意，叶金明，
申请(专利权)人：湖北特必达生物医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。