一种纳米制剂HBMn-FA及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种纳米制剂HBMn

【技术实现步骤摘要】
一种纳米制剂HBMn
‑
FA及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，特别涉及一种纳米制剂HBMn
‑
FA的制备方法。

技术介绍

[0002]细胞内游离的胞质DNA一直被宿主固有免疫系统视为潜在的信号分子，但免疫系统识别这些危险信号的机制尚不清楚。研究表明，DNA传感器环GMP
‑
AMP合成酶(cGAS)是宿主感觉胞质DNA与免疫防御之间的桥梁。干扰素基因刺激因子(STING)作为关键的连接分子位于DNA感知通路的下游，对通过刺激I型干扰素和其他细胞因子持续诱导抗肿瘤免疫至关重要。然而，STING的非特异性激活可引起广泛的炎症反应，这不利于其临床应用。STING激动剂，如cGAMP和环类二核苷酸(CDNs)，在增强免疫刺激和抗肿瘤免疫应答方面显示出良好的疗效，然而，STING激动剂较大的分子量和强极性使其难以透过细胞膜，致使细胞摄取不足，且其磷酸二酯键易被酶水解，代谢不稳定以及脱靶毒性等因素限制了其进一步的临床应用。而令人鼓舞的是，cGAS
‑
STING通路不仅能感知来自病毒和细菌的外源性危险信号，还能感知来自受损线粒体和死亡肿瘤细胞碎片的内源性信号(如dsDNA)。与核DNA不同，线粒体DNA(mtDNA)由于缺乏组蛋白的保护，更容易受到破坏分子(如活性氧，ROS)的损伤，促进其释放。同时，为了提高cGAS对DNA的敏感性，促进第二信使cGAMP的后续合成以及增强cGAMP与STING的亲和力也是特异性激活cGAS
>‑
STING通路的关键。目前，大量的研究报道Mn
2+
可以增强cGAS对dsDNA的敏感性以及增强cGAMP与STING的亲和力，从而放大STING通路的激活。与此同时，铁死亡是一种由脂质过氧化诱导的肿瘤细胞死亡的独特模式，从而提供了大量的细胞内ROS致使线粒体DNA损伤和释放以及死亡的细胞碎片胞质dsDNA释放，从而双向激活cGAS
‑
STING通路。
[0003]鉴于外源性STING激动剂的临床限制，精准实现依赖内源性信号DNA的释放特异性激活STING通路就显得极为重要。因此，有必要开发一种能够有效触发铁死亡并释放内源性信号DNA激活STING通路实现高效的肿瘤治疗的纳米制剂。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的是提供一种纳米制剂HBMn
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FA及其制备方法与应用，该纳米治疗制剂能够有效发挥铁死亡作用，产生毒性ROS，触发线粒体DNA释放，实现内源性信号特异性激活STING通路发挥抗肿瘤的疗效。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0006]在本专利技术的第一方面，提供了一种纳米制剂HBMn
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FA的制备方法，所述方法包括：
[0007]将氯化血红素溶解于碳酸铵水溶液并超声，得到氯化血红素碱性溶液；
[0008]将PLGA和PLGA
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PEG一起溶解于二氯甲烷中，得到PLGA/PLGA
‑
PEG/DCM溶液；
[0009]将所述氯化血红素碱性溶液溶解分散于所述PLGA/PLGA
‑
PEG/DCM溶液中并超声，得到混合乳液A；
[0010]将MnCl2水溶液和BSO水溶液一起溶解分散于所述PLGA/PLGA
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PEG/DCM溶液中并超
声，得到混合乳液B；
[0011]将所述混合乳液A和所述混合乳液B混合后超声，得到混合溶液C；
[0012]将所述混合溶液C加入血清白蛋白BSA水溶液中超声，后将其滴加入去离子水溶液中搅拌，待有机溶剂挥发完全后离心处理，收集得到微粒；
[0013]将所述的微粒复溶于去离子水，后加入聚乙烯亚胺搅拌，后滴加DSPE
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PEG
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FA搅拌，离心、洗涤，得到纳米制剂HBMn
‑
FA。
[0014]进一步地，所述氯化血红素碱性溶液的浓度范围为4～8mg/mL，所述碳酸铵水溶液的浓度为0.312～0.625M。
[0015]进一步地，所述PLGA的质量、PLGA
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PEG的质量与所述二氯甲烷的体积的比值为：(133～399)mg：(50～100)mg：(25～35)mL。
[0016]进一步地，所述氯化血红素碱性溶液与所述PLGA/PLGA
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PEG/DCM溶液的体积比为(125～175)：(15～24)。
[0017]进一步地，所述MnCl2、所述BSO和所述PLGA/PLGA
‑
PEG/DCM中的体积比为(0.2～0.4)：(0.2～0.4)：(2.4～3.6)。
[0018]进一步地，所述混合乳液A和所述混合乳液B的体积比为(0.5～1.0)：(2～4)。
[0019]进一步地，所述纳米粒子复溶于去离子水使其浓度为1～5mg/mL。
[0020]进一步地，所述聚乙烯亚胺与所述DSPE
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PEG
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FA的质量比为(1～3)：(2～10)。
[0021]在本专利技术的第二方面，提供了采用所述方法制备得到的纳米制剂HBMn
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FA。
[0022]在本专利技术的第三方面，提供了所述的纳米制剂HBMn
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FA在制备抗肿瘤免疫治疗的药物中的应用。
[0023]本专利技术实施例中的一个或多个技术方案，至少具有如下技术效果或优点：
[0024]本专利技术提供的一种纳米制剂HBMn
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FA及其制备方法，利用生物相容性的PLGA聚合物同时包封高效含铁催化剂Hemin、GSH生物合成抑制剂BSO和cGAS
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STING激活剂Mn
2+
，然后用DSPE
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PEG
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FA修饰制备得到纳米制剂HBMn
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FA，能够有效提高治疗剂的靶向精准性，减少对正常组织的损伤。同时在Hemin和BSO共同作用下诱导肿瘤细胞内ROS水平升高，引发严重的线粒体应激，最终诱导mtDNA释放到细胞质中，激活启动STING通路。此外，纳米治疗制剂释放的Mn
2+
可以增加cGAS对mtDNA的敏感性，促进后续第二信使cGAMP的合成，并增强cGAMP与STING的亲和力，进一步扩大cGAS
‑
STING通路的激活，从而实现高效的肿瘤治疗。基于铁死亡这种独特的细胞死亡方式触发STING通路激活不仅能够有效触发肿瘤细胞内的mtDNA释放去激活STING通路，而且还可以造成肿瘤细胞损伤，释放肿瘤细胞碎片又能进一步激活抗原呈递细胞中的STING通路，从而双向激活STING通路诱发免疫反应。这种内源性信号激活STING通路的方式不仅可以弥补STING激动剂难以递送的困难，又能实现特异性免疫反应，从而产生高效、低本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种纳米制剂HBMn
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FA的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将氯化血红素溶解于碳酸铵水溶液并超声，得到氯化血红素碱性溶液；将PLGA和PLGA
‑
PEG一起溶解于二氯甲烷中，得到PLGA/PLGA
‑
PEG/DCM溶液；将所述氯化血红素碱性溶液溶解分散于所述PLGA/PLGA
‑
PEG/DCM溶液中并超声，得到混合乳液A；将MnCl2水溶液和BSO水溶液一起溶解分散于所述PLGA/PLGA
‑
PEG/DCM溶液中并超声，得到混合乳液B；将所述混合乳液A和所述混合乳液B混合后超声，得到混合溶液C；将所述混合溶液C加入血清白蛋白BSA水溶液中超声，后将其滴加入去离子水溶液中搅拌，待有机溶剂挥发完全后离心处理，收集得到微粒；将所述的微粒复溶于去离子水，后加入聚乙烯亚胺搅拌，后滴加DSPE
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PEG
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FA搅拌，离心、洗涤，得到纳米制剂HBMn
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FA。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述氯化血红素碱性溶液的浓度范围为4～8mg/mL，所述碳酸铵水溶液的浓度为0.312～0.625M。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述PLGA的质量、PLGA

【专利技术属性】
技术研发人员：陈巍海，梁军龙，金小康，张诗曼，雒国凤，张先正，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：