对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的试剂盒及其方法技术

本发明专利技术公开了对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的试剂盒及其方法，其中，该检测方法包括提供待测溶液；将免疫探针与所述待测溶液接触，使所述免疫探针富集所述氟喹诺酮类化合物，以便得到富集后的免疫探针；以及对所述富集后的免疫探针进行定性/定量分析检测。该方法利用免疫探针进行富集提取，无需样品前处理即可进行氟喹诺酮类化合物的提取，提取方法简单，效率高。效率高。

【技术实现步骤摘要】
对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的试剂盒及其方法


[0001]本专利技术涉及分析化学领域，具体的，涉及对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]存在于食物和环境中的兽药抗生素残留可能会对人类产生不良副作用，如会产生过敏反应和细菌抗生素耐药性。因此，有必要准确、快速地监测抗生素残留水平。敞开式质谱(AMS)以其强大的定性和高通量分析能力受到研究人员的青睐，基于质谱的无标记快速检测平台的开发越来越受到关注。
[0003]由此，对食品和环境中的兽药抗生素痕量残留进行定性和定量检测的方法有待研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术的一个目的在于提出一种对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的方法，无需样品前处理、在线、快速、高通量、高灵敏、高准确率，尤其适于氟喹诺酮药物(FQs)的痕量提取和检测。
[0005]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的方法。根据本专利技术的实施例，该方法包括提供待测溶液；将免疫探针与所述待测溶液接触进行吸附提取处理，使所述免疫探针富集所述氟喹诺酮类化合物，以便得到富集后的免疫探针；以及对所述富集后的免疫探针进行定性/定量分析检测，其中，所述免疫探针包括：金属探针；氧化石墨烯层，所述氧化石墨烯层覆盖在所述金属探针端部的至少部分表面上，且所述氧化石墨烯层表面修饰链霉亲和素；抗体层，所述抗体层覆着在所述氧化石墨烯层的至少部分表面上，所述抗体层包括生物素修饰的广谱性抗体，其中，所述广谱性抗体特异性结合氟喹诺酮类化合物。
[0006]根据本专利技术实施例的对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的方法，利用免疫探针进行提取，该免疫探针在金属探针(TN)的表面覆着氧化石墨烯(GO)，GO具有大的比表面积和丰富的含氧官能团，如表面的羧基，可以为生物分子的共价偶联提供丰富的反应位点，通过氧化石墨烯可以耦合大量链霉亲和素，再通过链霉亲和素和生物素偶联，将广谱抗体吸附在金属探针表面，抗体的固定量大，检测的准确性和精密度高；并且，该检测方法无需样品前处理即可进行氟喹诺酮类化合物的提取，提取方法简单，效率高。
[0007]另外，根据本专利技术上述实施例的对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的方法，还可以具有如下附加的技术特征：
[0008]根据本专利技术的实施例，所述免疫探针的制备方法包括：使金属探针端部表面覆着粘附液，并与氧化石墨烯粉末进行第一接触，以便得到氧化石墨烯覆着的探针；对探针上覆着的所述氧化石墨烯的羧基进行活化处理，以便得到活化后的探针；将所述活化后的探针与链霉亲和素进行第二接触，以便使链霉亲和素与活化后的所述氧化石墨反应，以便得到
链霉亲和素修饰的探针；将所述链霉亲和素修饰的探针进行蛋白封闭处理，以便得到封闭后的探针；以及将封闭后的探针与生物素修饰的广谱性抗体进行第三接触，以便获得所述氟喹诺酮类化合物免疫探针，其中，所述广谱性抗体特异性结合氟喹诺酮类化合物。
[0009]根据本专利技术的实施例，所述氧化石墨烯粉末的厚度为0.8
‑
1.2纳米，宽度为1
‑
15微米。
[0010]根据本专利技术的实施例，利用1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)进行所述活化处理。
[0011]根据本专利技术的实施例，所述第二接触的时间为0.5
‑
1.5小时。
[0012]根据本专利技术的实施例，所述第三接触的时间为15
‑
45分钟，温度为30
‑
45摄氏度。
[0013]根据本专利技术的实施例，所述金属探针为钨针。
[0014]根据本专利技术的实施例，所述钨针的长度为2
‑
10厘米，尖端1
‑
10微米。
[0015]根据本专利技术的实施例，所述氧化石墨烯层的厚度1
‑
3微米。
[0016]根据本专利技术的实施例，所述广谱性抗体的固定化量为10
‑
25微克/根。
[0017]根据本专利技术的实施例，所述提取处理的时间为5
‑
15分钟，优先地，为10分钟。
[0018]根据本专利技术的实施例，所述提取处理是在pH5
‑
8的条件下进行的。
[0019]根据本专利技术的实施例，所述氟喹诺酮类化合物的浓度不高于20ng/mL。
[0020]根据本专利技术的实施例，所述氟喹诺酮类化合物为选自诺氟沙星(NOF)、依诺沙星(ENO)、培氟沙星(PEF)、氧氟沙星(OFL)、洛美沙星(LOM)和沙拉沙星(SAR)中的至少一种。
[0021]根据本专利技术的实施例，所述分析检测为敞开式电喷雾质谱检测。
[0022]根据本专利技术的实施例，所述敞开式电喷雾质谱检测的所述喷雾解吸溶剂为含5％甲酸的甲醇溶液。
[0023]根据本专利技术的实施例，所述敞开式电喷雾质谱的检测条件为：扫描方式：ESI
+
；检测方式：多反应监测(MRM)；气帘气压力：30；驻留时间：100毫秒。
[0024]根据本专利技术的实施例，所述免疫探针的尖端距离所述敞开式电喷雾质谱进样口2
‑
10mm，优选地，为5mm。
[0025]根据本专利技术的另一方面，本专利技术提供了一种对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的试剂盒。根据本专利技术的实施例，该试剂盒包括：前述的免疫探针，所述免疫探针是利用前述的方法制备的，所述免疫探针包括：金属探针；氧化石墨烯层，所述氧化石墨烯层覆盖在所述金属探针端部的至少部分表面上，且所述氧化石墨烯层表面修饰链霉亲和素；抗体层，所述抗体层覆着在所述氧化石墨烯层的至少部分表面上，所述抗体层包括生物素修饰的广谱性抗体，其中，所述广谱性抗体特异性结合氟喹诺酮类化合物。由此，该试剂盒利用免疫探针对氟喹诺酮类化合物具有特异性吸附和富集作用，提取富集的特异性强，无需样品前处理，提取步骤简单，检测灵敏度高，尤其适于氟喹诺酮药物(FQs)的痕量提取和检测。
[0026]根据本专利技术的实施例，该试剂盒进一步包括：喷雾解吸溶剂，免疫探针。
[0027]根据本专利技术的实施例，所述氟喹诺酮类化合物为选自诺氟沙星(NOF)、依诺沙星(ENO)、培氟沙星(PEF)、氧氟沙星(OFL)、洛美沙星(LOM)和沙拉沙星(SAR)中的至少一种。
[0028]本专利技术的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。
附图说明
[0029]本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：
[0030]图1显示了根据本专利技术一个实施例的免疫探针的结构示意图；
[0031]图2显示了根据本专利技术一个实施例的喷雾次数与比例的关系示意图，其中，(a)NOF；(b)ENO；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对氟喹诺酮类化合物进行定性/定量检测的方法，其特征在于，包括：提供待测溶液；将免疫探针与所述待测溶液接触进行吸附提取处理，使所述免疫探针富集所述氟喹诺酮类化合物，以便得到富集后的免疫探针；以及对所述富集后的免疫探针进行定性/定量分析检测，其中，所述免疫探针包括：金属探针；氧化石墨烯层，所述氧化石墨烯层覆盖在所述金属探针端部的至少部分表面上，且所述氧化石墨烯层表面修饰链霉亲和素；抗体层，所述抗体层覆着在所述氧化石墨烯层的至少部分表面上，所述抗体层包括生物素修饰的广谱性抗体，其中，所述广谱性抗体特异性结合氟喹诺酮类化合物。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫探针的制备方法包括：使金属探针端部表面覆着粘附液，并与氧化石墨烯粉末进行第一接触，以便得到氧化石墨烯覆着的探针；对探针上覆着的所述氧化石墨烯的羧基进行活化处理，以便得到活化后的探针；将所述活化后的金属探针与链霉亲和素进行第二接触，以便使链霉亲和素与活化后的所述氧化石墨烯反应，以便得到链霉亲和素修饰的探针；将所述链霉亲和素修饰的探针进行蛋白封闭处理，以便得到封闭后的探针；以及将封闭后的探针与生物素修饰的广谱性抗体进行第三接触，以便获得所述氟喹诺酮类化合物免疫探针，其中，所述广谱性抗体特异性结合氟喹诺酮类化合物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述氧化石墨烯粉末的厚度为0.8
‑
1.2纳米，宽度为1
‑
15微米，任选地，利用1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)进行所述活化处理，任选地，所述第二接触的时间为0.5
‑
1.5小时，任选地，所述第三接触的时间为15
‑
45分钟，温度为30
‑
45摄氏度，任选地，所述金属探针为钨针，任选地，所述钨针的长度为2
‑
10厘米，尖端1
‑
10微米，任选地，所述氧化石墨烯层的厚度1
‑
3微米，任选地，所述广谱性抗体的固定化量为10
‑
25微克/根。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取处理的时间为5
...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈凤明，王秀娟，杨敏莉，吴玉杰，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：