一种外切型褐藻胶裂解酶及其编码基因和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种外切型褐藻胶裂解酶及其编码基因和应用，本发明专利技术以弧菌Vibrio furnissii C1的基因组DNA为模板，设计并合成引物，通过PCR扩增外切褐藻胶裂解酶基因，将该基因克隆入pET28b表达载体上，在大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达，采用镍柱亲和层析纯化得到较高纯度的重组外切褐藻胶裂解酶蛋白；该酶的最适温度为25℃，最适pH为7.0，是一种具有适冷性且pH范围广泛的中性酶；另外，该酶的pH敏感度较高，pH为6.0时酶活力大大下降，pH为5.0时即可结束反应，可利用其高pH敏感度来控制酶促反应的启动与终止，从而精确控制单糖的生产，具有良好的工业应用前景。具有良好的工业应用前景。具有良好的工业应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种外切型褐藻胶裂解酶及其编码基因和应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体是一种外切型褐藻胶裂解酶及其编码基因和应用。

技术介绍

[0002]褐藻胶是存在于褐藻细胞壁中的一种高分子多糖，由β
‑
D
‑
甘露糖醛酸(β
‑
D
‑
mannuronate acid，M)与α
‑
L
‑
古罗糖醛酸(α
‑
L
‑
guluronic acid，G)两种单体随机排列组成的多聚物，这两种单体通过1,4糖苷键连接能形成三种不同形式的多糖片段：聚βD甘露糖醛酸(Polymannuronic acid，PolyM)片段、聚αL古罗糖醛酸(Polyguluronic acid，PolyG)片段以及二者杂合片段(PolyMG)。在国内，褐藻胶的生产主要依靠褐藻的人工养殖，以从褐藻中提取商业化的褐藻胶；褐藻胶常以钠盐的形式存在，如海藻酸钠。除褐藻外，少数细菌如假单胞菌属(Pseudomonas)、固氮菌属(Azotob本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外切型褐藻胶裂解酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。2.编码权利要求1所述的外切型褐藻胶裂解酶的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。3.一种重组载体，其特征在于，其含有权利要求2所述的一种编码外切型褐藻胶裂解酶的基因。4.一种重组菌，其特征在于，其含有权利要求3所述的重组载体。5.权利要求1所述的一种外切型褐藻胶裂解酶的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1，获取弧菌Vibrio furnissii C1的全基因组DNA作为模板，所述模板含褐藻胶裂解酶基因VAL1，所述褐藻胶裂解酶基因VAL1的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示；S2，设计并合成扩增褐藻胶裂解酶基因VAL1的引物，其引物序列如下：上游引物VAL1F:5
’
GTACCATGGTGAAACACAACGTACTAGTAG
‑3’
(NcoⅠ)；下游引物VAL1R:5
’
GTACTCGAGCTTTCCGTTTAGCTTCAAC
‑3’
(XhoⅠ)；S3，PCR扩增及重组质粒的构建：采用S2中的引物以S1中的基因组DNA为模板进行扩增...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈梅，李忠海，闫梦迪，孙飞，姚艳艳，常丽荣，杨晓斌，
申请(专利权)人：威海长青海洋科技股份有限公司荣成爱伦湾食品有限公司，
类型：发明
国别省市：