一种维持组织细胞活性的长效保存液及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种维持组织细胞活性的长效保存液及应用，包括以下组分：Glutamax培养添加物；青霉素

【技术实现步骤摘要】
一种维持组织细胞活性的长效保存液及应用


[0001]本专利技术涉及肿瘤类器官培养
，特别涉及一种维持组织细胞活性的长效保存液及应用。

技术介绍

[0002]类器官可由干细胞、成体干细胞或诱导干细胞经过三维培养分化、发育而成，可高度模拟原位组织的生理结构、功能，可广泛用于药物开发、疾病建模等领域。目前肿瘤类器官的构建培养主要基于肿瘤组织的原代培养，而是否能形成肿瘤类器官与肿瘤组织内细胞活性有很强的相关性。但由于肿瘤组织离体后，血液供应中断，与周围组织连接中断，组织内的细胞往往因缺氧、营养缺乏、氧化应激、失巢凋亡甚至细菌大量繁殖而导致细胞活性迅速下降，所以类器官培养通常要求组织离体后4小时内送抵实验室，而医院与实验室通常距离较远，因此需要一种长效的样本保存液保存肿瘤样本的活性。目前通用的类器官培养用组织保存液应用于组织长距离运输场景时，往往细胞活性低，导致培养获得的类器官数量少，细胞增殖能力弱，当样本量受限时难以满足后续实验需求。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的在于提供一种维持组织细胞活性的长效保存液及应用，以克服现有技术中的不足。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
[0005]本申请公开了一种维持组织细胞活性的长效保存液，包括以下组分：Glutamax培养添加物；青霉素
‑
链霉素
‑
两性霉素B；Primocin；Y
‑
27632；醋酸拉米普肽；2
‑
(4
‑
羟基苯基)甲基
‑
Β
‑
D
‑
葡萄糖苷；山奈酚
‑
4'
‑
O
‑
乙酰氧基丙酯；黄精多糖；海藻糖；α
‑
硫辛酸；溶剂为Hibernate
‑
A培养液。
[0006]作为优选，各组分的含量如下：0.5～2x的Glutamax培养添加物；0.5～3x的青霉素
‑
链霉素
‑
两性霉素B；0.5～3x的Primocin；5～20μM的Y
‑
27632；20～100μM的醋酸拉米普肽；10～20μM的2
‑
(4
‑
羟基苯基)甲基
‑
Β
‑
D
‑
葡萄糖苷；10～30μM的山奈酚
‑
4'
‑
O
‑
乙酰氧基丙酯；10～30mM的黄精多糖；20～80mM的海藻糖；0.1～0.4mM的α
‑
硫辛酸。
[0007]作为优选，所述保存液在温度2～8℃下，对肿瘤组织的有效保存时间大于等于72小时。
[0008]作为优选，所述保存液在空气CO2浓度下维持pH在7.1～7.5之间的时间大于等于48小时。
[0009]本专利技术还公开了一种维持组织细胞活性的长效保存液的应用，肿瘤组织离体后，浸入所述保存液中，置于温度2～8℃下保存。
[0010]本专利技术的有益效果：
[0011]1、使用方法简便，适用于手术室、内镜室等临床场景。
[0012]2、保存液的pH在环境CO2浓度下仍可维持稳定，对组织保存液所盛容器敞口时间
无约束，可适应取样的场景变化。
[0013]3、对肿瘤组织有效保存时间达到72小时以上，并能维持细胞活性与增殖能力，可有效应对国内异地医院样本的运输要求。
[0014]本专利技术的特征及优点将通过实施例结合附图进行详细说明。
附图说明
[0015]图1为根据实施例2不同保存液下肺腺癌组织保存96h后单位重量细胞总量柱状图；
[0016]图2为根据实施例2不同保存液下肺腺癌组织保存96h后细胞活率柱状图；
[0017]图3为根据实施例3不同保存液下胃癌组织保存72h后类器官培养第5天明场图；
[0018]图4为实施例3人胃癌组织不同保存液保存72小时后类器官培养第5天ki
‑
67阳性细胞比例柱状图；
[0019]图5为根据实施例4保存液保存结直肠癌组织72h后类器官培养第5天明场图；
[0020]图6为根据实施例5保存液保存食管癌组织72h后类器官培养第5天明场图；
具体实施方式
[0021]为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面通过附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。但是应该理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限制本专利技术的范围。此外，在以下说明中，省略了对公知结构和技术的描述，以避免不必要地混淆本专利技术的概念。
[0022]本专利技术一种维持组织细胞活性的长效保存液，包括以下组分含量：0.5～2x的Glutamax；0.5～3x的青霉素
‑
链霉素
‑
两性霉素B；0.5～3x的Primocin；5～20μM的Y
‑
27632；20～100μM的醋酸拉米普肽；10～20μM的2
‑
(4
‑
羟基苯基)甲基
‑
Β
‑
D
‑
葡萄糖苷；10～30μM的山奈酚
‑
4'
‑
O
‑
乙酰氧基丙酯；10～30mM的黄精多糖；20～80mM的海藻糖；0.1～0.4mM的α
‑
硫辛酸；溶剂为Hibernate
‑
A培养液。
[0023]其中Hibernate
‑
A为一种市售培养液的商品名，具体可在Thermofisher Gibco等地方购买获得，货号为A1247501；Glutamax为一种市售培养液添加物，具体可在Thermofisher Gibco等地方购买获得，货号为35050061；青霉素
‑
链霉素
‑
两性霉素B为一种市售培养液添加物，具体可在索莱宝等地方购买获得，货号为P7630；Primocin一种市售培养液添加物，具体可在Invivogen等地方购买获得，货号为ant
‑
pm
‑
05；Advance DMEM/F12为一种市售培养液的商品名，具体可在Thermofisher Gibco等地方购买获得，货号为12634028；Hepes为一种市售培养液添加物，具体可在Thermofisher Gibco等地方购买获得，货号为15630106实施例1
[0024]本实施例中考察了本专利技术一种维持组织细胞活性的长效保存液在空气CO2浓度下的pH变化：
[0025]预先准备保存液，包括：50ml的Hibernate
‑
A培养液、2mM的Glutamax、1x的青霉素
‑
链霉素
‑
两性霉素B；1x的Primocin；10μM的Y
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种维持组织细胞活性的长效保存液，其特征在于，包括以下组分：Glutamax培养添加物；青霉素
‑
链霉素
‑
两性霉素B；Primocin；Y
‑
27632；醋酸拉米普肽；2
‑
(4
‑
羟基苯基)甲基
‑
Β
‑
D
‑
葡萄糖苷；山奈酚
‑
4'
‑
O
‑
乙酰氧基丙酯；黄精多糖；海藻糖；α
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硫辛酸；溶剂为Hibernate
‑
A培养液。2.如权利要求1所述的一种维持组织细胞活性的长效保存液，其特征在于：各组分的含量如下：0.5~2x的Glutamax培养添加物；0.5~3x的青霉素
‑
链霉素
‑
两性霉素B；0.5~3x的Primocin；5~2...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖红江，解翠薇，王丰，唐为东，
申请(专利权)人：杭州济扶科技有限公司，
类型：发明
国别省市：