一种香菇双单杂交装置及方法制造方法及图纸

本发明专利技术公开了一种香菇双单杂交装置及方法，涉及食用菌双单杂交技术领域，该装置包括培养皿，还包括设置在培养皿中心处的杂交分隔装置，杂交分隔装置内设置有上下贯通的腔体，杂交分隔装置的侧壁下端开设有若干与腔体连通的槽口。本发明专利技术的操作及装置的使用，可以省去单孢分离和杂交后的镜检，通过将单核菌丝进行分类，并利用杂交装置进行杂交，可以大大提高育种效率。高育种效率。高育种效率。

【技术实现步骤摘要】
一种香菇双单杂交装置及方法


[0001]本专利技术涉及食用菌双单杂交
，具体来讲是一种香菇双单杂交装置及方法。

技术介绍

[0002]现有的香菇双单杂交技术，效率极低，同时杂交后容易出现杂交失败现象，需要对所得菌丝进行镜检确定是否杂交成功，同时镜检后的双核菌丝也可能是原亲本菌丝。

技术实现思路

[0003]针对现有技术中存在的缺陷，本专利技术的目的在于提供一种香菇双单杂交装置及方法，本专利技术的操作及装置的使用，可以省去单孢分离和杂交后的镜检，通过将单核菌丝进行分类，并利用杂交装置进行杂交，可以大大提高育种效率。
[0004]为达到以上目的，本专利技术采取的技术方案是：一种香菇双单杂交装置，包括培养皿，还包括设置在培养皿中心处的杂交分隔装置，所述杂交分隔装置内设置有上下贯通的腔体，所述杂交分隔装置的侧壁下端开设有若干与腔体连通的槽口。
[0005]在上述技术方案的基础上，所述杂交分隔装置呈圆台形结构，且杂交分隔装置的高度与培养皿内高度相同。
[0006]在上述技术方案的基础上，所述培养皿的直径为60mm，所述杂交分隔装置的上下端直径分别为16mm和20mm，槽口的数量为2个、3个或4个。
[0007]在上述技术方案的基础上，所述培养皿的直径为90mm，所述杂交分隔装置的上下端直径分别为25mm和30mm，槽口的数量为4个或6个。
[0008]在上述技术方案的基础上，所述槽口的宽度为0.5mm
±
0.1mm、槽口的高度0.5mm
±
0.1mm。
[0009]本专利技术还提供一种基于上述装置的香菇双单杂交方法，包括以下步骤：
[0010]步骤S1.选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子制成孢子悬浮液，并稀释到10
‑
4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存；
[0011]步骤S2.使用前提前1天取出孢子液放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在高温PDA平板上25℃培养，每12个小时观察一次，待孢子萌发菌丝呈放射状时及时挑取至PDA试管中，25℃培养5
‑
7d，并测量单核菌丝长速；
[0012]步骤S3.培养好的单核菌丝根据菌丝长速及长势分成四类：单核菌丝a菌丝生长速度快，菌丝粗壮，气生菌丝旺盛；单核菌丝b菌丝生长速度较快，菌丝较粗壮，气生菌丝较旺盛；单核菌丝c菌丝生长速度快，气生菌丝较少；单核菌丝d菌丝生长速度慢，气生菌丝少；根据分类计算各类单核菌丝的日均长速，并淘汰单核菌丝d；
[0013]步骤S4.亲本双核菌丝在育种前半个月开始活化，活化后菌丝接入PDA平板培养基中25℃培养，并测量双核菌丝日均长速；
[0014]步骤S5.将培养皿和杂交分隔装置分开包装，在126℃下灭菌30min，灭菌后放入烘箱烘干，超净工作台中将PDA培养基均匀倒入烘干的培养皿中，快速将杂交分隔装置放入平板中心，待培养基冷却成型后完成接种装置的制作；
[0015]步骤S6.将准备好的双核菌丝平板培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用打孔器取直径10mm菌丝块，穿过杂交分隔装置放于培养皿中心，接种装置封口25℃培养；
[0016]步骤S7.待培养皿中心双核菌丝接种块菌丝均匀萌发合要求，进行双单杂交，将单核菌丝试管培养基表面的气生菌丝和基内菌丝全部用无菌接种铲刮掉，用接种针挑取同类型单核菌丝块放于距离杂交分隔装置槽口一定距离的地方，25℃培养直到双核菌丝和单核菌丝长交接处出现明显菌丝隆起，在双核菌丝与单核菌丝形成直线指向单核菌丝方向，靠近培养皿边缘挑取菌丝，获得杂交菌丝。
[0017]在上述技术方案的基础上，步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿的直径为90mm，应同时满足下列公式：
[0018]公式1：T1×
X1＜20
[0019]公式2：(10
÷
X1‑
T1)
×
X
(a、b、c)
＜10
[0020]公式3：X
(a、b、c)
×
T2＜(T1+T2)
×
X1[0021]其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为X
a
、X
b
、X
c
。
[0022]在上述技术方案的基础上，步骤S6中，培养时间以双核菌丝和单核菌丝生长速度而定，当培养皿1的直径为60mm，应同时满足下列公式：
[0023]公式1：T1×
X1＜20
[0024]公式2：(5
÷
X1‑
T1)
×
X
(a、b、c)
＜5
[0025]公式3：X
(a、b、c)
×
T2＜(T1+T2)
×
X1[0026]其中，杂交开始双核菌丝提前培养时间为T1，单核菌丝和双核菌丝共培养时间为T2，双核菌丝日均长速为X1，各类单核菌丝日均长速为X
a
、X
b
、X
c
。
[0027]在上述技术方案的基础上，步骤S2中，所述高温PDA为115—120℃，30min灭菌后所得PDA培养基。
[0028]本专利技术的有益效果在于：本专利技术的操作及装置的使用，可以省去单孢分离和杂交后的镜检，通过将单核菌丝进行分类，并利用杂交装置进行杂交，可以大大提高育种效率。
附图说明
[0029]图1为本专利技术实施例中香菇双单杂交装置的俯视图；
[0030]图2为本专利技术实施例中杂交分隔装置的俯视图；
[0031]图3为本专利技术实施例中双单杂交过程中的香菇双单杂交装置示意图。
[0032]附图标记：
[0033]1‑
培养皿；2
‑
杂交分隔装置；21
‑
槽口。
具体实施方式
[0034]下面详细描述本专利技术的实施例，所述的实施例示例在附图中示出，其中自始至终
相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。
[0035]在本专利技术的描述中，需要说明的是，对于方位词，如有术语“中心”，“横向(X)”、“纵向(Y)”、“竖向(Z)”、“长度”、“宽度”、“厚度”、“上”、“下”、“前”、“后”、“左”、“右”、“竖直”、“水平”、“顶”、“底”、“内”、“外”、“顺时针”、“逆时针”等指示方位和位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于叙述本专利技术和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定方位构造和操作，不能理解为限制本专利技术的具体保护范围。
[0036]此外，如有术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种香菇双单杂交装置，包括培养皿(1)，其特征在于：还包括设置在培养皿(1)中心处的杂交分隔装置(2)，所述杂交分隔装置(2)内设置有上下贯通的腔体，所述杂交分隔装置(2)的侧壁下端开设有若干与腔体连通的槽口(21)。2.如权利要求1所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述杂交分隔装置(2)呈圆台形结构，且杂交分隔装置(2)的高度与培养皿(1)内高度相同。3.如权利要求2所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述培养皿(1)的直径为60mm，所述杂交分隔装置(2)的上下端直径分别为16mm和20mm，槽口(21)的数量为2个、3个或4个。4.如权利要求2所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述培养皿(1)的直径为90mm，所述杂交分隔装置(2)的上下端直径分别为25mm和30mm，槽口(21)的数量为4个或6个。5.如权利要求1所述的香菇双单杂交装置，其特征在于：所述槽口(21)的宽度为0.5mm
±
0.1mm、槽口(21)的高度0.5mm
±
0.1mm。6.基于权利要求1～5任一所述装置的香菇双单杂交方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤S1.选择无爆发性出菇、出菇较均匀且菇形较好的香菇菌棒；在上述菌棒中选择菇形完整刚开伞的香菇进行孢子收集，收集的孢子制成孢子悬浮液，并稀释到10
‑
4倍，得到育种用孢子液，放于4℃冰箱中暂存；步骤S2.使用前提前1天取出孢子液放于25℃培养箱中，吸取0.2ml孢子液均匀涂布在高温PDA平板上25℃培养，每12个小时观察一次，待孢子萌发菌丝呈放射状时及时挑取至PDA试管中，25℃培养5
‑
7d，并测量单核菌丝长速；步骤S3.培养好的单核菌丝根据菌丝长速及长势分成四类：单核菌丝a菌丝生长速度快，菌丝粗壮，气生菌丝旺盛；单核菌丝b菌丝生长速度较快，菌丝较粗壮，气生菌丝较旺盛；单核菌丝c菌丝生长速度快，气生菌丝较少；单核菌丝d菌丝生长速度慢，气生菌丝少；根据分类计算各类单核菌丝的日均长速，并淘汰单核菌丝d；步骤S4.亲本双核菌丝在育种前半个月开始活化，活化后菌丝接入PDA平板培养基中25℃培养，并测量双核菌丝日均长速；步骤S5.将培养皿(1)和杂交分隔装置(2)分开包装，在126℃下灭菌30min，灭菌后放入烘箱烘干，超净工作台中将PDA培养基均匀倒入烘干的培养皿(1)中，快速将杂交分隔装置(2)放入平板中心，待培养基冷却成型后完成接种装置...

【专利技术属性】
技术研发人员：常堃，李扬，李靓靓，蔡婧，陈丽潇，吴平华，李军，罗义，
申请(专利权)人：十堰市农业科学院，
类型：发明
国别省市：