一种铜绿假单胞菌噬菌体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种铜绿假单胞菌噬菌体及其应用，属于噬菌体技术领域。本发明专利技术分离获得一种铜绿假单胞菌噬菌体，命名为vBP_PaeS_HP1，于2022年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 20221150；本发明专利技术的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1对铜绿假单胞菌Pae

【技术实现步骤摘要】
一种铜绿假单胞菌噬菌体及其应用


[0001]本专利技术属于噬菌体
，具体涉及一种铜绿假单胞菌噬菌体vB_PaeS_HP1及其应用。

技术介绍

[0002]铜绿假单胞菌(P.Aeruginosa,Pae)又称绿脓杆菌，是一种常见的革兰氏阴性致病菌。它在自然界中分布广泛，可利用各种碳源和氨化化合物作为氧源，具有高度可塑性和利用多种营养的能力，可快速的在不同的环境中定植和繁殖。Pae可定植于人体的肺部、尿道、眼睛等部位，感染后易引起败血症、呼吸道疾病、尿路梗塞等疾病，可对烧伤病人和囊性纤维化患者带来毁灭性伤害，给人民健康安全带来极大威胁。
[0003]有研究发现高龄患者、糖尿病患者、在ICU病房治疗的患者是感染Pae的高危人群，目前治疗Pae感染的主要手段仍是抗生素，患者易产生耐药性，死亡率高，因此探索一种合理有效的抗生素替代疗法对治疗Pae感染具有重要意义。
[0004]噬菌体具有裂解能力强、繁殖快、成本低、不易产生耐药性等特点，不仅可以裂解菌体还可以增加菌体对多种抗生素的敏感性，有多项研究表明采用噬菌体和抗生素联合治疗比单独使用两种治疗方案效果好的多。目前已经有多个噬菌体疗法成功应用于临床的案例，故噬菌体疗法被认为是一种最具希望用来对抗日益严重的耐药细菌的生物防控手段。

技术实现思路

[0005]鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种可以高效裂解铜绿假单胞菌的噬菌体及其应用，通过噬菌体治疗多重耐药Pae感染，解决抗生素滥用问题，降低Pae感染病死率，为患者的治疗提供一种高效、安全的选择。
[0006]本专利技术目的是通过以下方式实现：
[0007]本专利技术提供一种铜绿假单胞菌噬菌体(Pseudomonas aeruginosa phase)
[0008]vBP_PaeS_HP1，所述铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1的保藏编号为CCTCC NO：M20221150，于2022年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号。
[0009]基于上述技术方案，进一步地，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1是从医院未处理的污水中分离得到，以铜绿假单胞菌为宿主。
[0010]基于上述技术方案，进一步地，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1属于短尾噬菌体科，具有多面体头部，直径约为75nm，尾巴长度约为53nm；基因组全长40752bp，无毒力基因和溶原基因；效价数量等级为10
10
，效价较高。
[0011]基于上述技术方案，进一步地，通过一步生长曲线表征，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1的潜伏期为30min，裂解期为50min，噬菌体vBP_PaeS_HP1的最适生长温度为37℃，
‑
4℃时停止生长，可长期保存于
‑
80℃，噬菌体vBP_PaeS_HP1适合生长在中性环境中，在pH为6
‑
8的培养基中作用1小后，效价维持在109‑
10
10
；在pH为2、12时，仍有活性，酸碱
耐受范围较宽；噬菌体vBP_PaeS_HP1可高效裂解铜绿假单胞菌，最佳感染复数为1；噬菌体vBP_PaeS_HP1对氯仿不敏感，氯仿处理前后效价数量等级均为10
10
，因此在制备噬菌体制剂时，可加入氯仿作为附加剂。
[0012]本专利技术另一方面提供所述铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1的用途，所述用途包括在制备铜绿假单胞菌抑制剂或铜绿假单胞菌消毒剂中的用途和在制备治疗铜绿假单胞菌感染的药物或生物制剂中的用途。
[0013]基于上述技术方案，进一步地，所述铜绿假单胞菌包括多重耐药铜绿假单胞菌。
[0014]基于上述技术方案，进一步地，所述的治疗铜绿假单胞菌感染的药物或生物制剂与抗生素联合使用。
[0015]基于上述技术方案，进一步地，所述的抗生素包括β
‑
内酰胺酶类抗生素、氨基糖苷类抗生素和喹诺酮类抗生素。
[0016]基于上述技术方案，进一步地，所述药物或生物制剂中包括药学上可接受的辅料。
[0017]基于上述技术方案，进一步地，所述的药学上可接受的辅料包括吸附载体。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0019](1)本专利技术从烧伤感染患者的脓液中分离得到一株多重耐药铜绿假单胞菌Pae
‑
01，以此为宿主从医院未经处理的污水中筛选出噬菌体vBP_PaeS_HP1，该噬菌体可以有效裂解多重耐药铜绿假单胞菌Pae
‑
01，为医院治疗铜绿假单胞菌感染提供噬菌体来源。
[0020](2)本专利技术提供的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1具有良好的温度耐受性和酸碱耐受性。
[0021](3)本专利技术提供的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1具有较强的裂解活性，1小时内就能表现出明显的裂解效果。
[0022](4)本专利技术提供的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1在制备用于医院环境消毒和其他环境消毒的噬菌体消毒剂中具有良好的应用前景。
[0023](5)本专利技术提供的铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1经全基因组检测无毒力基因和溶原基因，保障了噬菌体制剂在使用过程中的安全性，功能蛋白功能注释结果中发现编码穿孔素、溶菌酶的开放阅读框，保证了噬菌体制剂的有效性。
附图说明
[0024]为了更清楚地说明本专利技术实施例，下面将对实施例涉及的附图进行简单地介绍。
[0025]图1为铜绿假单胞菌Pae
‑
01的菌落生长状态图；
[0026]图2为噬菌斑形态图；
[0027]图3为噬菌体的透射电镜图；
[0028]图4为噬菌体的温度敏感性曲线图；
[0029]图5为噬菌体的酸碱敏感性曲线图；
[0030]图6为噬菌体的一步生长曲线图；
[0031]图7为噬菌体电泳检测图。
具体实施方式
[0032]下面结合实施例对本专利技术进行详细的说明，但本专利技术的实施方式不限于此，显而
易见地，下面描述中的实施例仅是本专利技术的部分实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，获得其他的类似的实施例均落入本专利技术的保护范围。
[0033]以下实例中，液体LB培养基的配制方法为：用电子天平精密称取10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10gNaCl于容器中定容至1L，调pH至7.0，放置真空高压灭菌柜中，121℃灭菌20分钟。
[0034]固体LB培养基的配制方法为：配置过程同上述液体LB培养基，并按照1.5％的比例加入15g琼脂，此过程需要加热并不断搅拌，以防止琼脂糊底。
[0035]半固体LB培养基的配制方法为：配置过程同上述液体LB培养基，并按照0.7％的比例加入7g琼脂，加热搅拌后装瓶灭菌。
[0036]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种铜绿假单胞菌噬菌体(Pseudomonas aeruginosa phase)vBP_PaeS_HP1，其特征在于，所述铜绿假单胞菌噬菌体vBP_PaeS_HP1的保藏编号为CCTCC NO：M20221150，于2022年7月21日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为：湖北省武汉市武昌区八一路299号。2.根据权利要求1所述的铜绿假单胞菌噬菌体(Pseudomonas aeruginosa phase)vB_PaeS_HP1，其特征在于，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vB_PaeS_HP1属于短尾噬菌体科，具有多面体头部，无毒力基因和溶原基因，效价数量等级≥109。3.根据权利要求1所述的铜绿假单胞菌噬菌体(Pseudomonas aeruginosa phase)vB_PaeS_HP1，其特征在于，所述的铜绿假单胞菌噬菌体vB_PaeS_HP1的潜伏期为20～40min，裂解期为40～60min，适宜生长的温度范围为0～60℃，适宜生长的pH范围为4
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：耿慧君，王晓波，王兴梅，张治然，刘宇鹏，杨鹏，于喆，高婕，冉令凤，尤建嵩，
申请(专利权)人：艾美诚信生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：