一种靶向抗双链DNA抗体的D型多肽及其在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用技术方案

本发明专利技术公开了一种靶向抗双链DNA抗体的D型多肽及其在制备系统性红斑狼疮的治疗药物中的应用。本发明专利技术通过体外及体内验证该D型多肽的靶向结合活性，抗酶解稳定性和对狼疮肾炎的改善效果。经实验结果验证，该多肽D

【技术实现步骤摘要】
一种靶向抗双链DNA抗体的D型多肽及其在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物制药
，具体涉及一种靶向抗双链DNA抗体的D型多肽及其在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用。

技术介绍

[0002]系统性红斑狼疮是一种典型的系统性自身免疫性疾病，多见于生育期女性，常有多系统多脏器损害，可累及关节、皮肤、肾脏、肺脏等多种器官，病情严重者可危及生命。其中，狼疮肾炎是系统性红斑狼疮最常见、最严重的并发症之一，且抗双链DNA抗体是导致狼疮肾炎的最关键发病机制之一。抗双链DNA抗体通过与肾小球抗原的间接或直接结合而诱导肾脏损伤，与肾脏抗原的交叉反应则会激活补体级联反应，调节基因表达，促进细胞增殖，诱导肾小球生长细胞表型变化，导致狼疮肾炎的发生。此外，抗双链DNA抗体还能诱导肾小管上皮肌成纤维细胞的分化，增加转化生长因子
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β1的表达，促进肾小管上皮细胞可溶性纤维连接蛋白和胶原的合成，诱导肾脏纤维化，加重狼疮肾炎病情，降低患者生存率。然而，目前狼疮肾炎的常规治疗疗效和安全性均不尽人意，当前的治疗方案以细胞毒性药物和皮质类固醇等非靶向性治疗为主，多数药物副作用明显，存在严重不良反应的风险，包括血细胞减少、感染和恶性肿瘤的发生等。近年来，B细胞靶向生物制剂如靶向B细胞表面抗原或B细胞刺激因子的生物制剂，可在一定程度上改善狼疮肾炎病情，然而其对B细胞的非特异性清除往往会干扰正常的免疫系统，限制了其临床的应用。因此，针对狼疮肾炎的治疗，迫切需要开发不依赖于传统药物、具有特异性新靶点的全新制剂，以缓解肾炎病情，改善患者预后。
[0003]鉴于抗双链DNA抗体在狼疮肾炎发病中的重要作用，开发抗双链DNA抗体的特异性抑制剂是一个有效的干预选择。小分子多肽可以模拟DNA的抗原性，通过与DNA竞争结合位点来阻断抗双链DNA抗体与自身抗原或组织的结合，减轻相关的组织损伤。当前，国内外针对狼疮肾炎致病抗体所设计的DNA模拟肽，仅由单一亚型的抗双链DNA抗体筛选而得，因此血清筛选时易因抗原识别谱漂移引起偏差。而根据小鼠及狼疮患者不同亚类抗双链DNA抗体所筛选的多肽，则能够靶向抗双链DNA抗体的不同亚型，更广泛的抑制抗双链DNA抗体的致病效应，大大减轻肾脏组织的损伤。
[0004]由于小分子多肽在体内易被蛋白酶降解失去活性，存在半衰期短，需要多次给药等缺点，使多肽药物难以推广应用。且由于生物体内的蛋白质均由L型氨基酸组成，通常以L型多肽为研究对象，但是L型多肽会由于体内水解酶的存在而导致其抗酶切能力和生物稳定性相对较差。

技术实现思路

[0005]为了克服上述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种靶向抗双链DNA抗体的D型多肽及其在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用，以解决现有的L型多肽抗酶切
能力和生物稳定性相对较差，以及基于现有的靶向抗双链DNA抗体的多肽给药频率高导致使用范围受限的技术问题。
[0006]为了达到上述目的，本专利技术采用以下技术方案予以实现：
[0007]本专利技术公开了一种靶向抗双链DNA抗体的D型多肽，该D型多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
[0008]优选地，该D型多肽能够与抗双链DNA抗体不同亚型高亲和力结合。
[0009]优选地，该D型多肽能够抑制抗双链DNA抗体与自身抗原的结合。
[0010]本专利技术还公开了上述的靶向抗双链DNA抗体的D型多肽在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用。
[0011]优选地，所述的药物为治疗狼疮肾炎的药物。
[0012]进一步优选地，所述的药物为降低小鼠血肌酐、血尿素氮、尿蛋白和尿微量白蛋白水平的药物。
[0013]进一步优选地，所述的药物为改善肾脏组织病理表现的药物。
[0014]更进一步优选地，改善病理表现包括减轻肾小球系膜增生、毛细血管内增生及新月体形成，缓解肾小管萎缩及肿胀和管型形成，以及减轻肾间质纤维化。
[0015]本专利技术还公开了一种治疗系统性红斑狼疮的多肽药物，由上述的靶向抗双链DNA抗体的D型多肽和药学上可接受的载体和/或辅料制备而成。
[0016]优选地，该多肽药物为治疗狼疮肾炎的药物。
[0017]与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
[0018]本专利技术公开的靶向抗双链DNA抗体的D型多肽，以噬菌体文库筛选出的针对不同亚类抗双链DNA抗体具有靶向结合活性的模拟肽ALW为基础，对其进行D型氨基酸替换，构建出D型DNA模拟肽D
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ALW，其氨基酸序列为alwppnlhawvp。本专利技术通过体外及体内验证该D型多肽的靶向结合活性，抗酶解稳定性和狼疮肾炎改善效果。经实验结果验证，该多肽D
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ALW能够靶向抗双链DNA抗体的不同亚型，广泛的抑制抗双链DNA抗体的致病效应。在离体水平上检验该多肽能够与不同亚型抗双链DNA抗体以高亲和力结合，并有效抑制不同亚型抗双链DNA抗体与自身抗原、肾细胞以及肾小球结合。在体水平上检验该多肽能够显著改善狼疮小鼠肾功能，减少狼疮小鼠肾小球IgG和补体C3的沉积，减轻小鼠肾小球损害例如减少系膜增生、毛细血管内增生及新月体形成，有效遏制肾组织纤维化，从而显著改善肾脏损害，提高生存率。因此，本专利技术的D型多肽可能为临床上系统性红斑狼疮，特别是难治性狼疮肾炎的靶向治疗药物的制备提供新的选择。
[0019]更重要的是，该治疗性多肽D
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ALW由D型氨基酸组成，因此较L型多肽具有更好的抗酶切能力和生物学稳定性。体外细胞毒性安全性评估表明治疗性多肽D
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ALW的细胞安全性良好。而且D
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ALW作为只有12个氨基酸的短肽，其合成成本低，制备和纯化简单、快捷。因此，D
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ALW治疗性短肽在未来狼疮肾炎治疗药物的制备方面，前景广阔。
附图说明
[0020]图1为表面等离子体共振法评估D
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ALW治疗性多肽与抗双链DNAIgG2a和IgG3的结合亲和力；其中，a为IgG2a；b为IgG3；
[0021]图2为酶联免疫吸附实验分析生物素标记的D
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ALW治疗性多肽与抗双链DNA IgG2a
和IgG3的结合力；其中，a为IgG2a；b为IgG3；
[0022]图3为酶联免疫吸附实验分析D
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ALW阻断抗双链DNA IgG2a和IgG3与双链DNA和层黏连蛋白结合的结果图；其中，a为IgG2a；b为IgG3；
[0023]图4为流式细胞实验评估治疗性短肽D
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ALW抑制双链DNA抗体IgG2a和IgG3与系膜细胞结合(图中a)；图中b为统计结果图；
[0024]图5为肾小球结合实验评估治疗性短肽D
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ALW抑制双链DNA抗体IgG2a和IgG3与离体肾小球结合；其中，a为代表性肾小球荧光图片；b为荧光强度统计结果图；
[0025]图6为流式凋亡实本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向抗双链DNA抗体的D型多肽，其特征在于，该D型多肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.如权利要求1所述的靶向抗双链DNA抗体的D型多肽，其特征在于，该D型多肽能够与抗双链DNA抗体不同亚型高亲和力结合。3.如权利要求1所述的靶向抗双链DNA抗体的D型多肽，其特征在于，该D型多肽能够抑制抗双链DNA抗体与自身抗原的结合。4.权利要求1～3中任意一项所述的靶向抗双链DNA抗体的D型多肽在制备治疗系统性红斑狼疮的药物中的应用。5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物为治疗狼疮肾炎的药物。6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的药...

【专利技术属性】
技术研发人员：王绘霞，王亚琦，夏育民，张雯，罗迈，杨文光，延祝，陆美，
申请(专利权)人：西安交通大学，
类型：发明
国别省市：