一种多肽衍生物及其制备方法与应用技术

本发明专利技术涉及一种多肽衍生物及其制备方法与应用，属于多肽药物的技术领域所述多肽衍生物其分子结构通式如下式Ⅰ：X

【技术实现步骤摘要】
一种多肽衍生物及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及多肽药物的
，具体涉及一种多肽衍生物及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]目前，用于预防、治疗和诊断疾病的多肽类药物主要包括多肽疫苗、抗肿瘤多肽、抗病毒多肽、多肽导向药物、细胞因子模拟肽、抗菌性活性肽、诊断用多肽以及其他药用小肽等。制备多肽药物的常规技术手段有化学合成、分离纯化及基因工程等，其中以化学合成为最主要制备方式。相比化学小分子药物，多肽药物生物活性更强、用药剂量更小、毒副作用更低且疗效显著，因此备受新药研发者的瞩目与青睐。一般而言，肽是能与特定细胞结合的选择性信号分子表面受体，例如G蛋白偶联受体(GPCR)或离子通道，能激活触发细胞内分子机制，这也是有别于化学小分子的重要特征。相比大分子蛋白药，肽的生产更简单，成本更低，又接近小分子的成本，所以处于化学小分子药和生物药之间的最佳平衡点。据统计，目前已鉴定发现了7000余种天然存在的肽，它们在人体内扮演着激素、神经递质、生长因子、离子通道配体、抗感染剂等角色。
[0003]由于天然肽具有化学、物理稳定性差等固有弱点，不适宜直接用作治疗制剂，所以研发多肽药物必须率先克服其半衰期短、不稳定、在体内易被降解等缺陷。通过糖基化对多肽进行改造，能够有效的提高多肽的溶剂性和稳定性。糖基化修饰对蛋白质功能和结构的形成具有重要作用。在机体内，细胞粘附、分子识别以及信号转导等过程均涉及糖基化蛋白质的参与，说明糖基化修饰对蛋白质行使生物学功能起着重要作用。研究蛋白质的糖基化修饰及其在不同生理病理条件下的变化有重要意义，也是糖蛋白质组学面临的主要问题和巨大挑战。
[0004]在免疫检查点中，PD
‑
1/PD
‑
L1多年来被认为是一种抗癌药物靶点，目前已有多种单克隆抗体通过靶向PD
‑
1/PD
‑
L1信号通路在肿瘤治疗中取得了令人鼓舞的效果。DPPA
‑
1对PD
‑
L1有特异性抑制效果，在CT26异种移植小鼠模型中，肽显著抑制肿瘤生长。本专利技术通过对DPPA
‑
1进行糖基化修饰，希望能够提高溶解性并提高PD
‑
L1的抑制效果。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术提供一种多肽衍生物及其制备方法与应用，以提高多肽的溶解性并提高PD
‑
L1的抑制效果，同时还能够有效抑制炎症的发生。
[0006]第一方面，本专利技术提供一种多肽衍生物，其分子结构通式如下式Ⅰ：
[0007]X
‑
Asn
‑
Tyr
‑
Ser
‑
Lys
‑
Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
Arg
‑
Gln
‑
Tyr
‑
His
‑
Phe
‑
Y；
[0008]Ⅰ[0009]所述式Ⅰ为链式化合物或环状化合物；
[0010]其中，
[0011]当式Ⅰ为链式化合物时，X为糖基，Y为H，所述糖基与N端连接；
[0012]当式Ⅰ为环状化合物时，X和Y为半胱氨酸，且X和Y通过二硫键连接。
[0013]优选的，当式Ⅰ为链式化合物时，X为葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺和半乳糖胺。
[0014]优选的，式Ⅰ选自以下化合物：
[0015]T1：glu
‑
Asn
‑
Tyr
‑
Ser
‑
Lys
‑
Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
Arg
‑
Gln
‑
Tyr
‑
His
‑
Phe；
[0016]T2；gal
‑
Asn
‑
Tyr
‑
Ser
‑
Lys
‑
Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
Arg
‑
Gln
‑
Tyr
‑
His
‑
Phe；
[0017]T3：
[0018]第二方面，本专利技术提供一种制备式Ⅰ化合物的方法，包括以下步骤：
[0019]当式Ⅰ化合物为链式结构时，方法如下：
[0020](1)合成CTC树脂
[0021]CTC Resin和Fmoc
‑
Phe
‑
OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸，再加入DIPEA，反应3小时后，不抽滤溶液，直接加入甲醇，封端半小时，洗涤后得到Fmoc
‑
Phe
‑
CTC Resin备用；
[0022](2)氨基酸对接
[0023]脱Fmoc：加3倍树脂体积的20％ PIP/DMF溶液，鼓氮气60分钟，然后用DMF洗涤得到H2N
‑
Phe
‑
CTC Resin；
[0024]缩合：取Fmoc
‑
His
‑
OH加入到上述树脂里，加DMF溶解Fmoc
‑
His
‑
OH，再分别加入IPEA和HBTU；反应60分钟后，用DMF洗涤树脂得到Fmoc
‑
His
‑
Phe
‑
CTC Resin；
[0025](3)按照步骤(2)的方法依次将Tyr、Gln、Arg、Asp、Thr、Pro、Lys、Ser和Tyr连接至肽链上；
[0026](4)多肽糖基化
[0027]将步骤(3)获得的多肽Tyr
‑
Ser
‑
Lys
‑
Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
Arg
‑
Gln
‑
Tyr
‑
His
‑
Phe与发生缩合反应获得式Ⅰ化合物粗品；式Ⅱ中X与式Ⅰ定义相同；
[0028](5)用三氟乙酸、三异丙基硅烷、水和二硫苏糖醇的混合溶液从树脂中裂解肽，用冰冷的乙醚沉淀；将多肽溶解在乙腈：水＝1:1的溶液中，并通过反相高压液相色谱进行纯化，得式Ⅰ化合物。
[0029]优选的，步骤(5)中混合溶液比例为三氟乙酸：三异丙基硅烷：水：二硫苏糖醇＝90：5：2.5：2.5。
[0030]优选的，步骤(1)中，CTC Resin和Fmoc
‑
Phe
‑
OH的摩尔比为3:4。
[0031]优选的，步骤(2)中，Fmoc
‑
Phe
‑
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多肽衍生物，其特征在于，其分子结构通式如下式Ⅰ：X
‑
Asn
‑
Tyr
‑
Ser
‑
Lys
‑
Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
Arg
‑
Gln
‑
Tyr
‑
His
‑
Phe
‑
Y；Ⅰ所述式Ⅰ为链式化合物或环状化合物；其中，当式Ⅰ为链式化合物时，X为糖基，Y为H，所述糖基与N端连接；当式Ⅰ为环状化合物时，X和Y为半胱氨酸，且X和Y通过二硫键连接。2.如权利要求1所述的多肽衍生物，其特征在于，当式Ⅰ为链式化合物时，X为葡萄糖、半乳糖、葡萄糖胺和半乳糖胺。3.如权利要求1所述的多肽衍生物，其特征在于，式Ⅰ选自以下化合物：T1：glu
‑
Asn
‑
Tyr
‑
Ser
‑
Lys
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Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
Arg
‑
Gln
‑
Tyr
‑
His
‑
Phe；T2；gal
‑
Asn
‑
Tyr
‑
Ser
‑
Lys
‑
Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
Arg
‑
Gln
‑
Tyr
‑
His
‑
Phe；T3：4.一种制备如权利要求1所述的多肽衍生物的方法，其特征在于，包括以下步骤：当式Ⅰ化合物为链式结构时，方法如下：(1)合成CTC树脂CTC Resin和Fmoc
‑
Phe
‑
OH于反应器中，加入适量DCM溶解氨基酸，再加入DIPEA，反应3小时后，不抽滤溶液，直接加入甲醇，封端半小时，洗涤后得到Fmoc
‑
Phe
‑
CTC Resin备用；(2)氨基酸对接脱Fmoc：加3倍树脂体积的20％PIP/DMF溶液，鼓氮气60分钟，然后用DMF洗涤得到H2N
‑
Phe
‑
CTC Resin；缩合：取Fmoc
‑
His
‑
OH加入到上述树脂里，加DMF溶解Fmoc
‑
His
‑
OH，再分别加入IPEA和HBTU；反应60分钟后，用DMF洗涤树脂得到Fmoc
‑
His
‑
Phe
‑
CTC Resin；(3)按照步骤(2)的方法依次将Tyr、Gln、Arg、Asp、Thr、Pro、Lys、Ser和Tyr连接至肽链上；(4)多肽糖基化将步骤(3)获得的多肽Tyr
‑
Ser
‑
Lys
‑
Pro
‑
Thr
‑
Asp
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：邓鹏，毛龙飞，孙苏军，孙洲，王斓，王恒振，王新坤，赵文珊，姬涛，彭立增，周磊，
申请(专利权)人：山东省农业科学院，
类型：发明
国别省市：