一种对样本中囊泡提取效率质控的方法技术

本发明专利技术公开了一种对样本中囊泡提取效率质控的方法，包括向待测样本中加入包裹着标准品物质的脂质体标品，对样本进行提取及检测，对标准品物质含量进行分析，评估样本提取过程中囊泡组分的提取效率。本发明专利技术方法简单可靠，能有效评估囊泡的纯化效率，提升囊泡蛋白质组学的稳定性。学的稳定性。学的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
一种对样本中囊泡提取效率质控的方法


[0001]本专利技术属于囊泡蛋白质组学
，具体地，涉及一种对样本中囊泡提取效率质控的方法。

技术介绍

[0002]1、脂质体的构成
[0003]某些两亲性分子，如许多天然的、合成的表面活性剂，分散于水中时会自发形成一类具有封闭双层结构的分子有序组合体，也称为囊泡，也称为脂质体(liposome)。囊泡是一种或多种脂质构成的球状双层。脂质的类型、数目、比率可不同，可以从天然或人工合成而来。脂质的至少一种(或一些)是两亲脂质，定义为具有亲水部分和疏水部分(通常为亲水头部和疏水尾部)。疏水部分通常长袖疏水相(双层内)，亲水部分通常朝向水相(双层外，可能在邻居并列的双层表面之间)。亲水部分可包含极性或带电基团，如碳水化合物、磷酸、羧基、硫酸根、氨基、巯基、硝基、羟基、以及其他类似基团。疏水部分可包含非极性基团，包括但不限于长链饱和和不饱和脂肪族烃基和一种或多种芳香族基团、脂环族基团或脂环基团取代的基团。两亲化合物的例子包括但不限于磷脂、氨脂、鞘脂、磷酸乙醇氨脂。
[0004]通常，脂质通常是指磷脂，脂质也可以是阴离子脂质和中性(包括两性离子和极性)脂质，包括阴离子磷脂和中性磷脂。在选定pH下，中性脂质以不带电或中性两性离子的形式存在。在生理pH下，这样的脂质包括例如，二油酰磷脂酰甘油(DOPG)、二酰磷脂胆碱、二酰磷脂酰乙醇胺、神经酰胺鞘磷脂、脑磷脂、胆固醇、脑脂和二酰甘油。两性脂质的例子包括但不限于二油酰磷脂疏胆碱(DOP)、二肉豆磷脂酰胆碱(DMPC)和二油磷脂酰丝氨酸(DOPS)。阴离子脂质是在生理pH下带负电的脂质。这些脂质包括但不限于磷脂酰甘油、心磷脂、二酰磷脂酰丝氨酸、二酰磷脂酸、N
‑
十二疏磷脂疏乙醇胺、N
‑
琥珀疏磷脂酰乙醇胺、N
‑
戊二磷脂疏乙醇胺、赖氨疏磷脂酰甘油、棕榈油疏磷脂酰甘油(POPG)以及与中性脂质结合的其它阴离子修饰基团。
[0005]阴离子脂质和中性脂质在本文中共同称为非阳离子脂质。这样的脂质可以包含磷但它们并不限于此。非阳离子脂质的例子包括卵磷脂、溶血卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、溶血磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂乙醇胺(DOPE)、二棕桐酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆酰磷酸乙醇胺(DMPE)、二硬脂疏磷脂酰乙醇胺(DSPE)桐酰油磷脂酰乙醇胺(POPE)、棕桐酰油酰磷脂酰胆碱(POPC)蛋磷脂酰胆碱(EPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油疏磷脂酰胆碱(DOPC)二棕桐酰磷胎酰胆碱(DPPC)、二油磷脂酰甘油(DOPG)、二棕桐酰磷脂酰甘油(DPPG)棕桐油酰磷脂酰甘油(POPG)16
‑0‑
单甲基PE、16
‑0‑
二甲基PE18
‑1‑
反式PE、棕桐疏油疏磷脂酰乙醇胺(POPE)、1
‑
硬胎
‑2‑
油
‑
磷脂乙醇胺(SOPE)、磷脂丝氨酸、磷脂疏肌醇、鞘磷脂、脑磷脂、心磷脂、磷脂酸、脑苷脂、磷酸二鲸蜡和胆固醇。另一些不含磷的脂质包括硬脂胺、十二胺、十六胺、棕构酸乙酰酰、蓖麻醇酸甘油醋、硬脂酸十六醋、肉豆楚酸异丙酰、两性丙烯酸聚合物、三乙醇胺十二烷基硫酸酰、烷基芳基硫酸聚乙氧基化的脂肪酰胺、双十八基二甲基澳化钱等、二基磷脂疏胆碱、二酰基磷脂疏乙醇胺、神经酰胺、鞘磷脂、脑磷脂和脑苷脂。在一些情
况下，可以使用脂质如溶血磷脂酰胆碱和溶血磷脂酥乙醇胺。非阳离子脂质还包括聚乙二醇基聚合物如PEG 2000、PEG5000和与磷脂或神经胺缀合的聚乙二醇(称为PEG
‑
Cer)。
[0006]2、脂质体的生物学意义
[0007]囊泡(vesicles)是真核细胞中十分常见的膜泡结构，具有磷脂双分子层，是重要的生物来源的脂质体形态，是细胞内膜系统不可或缺的重要功能结构组分和细胞内物质定向运输的载体功能和表现形式。目前，针对这些体液中的囊泡类的组学研究，包括但不限于外泌体组学、血小板组学，随着各种提取、分析技术的日益成熟，正收到越来越多的关注。
[0008]由于血小板及细胞内细胞器，如内质网和高尔基体，都能够分泌形成囊泡结构，其本身也是一种较大尺寸的囊泡结构。人体体液，包括血液、尿液、脑脊液、胸腔液、口水等，都存在细胞释放的囊泡结构，以外泌体(exosome)为主，这些囊泡结构中含有生物体各个组织器官释放的物质，因此蕴藏着大量的潜在可利用的生理或病理信息。外泌体是一种广泛存在并分布于各种体液中可由多种细胞分泌的膜性小囊泡，具有由脂质双层膜形成的泡囊结构，直径一般介于30～120nm之间，包含有细胞特异的蛋白、脂质和核酸，除了能作携带和传递重要的信号分子，形成一种全新的细胞间信息传递系统从而改变其他细胞的功能外，在很多生理病理上起着重要的作用。人体多种细胞可分泌外泌体，人体体液中(血液、尿液、唾液、乳液)都含有外泌体，体外培养细胞的条件培养液中都存在由细胞分泌的外泌体。
[0009]囊泡的提取对于研究囊泡内的成分具有关键性意义，其提取的效率直接影响后续目标研究物质的定性定量。但是，目前仅有少量手段定性、定量纯品囊泡，对于囊泡的纯化效率并没有有效评估手段。对于囊泡的蛋白质组学来说，囊泡的纯化效率直接决定了蛋白质组的提取量，相应的会影响后续的蛋白质组鉴定数据的质量。

技术实现思路

[0010]专利技术目的：针对目前对于各种提取方案中，对囊泡类结构提取效率的评估方法的不足，本专利技术提供了一种利用脂质体包裹蛋白或肽段标准品构成脂质体标准品，将脂质体标准品加入目标提取物并伴随提取过程，通过相应指定方法检测、分析相应标准品含量以评估样本囊泡类结构在蛋白质组学中的提取效率。
[0011]技术方案：为达到上述专利技术目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0012]一种对样本中囊泡提取效率质控的方法，包括以下步骤：
[0013]1)制备包裹着蛋白或肽段化合物标准物质的脂质体标准品；
[0014]2)取两份等量的样品，一份作为目标样品，一份作为对照样品，目标样品中加入脂质体标准品，对照样品中加入与脂质体标准品等量的稀释液，两份样品同时进行囊泡的提取；
[0015]3)取步骤2)处理后的样品，对照样品中加入脂质体标准品，加入量与步骤2)中目标样品中的加入量相同，目标样品中加入等量的稀释液，两份样品同时进行蛋白质组检测前处理；
[0016]4)对步骤3)处理后的样品进行检测，并分析其中蛋白或肽段化合物标准物质的含量，目标样品中的含量与对照样品中的含量之比即为囊泡结构提取效率。
[0017]进一步的，优选或者具体的实施方案如下：
[0018]1、制备脂质体标准物：
[0019]a.脂质体标准物为脂质体双层外壳及内含标准物质；
[0020]b.脂质体双层外壳具有两亲聚合物周膜，所述两亲脂质体的尺寸从10nm
‑
10μm，其尺
[0021]寸基于目的脂质体组学类型，如外泌体：30...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种对样本中囊泡提取效率质控的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)制备包裹着蛋白或肽段化合物标准物质的脂质体标准品；2)取两份等量的样品，一份作为目标样品，一份作为对照样品，目标样品中加入脂质体标准品，对照样品中加入与脂质体标准品等量的稀释液，两份样品同时进行囊泡的提取；3)取步骤2)处理后的样品，对照样品中加入脂质体标准品，加入量与步骤2)中目标样品中的加入量相同，目标样品中加入等量的稀释液，两份样品同时进行蛋白质组检测前处理；4)对步骤3)处理后的样品进行检测，并分析其中蛋白或肽段化合物标准物质的含量，目标样品中的含量与对照样品中的含量之比即为囊泡结构提取效率。2.根据权利要求1所述的对样本中囊泡提取效率质控的方法，其特征在于，步骤1)中，所述脂质体标准品中的脂质选自阴离子脂质或中性脂质；所述蛋白或肽段化合物标准物质选自目标样品不具有的物质。3.根据权利要求1所述的对样本中囊泡提取效率质控的方法，其特征在于，步骤1)中，所述脂质体标准品的粒径范围为10nm
‑
10μm，其尺寸基于目的脂质体组学类型，如外泌体：30
‑
150nm之间，血小板：1
‑
8μm之间。4.根据权利要求1所述的对样本中囊泡提取效率质控的方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈亮宇，马聪聪，乔舰，赵娜，李捷，
申请(专利权)人：谱天天津生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：