一种僵蚕的HPLC检测方法技术

本发明专利技术公开了一种僵蚕的HPLC检测方法，它包括如下步骤：1)对照品溶液制备；2)供试品溶液制备；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪。本发明专利技术以特定的样品处理方法和色谱条件，建立了僵蚕中白僵菌素含量测定方法，为更好的控制僵蚕质量，更加合理可行的质量标准提供可靠的方法，具备实际推广应用价值。值。值。

【技术实现步骤摘要】
一种僵蚕的HPLC检测方法


[0001]本专利技术属于中药材质量控制领域，具体涉及一种僵蚕的HPLC检测方法。

技术介绍

[0002]僵蚕为蚕蛾科昆虫家蚕4～5龄的幼虫感染白僵菌而致死的干燥体，具有祛风解痉，活血通络，化痰散结之功效，广泛用于临床配方、中成药投料和医美产业。自然产生的僵蚕没有统一的养殖标准，多存在幼蚕“龄期”不统一，蚕体大小差别大，蚕体丝腺形成不全，与白僵菌生化反应不彻底，产生白僵菌素等各种次级代谢产物的含量差别大的问题。
[0003]白僵菌素为六元环羚酸肤类化合物，不仅具有抗惊厥、抗肿瘤等药理活性，还广泛应用于生物防治，也是家蚕感染白僵菌的特有成分及重要判断依据，具有较强专属性，可作为僵蚕的质量评价指标。但目前《中国药典》僵蚕药材质量标准还没有白僵菌素含量控制方法和标准。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供了一种僵蚕的HPLC检测方法，它包括如下步骤：
[0005]1)对照品溶液制备：取白僵菌素对照品，加甲醇溶液溶解，即得对照品溶液；
[0006]2)供试品溶液制备：取僵蚕，加甲醇溶液提取，过滤，取滤液作为供试品溶液；
[0007]3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪；色谱条件如下：
[0008]色谱柱：以十八烷烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以甲醇为流动相A，以0.02％磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱程序0～3min，85％A；3～10min，85％A
→
70％A；10～20min，70％A
→
85％A；20～30min，85％A。
[0009]进一步地，步骤1)所述对照品与甲醇溶液的质量体积比为0.01～1mg：1ml。
[0010]进一步地，步骤2)所述僵蚕和甲醇溶液的质量体积比为1～10g：25ml。
[0011]更进一步地，所述甲醇溶液的浓度为50％～100％，v/v，优选60％，v/v。
[0012]进一步地，步骤2)所述提取为超声提取，超声提取功率100～500W，时间20～60min。
[0013]进一步地，步骤3)所述色谱条件中色谱柱：Agilent Eclipse plus C
18
(4.6
×
250mm，5μm)，柱温：20～40℃，进样量：5～50μL，流速：0.5～1.5ml/min，检测波长：215
±
2nm。
[0014]更进一步地，所述柱温：30℃，进样量：10μL，流速：1.0ml/min，检测波长：215nm。
[0015]本专利技术还提供了一种僵蚕中白僵菌素的含量测定方法，它包括如下步骤：
[0016]1)取僵蚕，按前述方法检测；
[0017]2)按外标法以峰面积计算僵蚕中白僵菌素的含量。
[0018]本专利技术一种僵蚕的HPLC检测方法，以特定的样品处理方法和色谱条件，将僵蚕中白僵菌素在色谱图中被有效分离，实现了白僵菌素含量的准确测定，为更好的控制僵蚕质量，建立更加合理可行的质量标准提供可靠的方法，具备实际推广应用价值。
[0019]显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0020]以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。
附图说明
[0021]图1对照品色谱图(215nm)
[0022]图2僵蚕样品色谱图(215nm)
[0023]图3线性回归方程曲线
具体实施方式
[0024]本专利技术具体实施方式中使用的试剂、试药、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。
[0025]实施例1本专利技术僵蚕中白僵菌素的含量测定
[0026]1)对照品溶液的制备
[0027]取白僵菌素对照品，精密称定，加60％甲醇制成每1ml含0.03mg的溶液；
[0028]2)供试品溶液的制备
[0029]取僵蚕2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60％甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率53kHz)30分钟，取出，放冷，再称定重量，用60％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液；
[0030]3)分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。色谱条件如下：
[0031]色谱柱：Agilent Eclipse plus C
18
(4.6
×
250mm，5μm)；流动相：以甲醇为流动性A，0.02％磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱：0～3分钟，A组分占85％，3～10分钟，A组分由85％降至70％，10～20分钟，A组分由70％升至85％，保持10分钟；B组分作相应的变化；检测波长为215
±
2nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；
[0032]4)根据色谱图图1～2，按外标法以峰面积计算僵蚕中白僵菌素的含量。
[0033]以下通过实验例来说明本专利技术的有益效果：
[0034]试验例1僵蚕药材白僵菌素定量检测研究
[0035]1、仪器与材料
[0036]1.1仪器：高效液相色谱仪、电子天平；超声波清洗器等。
[0037]1.2对照品：白僵菌素对照品。
[0038]1.3试剂：色谱级甲醇、乙腈；分析纯甲醇、乙醇等；水为超纯水。
[0039]1.4样品：试验收集样品75批，涵盖僵蚕养殖基地、丝蚕养殖基地、药材市场、中药饮片企业、医院、药店。
[0040]2、色谱条件及耐用性考察
[0041]以辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动性A，0.02％磷酸溶液为流动相B。梯度洗脱：0～3分钟，A组分占85％，3～10分钟，A组分由85％降至70％，10～20分钟，A组分
由70％升至85％，保持10分钟；B组分作相应的变化。检测波长为215
±
2nm。理论板数按白僵菌素峰计算在6000以上。
[0042]3 溶液的制备
[0043]3.1 对照品溶液的制备
[0044]取白僵菌素对照品10.481mg，精密称定，置10ml量瓶中，加60％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液。精密吸取储备液1ml，置25ml量瓶中，加60％甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。
[0045]3.2供试品溶液制备前处理考察
[0046]对僵蚕提取方式、提取溶剂、提取时间、溶剂用量等进行考察，确定僵蚕中白僵菌素含量测定的最佳样品前处理方法。
[0047]3.2.1提取方式的考察
[0048]取僵蚕粉末2份，每份约1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种僵蚕的HPLC检测方法，其特征在于：它包括如下步骤：1)对照品溶液制备：取白僵菌素对照品，加甲醇溶液溶解，即得对照品溶液；2)供试品溶液制备：取僵蚕，加甲醇溶液提取，过滤，取滤液作为供试品溶液；3)分别吸取对照品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪；色谱条件如下：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：以甲醇为流动相A，以0.02％磷酸溶液为流动相B；梯度洗脱程序0～3min，85％A；3～10min，85％A
→
70％A；10～20min，70％A
→
85％A；20～30min，85％A。2.根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤1)所述对照品与甲醇溶液的质量体积比为0.01～1mg：1ml。3.根据权利要求1所述的HPLC检测方法，其特征在于：步骤2)所述僵蚕和甲醇溶液的质量体积比为1～10g：25ml。4.根据权利要求1～3任一项所述的HPLC检测方法，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：许莉，文永盛，尹相余，高鹏，罗霄，代琪，张良，雷蕾，李及，杨小艳，
申请(专利权)人：成都市药品检验研究院，
类型：发明
国别省市：