SARNA和MRNA调节剂联合治疗SMA制造技术

本文提供了与(a)和(b)的组合相关的方法和组合物：(a)增加SMN2基因或蛋白表达的试剂和(b)增加功能性SMN2mRNA和SMN蛋白产生的SMN2mRNA剪接或稳定性调节剂，以及它们在治疗SMA和相关病症或疾病中的用途。在某些实施方式中，这些方法涉及使用SMN2saRNA和SMN2mRNA调节剂来减轻/减少SMA的症状。调节剂来减轻/减少SMA的症状。调节剂来减轻/减少SMA的症状。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】SARNA和MRNA调节剂联合治疗SMA
1.交叉引用
[0001]本申请要求2020年7月31日提交的PCT专利申请号PCT/CN2020/106200的优先权，其公开内容通过引用其全文纳入本文。2.通过引用纳入以文本文件提供的序列表
[0002]本文以创建于2021年7月30日且大小为81Kb的“SMN2
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Combo sequence listing_ST25 final”文本文件提交序列表。该文本文件的内容通过引用其全文方式纳入本文。
3.
技术介绍

[0003]脊髓性肌萎缩症(SMA)是一种常染色体隐性遗传病，其以约1/6000
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8000影响新生儿，是婴儿死亡的主要遗传原因。SMA由存活运动神经元(survival motor neuron，SMN)蛋白水平降低引起，该降低是由于染色体5q13.4上存活运动神经元基因(SMN1)端粒拷贝的纯合缺失或突变所致。
[0004]SMN蛋白由两个SMN基因(SMN1和SMN2)编码，两者的本质区别在于其编码序列的外显子7中的一个核苷酸的差异，其中SMN2基因中的胞嘧啶(C)变为胸腺嘧啶(T)(Coovert,D.D.,等，脊髓性肌萎缩症中的存活运动神经元蛋白(The survival motor neuron protein in spinal muscular atrophy).Human Mol Genet(1997))。这一关键差异产生了隐匿剪接位点并导致约90％转录自SMN2基因的成熟SMN mRNA中的外显子7被跳读。缺少外显子7的SMN2mRNA(SMN2Δ7)产生截短的SMN蛋白，该蛋白不稳定并且会迅速降解。在SMA患者中，SMN1基因不再产生任何SMN蛋白，并且SMN2所产生的全长SMN蛋白的数量不足以弥补SMN1的丢失，这导致骨髓前角中运动神经元的细胞凋亡性死亡、骨骼肌萎缩以及随之而来的虚弱(Monani,U.R.,等，人着丝粒存活运动神经元基因(SMN2)挽救Smn(
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)小鼠的胚胎致死率并在小鼠中导致脊髓性肌萎缩症().Human Mol Genet(2000))。SMA患者症状的严重程度取决于患者细胞中SMN2基因的拷贝数——拷贝数越多，严重症状越轻(Harada,Y.,等SMN2拷贝数与脊髓性肌萎缩症临床表型之间的相关性：三个SMN2拷贝无法使一些患者免受疾病严重程度的影响(Correlation between SMN2 copy number and clinical phenotype of spinal muscular atrophy:three SMN2 copies fail to rescue some patients from the disease severity).J Neurol(2002))。
[0005]为了开发SMA的治疗方法，一种策略是使用剪接调节剂(SM)在剪接过程中刺激外显子7包含。就此而言，反义寡核苷酸(ASO)药物已获美国食品和药物管理局(FDA)批准上市(Hua,Y.和A.R.Krainer.反义介导的外显子包含.Methods Mol Biol(2012)和Stein,C.A.和D.Castanotto.2017年FDA批准的寡核苷酸疗法(FDA
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Approved Oligonucleotide Therapies in 2017).Mol Thera(2017))。另一种药物利司扑兰(Risdiplam，RG7916)是一种在研口服小分子药物，其正在向FDA提交新药申请(NDA)(Ramdas,S.和L.Servais.脊髓性肌萎缩症的新治疗：当前可用数据综述(New treatments in spinal muscular atrophy:an overview of currently available data).Expert Opin Pharmaco(2020))。这两种药物通过显著延长患者的生存期并改善运动里程碑改变了
SMA的治疗。尽管存在这些改善，但是接受治疗的患者，特别是儿童，仍远未过上正常生活。几个似乎合理的原因可以解释SM的功效不足。一个是天花板效应，其限制了通过治疗恢复的全长SMN蛋白可达到的最大水平。SM对SMN2转录没有影响，因此不会增加可用SMN2前体mRNA的数量。为了使SMN蛋白恢复至其正常生理水平，SM在将SMN2Δ7mRNA转化为全长mRNA的体内效率最好达到100％，这是现实中不太可能发生的理想效果。因此，SM可为患者提供的最大功效受到SMN2前体mRNA可用性的限制。
[0006]治疗SMA的另一种治疗方法涉及刺激SMN2转录以增加全长SMN蛋白的水平。此前，已在体外和小鼠SMA模型中测试了各种表观遗传修饰剂，诸如组蛋白脱乙酰酶(HDAC)抑制剂(例如丁酸钠、丙戊酸)和非HDAC抑制剂(例如羟基脲、塞来昔布、沙丁胺醇等)，但它们都未能证明显著的临床疗效(Lunke,S.和A.El
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Osta.表观遗传修饰和染色质重塑在脊髓性肌萎缩症中的新兴作用(The emerging role of epigenetic modifications and chromatin remodeling in spinal muscular atrophy).J Neurochem(2009))。对于失败的一个解释是表观遗传修饰剂缺少靶标特异性。需要改进的方法和组合物来治疗SMN缺陷相关病症，例如脊髓性肌萎缩症。4.专利技术概述
[0007]已证明靶向基因调控序列(包括启动子)的双链RNA(dsRNA)通过称为RNA激活(RNAa)的机制在转录水平上以序列特异性方式上调靶基因(Li,L.C.,等，小dsRNA在人细胞中诱导转录激活(Small dsRNAs induce transcriptional activation in human cells).PNAS(2006))。这类dsRNA称为小激活RNA(saRNA)。通过引用其全部内容纳入本文的先前的专利公开(PCT/CN2019/129025)描述了靶向SMN2启动子的功能性saRNA的鉴定，并描述了它们在正常人细胞和源自SMA患者的原代细胞中诱导SMN2 mRNA表达中的活性。
[0008]本公开的实施方式部分基于令人惊讶的发现，即(a)一种或多种激活或上调细胞中SMN2基因表达的小激活核糖核酸(saRNA)(本文称为“SMN2saRNA”)和(b)一种或多种增加功能性SMN2 mRNA产生的SMN2 mRNA剪接或稳定性调节剂(本文称为“SMN2 mRNA调节剂”)，这两者的组合可以实现全长SMN2 mRNA和全长SMN蛋白水平的显著增加。相较于单一疗法，该联合治疗策略可以提供治疗益处增强，并因此可以使治疗结果最大化，例如，对于SMA患者。
[0009]在某些方面中，提供了用于治疗个体中SMN缺陷相关病症诸如SMA或延缓所述病症发作或进展的药物组合物，该组合物包含这样本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种药物组合物，其包含下述的组合：(a)一种或多种增加SMN2基因或蛋白表达的试剂，和(b)一种或多种通过调节SMN2 mRNA剪接或稳定性来增加功能性SMN蛋白产生的试剂(SMN2 mRNA调节剂)。2.如权利要求1所述的组合物，其中，所述一种或多种增加SMN2基因或蛋白表达的试剂中的至少一种选自saRNA、编码saRNA的重组载体和小分子化合物。3.如权利要求2所述的组合物，其中，所述一种或多种增加SMN2基因或蛋白表达的试剂中的至少一种是saRNA，并且其中所述saRNA包含正义链和反义链，或包含单链，或其混合物。4.如权利要求1所述的组合物，其中，所述一种或多种SMN2 mRNA调节剂是反义寡核苷酸(ASO)或小分子化合物。5.如权利要求4所述的组合物，其中，所述一种或多种SMN2 mRNA调节剂中的至少一种选自诺西那生(Nusinersen)、利司扑兰(Risdiplam)和布拉扑兰(Branaplam)。6.如权利要求2
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3中任一项所述的组合物，其中，至少一种saRNA包含与下述区域中的片段在序列上至少90％相同的第一链：(a)SMN2基因启动子
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1639到
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1481的区域(SEQ ID NO:472)，(b)SMN2基因启动子
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1090到
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1008的区域(SEQ ID NO:473)，(c)SMN2基因启动子
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994到
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180的区域(SEQ ID NO:474)，或(d)SMN2基因启动子
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144到
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37的区域(SEQ ID NO:475)。7.如权利要求6所述的组合物，其中，所述saRNA的第一链与长度为16
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35个核苷酸的SMN2基因启动子区的片段具有至少75％的序列同源性或互补性。8.如权利要求6所述的组合物，其中，所述第一链的长度为16
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35个核苷酸，并且当最佳比对时，与(a)、(b)、(c)或(d)之一中序列在序列上至少75％相同。9.如权利要求6
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7中任一项所述的组合物，其中，所述saRNA的第一链与选自SEQ ID NO:315
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471的核苷酸序列具有至少75％的序列同源性或互补性。10.如权利要求6
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7中任一项所述的组合物，其中，所述saRNA的正义链与选自SEQ ID NO:1
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157的任何核苷酸序列具有至少75％的同源性，并且所述saRNA的反义链与选自SEQ ID NO:158
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314的任何核苷酸序列具有至少75％的同源性。11.如权利要求10所述的组合物，其中，所述saRNA的正义链包含选自SEQ ID NO:1
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157中任一项的核苷酸序列，并且其中所述saRNA的反义链包含选自SEQ ID NO:158
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314中任一项的核苷酸序列。12.如权利要求6
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11中任一项所述的组合物，其中，所述saRNA的至少一个核苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：李龙承，姜武林，吴建成，
申请(专利权)人：中美瑞康核酸技术南通研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：