用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺制造技术

本发明专利技术是一种用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺，包括如下步骤：步骤1.获取粪便样本；步骤2.菌悬液制备；往粪便样本中加入生理盐水，并进行均质处理，将均质好的粪便悬液进行筛选，收集的滤液即为菌悬液。步骤3.芽孢筛选培养基及萌发试剂配置；所述芽孢筛选培养基及萌发试剂包括有芽孢固体萌发培养基、芽孢液体萌发剂，步骤4.样本进行前处理方法；步骤5.进行平板孵育处理，并将平板置于厌氧环境中37℃培养七天，即分离筛选出芽孢菌群。本发明专利技术能够从人源粪便样本中精准分离筛选产芽孢菌株。菌株。

【技术实现步骤摘要】
用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺


[0001]本专利技术涉及微生物筛选的
，尤其涉及一种用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺。

技术介绍

[0002]人体肠道菌群绝大多数为拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)四大门类。厚壁菌门为其中最大的一个门类，多数为革兰氏阳性菌株，且其许多成员都为有益菌。除此之外，厚壁菌门还有一个很大的特点，即它的多数下属分类菌株都能产生孢子结构，如梭菌属和芽孢杆菌属。
[0003]芽孢(endpspore)又名内生孢子，是细菌在不适宜生长的极端环境下在菌体内部形成的圆形或椭圆形的休眠体，不同的种属中，芽孢所处的位置也会有所区别，有的处于菌体中部，有的在顶端。在一些种属中，芽孢的直径小于菌体，这类种属被称为芽孢杆菌，多为好氧细菌；而在另一些种属中，芽孢的直径会大于菌体直径，使得整个菌体呈梭形或鼓行，这类细菌则被称为梭状芽胞杆菌，为厌氧菌。厚壁菌门下属的芽孢杆菌属和梭状芽孢杆菌属的所有本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺，其特征在于包括如下步骤:步骤1.获取粪便样本；步骤2.菌悬液制备；往粪便样本中加入生理盐水，并进行均质处理，将均质好的粪便悬液进行筛选，收集的滤液即为菌悬液。步骤3.芽孢筛选培养基及萌发试剂配置；所述芽孢筛选培养基及萌发试剂包括有芽孢固体萌发培养基、芽孢液体萌发剂，其中：芽孢固体萌发培养基：在BHIS固体培养基的基础上加入牛胆粉、牛胆盐、牛磺胆酸盐中的任意一种或任意组合制得；芽孢液体萌发剂：往纯水中加入牛胆粉、牛胆盐、牛磺胆酸盐中的任意一种或任意组合物，搅拌溶解后灭菌制得；所述BHIS固体培养基：是将BHI培养基与酵母提取物、半胱胺酸盐、刃天青血晶素溶液及维生素K1溶液，制得固体培养基，额外加入琼脂，灭菌制得；步骤4.样本进行前处理方法；将当天制备的菌悬液进行预处理，所述预处理为2
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5h及4℃保存1
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2h；步骤5.进行平板孵育处理，并将平板置于厌氧环境中37℃培养七天；所述的平板孵育处理为：样本置于40
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80℃恒温箱放置2
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6h，再置于75
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85℃水浴10
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40min，取出后加入芽孢液体萌发剂，于20
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40℃孵育20
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40min，再用生理盐水梯度稀释，并涂布于芽孢固体萌发培养基上，分离筛选出芽孢菌群。2.根据权利要求1所述的用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺，其特征在于步骤1中，所述粪便样本来自于健康志愿者，在健康志愿者的知情同意下收集样本，每份新鲜的粪便样本，为100
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200g，每一份样本单独处理。3.根据权利要求1所述的用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺，其特征在于步骤2中，往粪便样本中加入600
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1000mL的生理盐水，并用均质机于4℃均质处理10
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30min，将均质好的粪便悬液依次通过4
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5层目数逐层递增的50
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300目筛选，收集的滤液即为菌悬液。4.根据权利要求1所述的用于从肠道菌群中分离筛选芽孢菌群的工艺，其特征在于步骤3中，进一步，所述BHIS固体培养基：称取37g脑心浸出液肉汤(BHI)培养基，5g酵母提取物，0.5g半胱胺酸盐，0.001g刃天青，10.0mL血晶素溶液，0.2mL维生素K1溶液，制为固体培养基，并加入15g琼脂，121℃灭菌20min制得；所述芽孢固体萌发培养基：在BHIS固体培养基的基础上加入牛胆粉、牛胆盐、牛磺胆酸盐中的任意一种或任意组合制得，其中牛胆粉含量为0.01％
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2.0％，牛胆盐含量为0.01％
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2.0％，牛磺胆酸盐含量为0.01％
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2.0％；芽孢液体萌发剂：量取100mL的纯水，往其中加入牛胆粉、牛胆盐、牛磺胆酸盐中的任意一种或任意组合制得；其中牛胆粉含量为0.01％
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1.0％，牛胆盐含量为0.01％
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1.0％，牛磺胆酸盐含量...

【专利技术属性】
技术研发人员：肖传兴，李源涛，林檀，张帮周，徐炜，何剑全，
申请(专利权)人：上海承葛医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：