本发明专利技术公开了一种抑制肝细胞中LBP蛋白表达量和/或活性的试剂在制备具有以下至少一种功用的产品中的应用：(1)预防和/或治疗脂肪肝；(2)预防和/或治疗肝细胞脂质堆积过多；(3)降低肝细胞脂肪含量；(4)降低肝脏甘油三酯含量。由于在急性饥饿和高强度压力形成的脂肪肝中的脂质包含有LBP蛋白，单独过表达肝源性LBP蛋白进行高脂喂养亦会导致脂肪肝加剧。因此，调控LBP表达量减少LBP和脂质甘油三酯的结合，可以有效缓解上述脂肪肝，预防和/或治疗肝细胞脂肪变性和肝脏的脂质堆积。胞脂肪变性和肝脏的脂质堆积。胞脂肪变性和肝脏的脂质堆积。
【技术实现步骤摘要】
抑制肝细胞中LBP蛋白表达量/活性的试剂在制备治疗脂肪肝产品中的应用
[0001]本专利技术属于医药领域，具体涉及抑制肝细胞中LBP蛋白的表达量/活性的试剂在制备治疗脂肪肝产品中的应用。
技术介绍
[0002]内毒素结合蛋白(英文简称LBP)是机体受到内毒素刺激时由肝脏合成的急性炎症反应蛋白，是由肝细胞主要合成分泌的一种I型急性期反应蛋白，因与革兰氏阴性菌细胞外壁上的内毒素即脂多糖(LPS)有高度亲和性，二者结合发挥生物学功能而此命名。LBP蛋白由481个氨基酸序列构成，形成一个类似回旋镖型结构。其中N末端结构域是由α螺旋和β折叠片构成的β筒状结构负责结合LPS，C末端结构域和N末端大致相同，附带有一个结合磷脂分子的疏水口袋。近些年不少文献报道在代谢综合征患者中LBP的表达量有明显变化，LBP可能是调控脂代谢的新型蛋白分子。
[0003]脂肪肝是指由各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积过多的病变，随着病程的不断加重，会演变成肝纤维化、肝硬化甚至肝癌，危害人们的身心生活健康。随着时代的发展，人们生活方式的改变、工作压力的加大，脂肪肝的成因增多，如减肥节食和高压环境都可导致脂肪肝的发生。
[0004]在饥饿状态下，机体没有足够的葡萄糖供能时，会促使脂肪组织水解甘油三酯提供能量，甘油三脂水解形成大量游离的脂肪酸，这些脂肪酸会随着血液循环到达肝脏组织，在肝脏中通过磷脂酸途径重新合成甘油三酯，当甘油三酯在肝脏中堆积过多时，会导致脂肪肝的发生。目前虽然对于节食营养不良导致脂肪肝的成因有所了解，但导致脂质在肝细胞内沉积的代谢异常机制没有完全明确，脂肪肝的靶向治疗还存在着壁垒。
[0005]而高强度心理压力导致的脂肪肝往往仅用暴饮暴食解释，其实有一部分人群在正常饮食的情况下依然形成了脂肪肝，这说明其中存在着更直接的影响机制。另一种解释是，高压环境会激活交感神经系统(SNS)以及下丘脑
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垂体
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肾上腺(Hypothalamic
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pituitary
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adrenal，HPA)轴，大量儿茶酚胺被释放，这类激素通过PKA将激素敏感性甘油三酯脂肪酶(HSL)磷酸化，使其定位于脂滴上，促进甘油三酯水解，增加了血清游离脂肪酸的水平，过多脂肪酸在肝细胞中重新合成甘油三酯，堆积在肝细胞内，引起脂肪肝，但脂质堆积的成因不明确，脂肪肝的靶向治疗没有具体方向。
技术实现思路
[0006]为解决上述技术问题，本专利技术提出一种抑制LBP蛋白表达量/活性的试剂在制备治疗脂肪肝产品中的应用。
[0007]本专利技术的第一个专利技术目的，提供抑制肝细胞中LBP蛋白表达量和/或活性的试剂在制备具有以下至少一种功用的产品中的应用：
[0008](1)预防和/或治疗脂肪肝；
[0009](2)预防和/或治疗肝细胞脂质堆积过多；
[0010](3)降低肝细胞脂肪含量；
[0011](4)降低肝脏甘油三酯含量。
[0012]进一步方案，所述试剂选自以下至少一种：
[0013](a)抗体；
[0014](b)干扰RNA，或所述干扰RNA的表达载体；
[0015](c)反义寡核苷酸；
[0016](d)阻断剂；
[0017](e)小分子化合物；
[0018](f)基因编辑技术。
[0019]进一步方案，所述抗体指具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白(immunoglobulin，Ig)即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE中的一种，目前多使用免疫球蛋白IgG。
[0020]所述干扰RNA为siRNA、shRNA中的一种，所述干扰RNA的表达载体为质粒载体、病毒载体中的一种；其中siRNA在肝细胞中瞬时表达，而采用shRNA可以通过病毒等表达载体整合到宿主的肝细胞中实现较长时间的稳定表达，从而使抑制作用更稳定。
[0021]所述小分子化合物指能够与蛋白相互作用，并降低靶蛋白生物活性或竞争性结合的分子，即酶抑制剂、转录因子抑制剂、离子通道阻断剂、受体激动剂、拮抗剂、反向激动剂中的一种。
[0022]所述基因编辑技术指选自CRISPR(规律间隔成簇短回文重复序列)、ZFN(锌指核酸酶)或TALENs(转录激活因子样效应物核酸酶)基因编辑技术中的一种。
[0023]进一步方案，所述脂肪肝为急性饥饿状态或高强度心理压力的非酒精性脂肪性肝病。
[0024]所述脂肪肝为肝细胞甘油三酯堆积引起的脂肪肝。
[0025]更进一步方案，所述LBP蛋白的活性是指LBP蛋白与甘油三酯结合的活性。
[0026]本专利技术的第二个专利技术目的是提供一种预防和/或治疗脂肪肝的药物的筛选方法，其包括以下步骤：先检测受试对象在药物施用前后的LBP蛋白的表达量和/或其与甘油三酯结合比例的变化，根据抑制作用以及抑制作用强弱来筛选。
[0027]申请人在实验过程中发现，肝源性过表达LBP鼠在高脂饮食后更容易导致肝细胞的脂质堆积和肝细胞脂肪变性，最后形成脂肪肝。因此，可以从待筛选药物中选择对LBP蛋白的表达量和/或其与甘油三酯结合比例是否存在抑制作用以及抑制作用强弱的角度出发，进行药物筛选。
[0028]进一步方案，所述药物包含药学上可接受的辅料；
[0029]所述辅料包括稀释剂、粘合剂、抗氧化剂、pH调节剂、防腐剂、润滑剂和崩解剂；
[0030]所述药物的剂型为口服剂或者注射给药的剂型。
[0031]本专利技术的第三个专利技术目的是提供检测肝细胞中LBP蛋白的表达量和/或活性的试剂在制备脂肪肝的诊断和/或预后的试剂中的应用。
[0032]本专利技术的第四个专利技术目的是提供检测LBP蛋白和甘油三酯结合比例的试剂在制备脂肪肝的诊断和/或预后的试剂中的应用。
[0033]本专利技术具有如下有益效果：
[0034]脂肪肝的主要发病机制是各类原因导致肝脏内脂肪(甘油三酯)堆积过多形成的；另外，在急性饥饿状态下或长期高强度心理压力亦会导致脂肪肝的形成，同时高脂饮食诱导的脂肪肝模型一直是备受认可的实验模型。申请人在实验过程中发现，急性饥饿和高强度压力形成的脂肪肝中的脂质包含有LBP蛋白，单独过表达肝源性LBP蛋白进行高脂喂养亦会导致脂肪肝加剧。因此，调控LBP表达量减少LBP和脂质甘油三酯的结合，可以有效缓解上述脂肪肝，预防和/或治疗肝细胞脂肪变性和肝脏的脂质堆积。
附图说明
[0035]图1是实施例1中实验组和对照组小鼠体重的变化情况，
[0036]图2是实施例1、2中实验组和对照组小鼠的肝TG结果，
[0037]图3是实施例2中实验组和对照组小鼠的肝脏脂滴的Western Blot结果，
[0038]图4是实施例3中LBP基因编辑鼠在高脂饮食状态下的体重情况，
[0039]图5是实施例3中小鼠的平面图和肝脏解剖图，
[0040]图6是实施例3中小鼠肝脏TG含量，
[0041]图7是实施例3中小鼠肝细胞的苏本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种抑制肝细胞中LBP蛋白的表达量和/或活性的试剂在制备具有以下至少一种功用的产品中的应用：(1)预防和/或治疗脂肪肝；(2)预防和/或治疗肝细胞脂质堆积过多；(3)降低肝细胞脂肪含量；(4)降低肝脏甘油三酯含量。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述试剂选自以下至少一种：(a)抗体；(b)干扰RNA，或所述干扰RNA的表达载体；(c)反义寡核苷酸；(d)阻断剂；(e)小分子化合物；(f)基因编辑技术。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：所述干扰RNA为siRNA、shRNA中的一种，所述干扰RNA的表达载体为质粒载体、病毒载体中的一种；所述基因编辑技术指选自CRISPR、ZFN或TALENs基因编辑技术中的一种；所述抗体指IgG、IgA、IgM、IgD、IgE中的一种；所述小分子化合物指为酶抑制剂、转录因子抑制剂、离子通道阻断剂、受体激动剂、拮抗剂、反向激动剂中的一种。4.根据权利要求1所述的应用，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：方皓舒，郑茂，张启伦，沈徐婷，袁欣，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：
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