一种缓解干眼症的短双歧杆菌JYBF-117及其菌剂和应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物应用技术领域，具体涉及一种缓解干眼症的短双歧杆菌JYBF

【技术实现步骤摘要】
一种缓解干眼症的短双歧杆菌JYBF
‑
117及其菌剂和应用


[0001]本专利技术涉及微生物应用
，具体涉及一种缓解干眼症的短双歧杆菌JYBF
‑
117及其菌剂和应用。

技术介绍

[0002]干眼症又称角结膜干燥症，是指由多种因素所导致的、以眼睛干涩为主要症状的泪液分泌障碍性眼病。干眼症常见症状包括眼睛干涩、容易疲倦、眼痒、有异物感、痛灼热感、分泌物黏稠、怕风、畏光、对外界刺激很敏感；有时眼睛太干，基本泪液不足，反而刺激反射性泪液分泌，而造成常常流泪；较严重者眼睛会红肿、充血、角质化、角膜上皮破皮而有丝状物黏附，这种损伤日久则可造成角结膜病变，并会影响视力。最近研究认为，眼表面的改变、基于免疫的炎症反应、细胞凋亡、性激素水平的改变等是干眼症发生发展的相关因素，干眼症的病因可分为以下四类：先天性无泪腺、老年性泪腺功能降低或是一些自身免疫性疾病造成泪腺发炎、外伤、感染、自律神经失调或长期佩戴隐形眼镜，导致水液层泪腺泪液分泌不足；眼睑疾病造成睑板腺功能不良，导致油脂层分泌不足；缺乏维生素A1者、慢性结膜炎、化学性灼伤等，导致粘蛋白层分泌不足；眼睑疾病造成眼睑闭合不良、眨眼次数减少、长时间停留在冷气房或户外强风燥热的环境中，导致泪液过度蒸发、泪膜分布不均匀。
[0003]目前，西医治疗干眼症主要通过各类人工泪液、抗生素等缓解干眼症状，短期内见效较快，但是治标不治本。中医治疗干眼症一般为中药治疗或者针灸治疗，常用的中药有桑白皮汤、三仁汤等，针灸能够达到刺激穴位、疏通经络的作用，可以有效改善干眼症所引起的多种症状，但是部分患者较难接受中药味道或针灸治疗。

技术实现思路

[0004]针对现有干眼症治疗方法的效果较差或患者接受度低的问题，本专利技术提供一种缓解干眼症的短双歧杆菌JYBF
‑
117及其菌剂和应用。
[0005]第一方面，本专利技术提供一种缓解干眼症的短双歧杆菌JYBF
‑
117，短双歧杆菌（Bifidobacterium breve）JYBF
‑
117于2022年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.24536。
[0006]第二方面，本专利技术提供一种短双歧杆菌JYBF
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117菌剂，包括上述短双歧杆菌JYBF
‑
117的菌粉。
[0007]进一步的，制备方法包括：（1）制备MRS平板培养基和MRS液体培养基；（2）取保藏的短双歧杆菌JYBF
‑
117在MRS平板培养基上活化，将活化后菌接种于MRS液体培养基中，培养获得菌液；（3）将菌液离心后，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤后，重悬于质量浓度为15%的复原脱脂乳中，调整悬浊液的浓度获得菌悬液，冷冻干燥获得菌粉；将菌粉与葡萄糖混合，
制成短双歧杆菌JYBF
‑
117菌剂。
[0008]进一步的，步骤（2）中，接种量为1%~2%，培养条件为35~37℃，培养时间为48~60h。
[0009]进一步的，步骤（3）中，调整悬浊液的浓度为1.0
×
10
10
~2.0
×
10
10
cfu/mL。
[0010]第三方面，本专利技术提供上述短双歧杆菌JYBF
‑
117在制备缓解干眼症的产品方面的应用。
[0011]进一步的，缓解干眼症的产品为缓解环境诱导形成的干眼症的产品。
[0012]进一步的，缓解干眼症的产品为缓解维生素A缺乏引起的干眼症的产品。
[0013]进一步的，缓解干眼症的产品可以抑制炎症因子IL
‑
1β、IL
‑
6、TNF
‑
α表达。
[0014]本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供的短双歧杆菌JYBF
‑
117可制成菌剂，经实验证明，短双歧杆菌JYBF
‑
117菌剂可以有效缓解环境诱导或维生素A缺乏形成的干眼症，增加泪液分泌量，提高泪膜稳定性，抑制干眼症相关炎症因子IL
‑
1β、IL
‑
6、TNF
‑
α的表达，减轻炎症发生程度。而且该菌剂使用方法简便，治疗效果显著，患者易接受。
具体实施方式
[0015]为了使本
的人员更好地理解本专利技术中的技术方案，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本专利技术保护的范围。
[0016]实施例1菌种的分离鉴定1、菌株筛选及纯化（1）菌株来源：婴幼儿粪便，于2021年9月采集于山东省潍坊市青州市；（2）制备样品：
①
取灭菌后的0.85%生理盐水至于无菌三角瓶中，然后将1g婴幼儿粪便加入其中，振荡，待用；
②
对步骤
①
的溶液稀释制成不同浓度梯度的样品，分别为10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6、10
‑7，标号分别为1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#，待用；（3）制备MRS平板培养基：将原料蛋白胨10g、牛肉粉5g、三水醋酸钠5g、七水磷酸氢二钾2g、吐温80 1mL、四水硫酸锰0.05g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、七水硫酸镁0.2g、琼脂15g、蒸馏水1000mL混合后，自然pH，搅拌菌液后，在121℃、0.1MPa下灭菌20min，将灭菌后的培养基倒入平皿中，放凉后待用；（4）培养：将步骤
②
的1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#号溶液分别使用涂布器涂布MRS平板培养基上，于37℃、厌氧条件下培养48h；（5）按照以下菌落特征挑选菌落：菌落直径1~2mm，菌落圆润、边缘整齐、微白色中间有凸起；（6）分离纯化：根据步骤（5）的菌落特征挑取5个单菌落，采用划线法接种至MRS平板培养基上，于37℃、厌氧条件下培养48h，挑取单菌落，置于甘油管中
‑
70℃保藏。
[0017]2、鉴定
将分离纯化后得到的单菌落送去鉴定，鉴定单位：生工生物工程（上海）股份有限公司。
[0018]（1）鉴定过程中，使用的引物如下：27F：5'
‑
AGAGTTTGATCCTGGCTCAG
‑
3'1492R：5'
‑
GGTTACCTTGTTACGACTT
‑
3'（2）鉴定过程中，得到菌株的基因序列如下：TCACCTTAGACGGCTCCCTCCCGCAAGGGGTTAGGCCACCGGCTTCGGGTGCTGCCCACTTTCATGAC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1. 一种缓解干眼症的短双歧杆菌JYBF
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117，其特征在于，短双歧杆菌（Bifidobacterium breve）JYBF
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117于2022年3月17日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.24536。2.一种短双歧杆菌JYBF
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117菌剂，其特征在于，包括如权利要求1所述短双歧杆菌JYBF
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117的菌粉。3.如权利要求2所述的短双歧杆菌JYBF
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117菌剂，其特征在于，制备方法包括：（1）制备MRS平板培养基和MRS液体培养基；（2）取保藏的短双歧杆菌JYBF
‑
117在MRS平板培养基上活化，将活化后菌接种于MRS液体培养基中，培养获得菌液；（3）将菌液离心后，收集菌体，使用无菌生理盐水洗涤后，重悬于质量浓度为15%的复原脱脂乳中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：司书锋，王雪娇，张华磊，刘鑫，田华，邓爱欣，曹艳萍，
申请(专利权)人：山东中科嘉亿生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：