一株产碱菌属微生物及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物应用领域，具体涉及一株产碱菌属微生物及其应用。具体的技术特征为：一株产碱菌属微生物(Alcaligenes sp.)HBKS

【技术实现步骤摘要】
一株产碱菌属微生物及其应用


[0001]本专利技术属于微生物应用领域，具体涉及一株产碱菌属微生物及其应用。

技术介绍

[0002]黄瓜枯萎病又名萎蔫病、蔓割病、死秧病，其发病机理为：病原菌侵入黄瓜的根颈部并寄生于维管束内，阻止水和养分的吸收，导致黄瓜植株发生系统性病害。一旦发病，作物产量损失往往高达50％以上，甚至可能导致绝收。
[0003]目前，黄瓜枯萎病的防治以使用化学农药为主。但使用化学农药容易产生抗药性，且随之而来的农残问题容易进一步引起环境污染和人畜安全等其它问题。与之相对的，生物防治法具有安全、无毒、环保等特点。现有的黄瓜枯萎病生防菌以芽孢杆菌属和假单胞菌属微生物为主，可用微生物种类有限。
[0004]因此，如果能开发出新的可有效防治黄瓜枯萎病的微生物，将具有重要的科研和应用价值。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一株新的产碱菌，所述产碱菌分离自小麦叶片，不仅具有小麦促生作用，而且可有效防治黄瓜枯萎病。
[0006]为实现上述专利技术目的，本专利技术所采用的技术方案是：一株产碱菌(Alcaligenes sp.)HBKS
‑
C1，于2022年11月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.26161。
[0007]相应的，一株产碱菌(Alcaligenes sp.)HBKS
‑
C1，其16S rDNA如SEQ ID NO：1所示。
[0008]相应的，利用所述产碱菌制备的菌制剂或微生物发酵液。
[0009]相应的，所述产碱菌或所述菌制剂或微生物发酵液在植物病害防治中的应用。
[0010]优选的，所述植物病害由黄瓜枯萎病病原菌引起。
[0011]优选的，所述应用条件为：15～37℃、pH＝6～10。
[0012]相应的，所述产碱菌或所述菌制剂或微生物发酵液在植物促生中的应用。
[0013]优选的，在促进植物萌芽和/或促进植物出苗中的应用。
[0014]优选的，所述应用利用所述产碱菌的微生物发酵液进行。
[0015]优选的，所述应用条件为：15～37℃、pH＝6～10。
[0016]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术提供了一株新的产碱菌，根据分类属于新的种。所述产碱菌在防治植物病害尤其是黄瓜枯萎病上有明显作用，还可用于小麦病害防治。同时，所述产碱菌还具有较好的植物促生作用，还可能具有其它未知作用，具有重要的研究意义和较好的应用推广潜力。
附图说明
[0017]图1为HBKS
‑
C1菌的个体形态图；
[0018]图2为HBKS
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C1菌的系统发育树；
[0019]图3为HBKS
‑
C1菌抑制黄瓜枯萎病病原菌生长示意图；
[0020]图4为HBKS
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C1促进小麦种子根系生长示意图；
[0021]图5为HBKS
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C1促进小麦植株生长示意图。
具体实施方式
[0022]本专利技术提供了一株新的产碱菌(Alcaligenes sp.)HBKS
‑
C1，于2022年11月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.26161，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。所述产碱菌是产碱菌属(Alcaligenes sp)的新种。
[0023]所述产碱菌在植物病害尤其是黄瓜枯萎病病菌引起的植物病害的防治中具有应用潜力。
[0024]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。所获得的数据均为进行至少3次重复后获得的平均值，且各重复获得的均为有效数据。
[0025]实施例一：微生物的筛选与鉴定
[0026]本实施例涉及培养基如下：
[0027]R2A培养基(g/L)：酵母浸出粉0.5、蛋白胨0.5、酪蛋白水解物0.5、葡萄糖0.5、可溶性淀粉0.5、磷酸氢二钾0.3、无水硫酸镁0.024、丙酮酸钠0.3、琼脂15.0。
[0028]马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)：马铃薯200g、葡萄糖20g、琼脂18g，蒸馏水1000mL，自然pH值，115℃灭菌30min。
[0029]1、微生物筛选。采集来自河北秦皇岛市昌黎县的小麦叶，将采取的样品放入保鲜袋中，立即送入实验室。将采集的样品用自来水冲洗干净，再用无菌水洗涤，自然阴干。将阴干后的植物组织剪成2～3mm的小段，用体积分数为2～3％的次氯酸钠溶液浸泡5min，取出后用无菌水冲洗5次，将最后一次的洗涤水涂布在PDA平板上，于37℃培养两天，若无菌生长，说明表面消毒彻底。
[0030]将完成表面消毒的1g叶片用无菌研钵进行研磨，研磨期间逐步的加入1mL的R2A培养基。将研磨好的匀浆与9mL R2A培养基混合，按10
‑1、10
‑2、10
‑3、10
‑4、10
‑5、10
‑6梯度进行连续稀释，将最小稀释梯度的培养液取200μL涂布在R2A培养基(平板)上，做三个平行。将涂布好的各平板置于28℃培养2～3天后，获得一株白色菌落，命名为HBKS
‑
C1。之后再在平板进一步纯化4～5次该菌落,最后在20％(v/v)甘油作为保护剂的R2A培养中冻存在
‑
80℃。
[0031]2、生理生化特征鉴定。参照《伯杰氏细菌鉴定手册》第八版及《常见细菌鉴定手册》中实验方法对菌株进行系列生理特征鉴定；其中，碳源利用情况采用Biolog全自动细菌鉴定系统，脂肪酸成分测定用GC
‑
MS分析。结果如表1所示，
“‑”
表示阴性；“+”表示阳性。
[0032]表1菌株HBKS
‑
C1的底物利用情况
[0033][0034]从表1中可以看出，菌株HBKS
‑
C1可以利用的底物为L
‑
丙氨酸、L
‑
天冬氨酸、L
‑
谷氨酸、L
‑
组胺、对羟基苯乙酸、丙酮酸甲酯、L
‑
乳酸、柠檬酸、α
‑
酮
‑
戊二酸、L
‑
苹果酸、溴
‑
丁二酸、吐温40、α
‑
羟基
‑
丁酸和β
‑
羟基
‑
D,L丁酸。
[0035]使用R2A培养基培养，将菌株HBKS
‑
C1分别在不同温度(4、10、15、20、25、28、30、35、37、40℃)、pH(3、4、5、6、7、8、9、10、11)、盐度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株产碱菌(Alcaligenes sp.)HBKS
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C1，其特征在于：于2022年11月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.26161。2.一株产碱菌(Alcaligenes sp.)HBKS
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C1，其特征在于：其16S rDNA如SEQ ID NO：1所示。3.利用权利要求1或2所述产碱菌制备的菌制剂或微生物发酵液。4.权利要求1或2所述产碱菌或权利要求3所述菌制剂或微生物发酵液在植物病害防治中的应...

【专利技术属性】
技术研发人员：代玉梅，闫立英，武春成，李晓丽，宋晓飞，李向丽，谢洋，马振海，张璐，周国彦，
申请(专利权)人：昌黎县嘉诚农业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：