铁死亡诱导剂RSL3在制备用于治疗胃肠间质瘤的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了RSL3在铁死亡诱导剂RSL3在制备用于治疗胃肠间质瘤的药物中的应用。本发明专利技术首先通过生物实验发现RSL3可显著抑制GIST

【技术实现步骤摘要】
铁死亡诱导剂RSL3在制备用于治疗胃肠间质瘤的药物中的应用


[0001]本专利技术涉及铁死亡诱导剂RSL3在制备用于治疗胃肠间质瘤的药物中的应用，属于生物医药


技术介绍

[0002]胃肠间质瘤(gastrointestinal stromal tumors，GIST)是胃肠道最常见的间质来源肿瘤，早期难以诊断，且对放化疗均不敏感，外科手术切除是GIST最主要和最有效的治疗手段，但术后常常发生复发和转移。甲磺酸伊马替尼(Imatinib mesylate，IM)的出现显著改善了GIST患者的预后。然而，对IM的敏感性取决于突变类型，治疗效果有限。虽然超过80％的患者可以从IM治疗中获益，但是一半患者在治疗后2年内会发生进展。二线、三线、四线靶向药物均存在继发性耐药问题，治疗效果仍难令人满意，最新的临床与基础研究聚焦于寻找新的治疗靶标。
[0003]2012年Dixom等将一种新的细胞死亡形式命名为铁死亡(Ferroptosis)。铁死亡是一种由致死性脂质过氧化引起的调节性细胞死亡，铁积累和脂质过氧化是铁死亡过程中启动膜氧化损伤的关键因素。Ferrostatin
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1(Fer
‑
1)和铁螯合剂去铁胺(deferoxamine，DFO)可以抑制这一过程。目前检测铁死亡进程的生化指标主要为脂质活性氧(lipid reactive oxygen species，Lipid ROS)水平、细胞内游离的二价铁离子(Fe
2+
)水平、丙二醛(Malondialdehyde，MDA，脂代谢的一种氧化终产物，常被用来衡量脂代谢紊乱水平)水平。此外，发生铁死亡的细胞在电镜下可被观测到线粒体明显缩小变形，线粒体嵴减少消失，线粒体膜褶皱消失凝聚继而破裂。铁死亡的作用机制主要分为依赖谷胱甘肽转运系统(System xc
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，由阳离子氨基酸转运蛋白7成员11
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SLC7A11和阳离子氨基酸转运蛋白3成员2
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SLC3A2构成)和谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4，GPX4)的经典铁死亡通路；以及脂质过氧化代谢异常、铁代谢异常等非经典通路。铁死亡的本质是由膜脂质过氧化产生的Lipid
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ROS攻击细胞内生物大分子，导致细胞死亡。细胞内脂质氧化和还原的动态平衡失衡是铁死亡发生的重要原因，谷胱甘肽过氧化物酶蛋白家族(Glutathione peroxidase，GPXs)是细胞抵抗过氧化损伤的重要蛋白，GPX4在细胞内是唯一一个用于脂质体过氧化物还原的GPXs，可以使得脂质过氧化的过氧键转变为羟基，失去其过氧化物的活性，被认为是生物体内保护生物膜不受脂质过氧化物损伤的关键蛋白，因此GPX4酶活性丧失是铁死亡发生的主要原因。
[0004]而RAS选择性致死性小分子3(RSL3)也可诱导这种细胞死亡方式，RSL3是一种铁死亡的激活剂，通过直接结合或减少谷胱甘肽来使GPX4失活，诱导脂质过氧化而诱发的活性氧生成，从而导致细胞死亡。目前几种FDA批准的药物已经被确定在不同的肿瘤中通过铁死亡诱导发挥作用。主要包括System xc
‑
抑制剂(Erastin、柳氮磺胺吡啶、索拉非尼)、谷胱甘肽耗竭因子(FIN56)和GPX4抑制剂(RSL3)。然而，GIST中铁死亡相关研究较少。
[0005]目前已有许多肿瘤被报道与铁死亡有关，靶向铁死亡以消除肿瘤正成为肿瘤治疗
的一种有前途的新方法。GIST中是否存在铁死亡以及铁死亡诱导剂RSL3对GIST是否有效目前尚不清楚。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的是：为了解决目前用于治疗胃肠间质瘤的药物效果不佳的技术问题，本专利技术旨在提供铁死亡诱导剂RSL3在制备用于治疗胃肠间质瘤的药物中的应用。
[0007]为了解决上述技术问题，本专利技术提供了铁死亡诱导剂RSL3在制备用于治疗胃肠间质瘤的药物中的应用。RSL3的CAS号为1219810
‑
16
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8，化学式为C
23
H
21
ClN2O5。
[0008]优选地，所述RSL3作为铁死亡诱导剂抑制胃肠间质瘤细胞的增殖、诱导其死亡。
[0009]优选地，所述胃肠间质瘤细胞为T1和882细胞。
[0010]本专利技术首先观察了RSL3对胃肠间质瘤细胞的作用。利用CCK8技术检测药物处理后的细胞活性，并绘制增殖曲线，发现RSL3可显著抑制GIST
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T1和GIST
‑
882细胞增殖活性。并且铁死亡抑制剂Ferrostatin
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1与RSL3联用，能部分缓解RSL3对肿瘤细胞的杀伤作用。
[0011]本专利技术结果显示RSL3能下调GPX4在胃肠间质瘤细胞GIST
‑
T1和GIST
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882内的表达水平。
[0012]利用裸鼠GIST荷瘤模型，分别给予DMSO、RSL3用药处理，与体外实验类似，结果发现RSL3能发挥抑制肿瘤的效果。
[0013]以上结果共同验证了RSL3通过诱导胃肠间质瘤细胞铁死亡，从而抑制胃肠间质瘤细胞生长，这将有望为临床中治疗胃肠间质瘤提供新的方案策略。
[0014]与现有技术相比，本专利技术的有益效果在于：
[0015]本专利技术发现RSL3用药后下调胃肠间质瘤细胞内GPX4表达，使得细胞内脂质过氧化物积聚，最终诱导胃肠间质瘤细胞发生铁死亡，从而有效抑制胃肠间质瘤细胞增殖；本专利技术通过探索铁死亡诱导剂RSL3诱导胃肠间质瘤中铁死亡的机制，为GIST提供了新的治疗靶标和方向，具有重要的临床应用价值。
附图说明
[0016]图1为通过CCK
‑
8实验检测RSL3对胃肠间质瘤细胞T1和882的增殖活性的影响；
[0017]图2为铁死亡抑制剂Ferrostatin
‑
1与RSL3联用后对胃肠间质瘤细胞T1和882的增殖活性的影响；
[0018]图3为蛋白质免疫印迹实验检测RSL3处理后胃肠间质瘤细胞T1和882内GPX4的表达量；
[0019]图4为RSL3处理成瘤小鼠后的肿瘤图片和肿瘤组织免疫组化结果。
具体实施方式
[0020]为使本专利技术更明显易懂，兹以优选实施例，并配合附图作详细说明如下。
[0021]实施例1：RSL3抑制胃肠间质瘤细胞活力、诱导胃肠间质瘤细胞死亡
[0022]将处于对数生长期的GIST
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T1和GIST
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882细胞消化离心重悬后，使用细胞计数仪计数，按每孔5000个细胞加入96孔板中，补充培养基至100μL，放置于恒温培养箱中过夜。将RSL3用DMSO溶解，按浓度梯度将RSL3配置成工作液。吸去旧培养基，按浓度梯度，每孔加入
150μL等量工作液或对照培养基。置于恒温培养箱中培养24h。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.铁死亡诱导剂RSL3在制备用于治疗胃肠间质瘤的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述RSL3作为铁死亡诱导...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙祥飞，林霄汉，高晓东，沈坤堂，
申请(专利权)人：复旦大学附属中山医院，
类型：发明
国别省市：