沼湿草的组织培养方法技术

本发明专利技术涉及沼湿草的组织培养方法，包括无菌材料的获得，芽的分化和增殖，不定芽壮苗培养，生根培养，炼苗与移栽等步骤。与现有技术相比，本发明专利技术大大提高了沼湿草的繁殖速度和苗的整齐度，可实现育苗的工厂化大批量生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种植物的组织培养方法，尤其是涉及。
技术介绍
沼湿草为禾本科沼湿草属植物，紧凑丛生，高可达90cm，冠幅45cm。叶有白色条 纹，长17-25cm，花茎紧凑直立，稍带拱形，棕色圆锥形花序与绿色叶片对比鲜明，开花时，草 的整体外观更加挺直。该草喜阳光充足或半阴环境，可耐轻度干旱或轻度潮湿的土壤，抗病 虫害能力强。秋季，草体下部叶片会变成黄色或浅红色，观赏性更强。可用于园林绿化、岸 边或庭院中栽培，具有优良的生态适应性和观赏价值。但是作为国外引进的新品种，该植物 的弓I种数量较少，种苗供应受限制。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种可提高繁殖速 度和苗的整齐度的。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)无菌材料的获得在春季取萌发的沼湿草的小芽，除去叶片，用自来水冲洗l_3h，再于超净工作 台上，依次利用质量浓度为70-75%的乙醇浸泡10-50s，体积浓度为0. 5_2%。的汞浸泡 10-30min,再用无菌水冲洗4_6次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成 0. 5-2cm的带腋芽的节段，节段接种于腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖节段接种于腋芽诱导培养基上1-3周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3-4 周后节段上可以看见芽分生组织，再培养1-2个月，芽可以长到3-4cm长，将不定芽切下移 入不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽基部的愈伤组织较多，但不定芽仍增殖较快， 生长发育良好，并无玻璃化等不良现象；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基里诱导出的不定芽处于矮化状态，将不定芽分成小丛，然后 将分成小丛的不定芽转至壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，20-30天后可以长到3-4cm ；(4)生根培养取3_4cm的不定芽小植株，转接入生根培养基中诱导生根，8-15天后小植株幼苗 的基部分化出白色的根原基，25-35天后可以长至4-6cm，根系粗壮，须根众多，生根率为 90-100% ；(5)炼苗与移栽在生根培养15-25天，根系长至0. 5-2cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼 苗，于室内开瓶炼苗1-3天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化25-40天，即可移栽室外，并给予肥水管理，移栽成活率为90-100%。所述的腋芽诱导培养基包括MS+6-BA1. 0-3. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培养基包括MS+6-BA0. 5-2. 0mg/L+NAA0. 05-0. 2mg/L。所述的不定芽增殖培养基优选MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L。所述的壮苗培养基包括MS+6-BA0. 05-2. 0mg/L+NAA0. 1-0. 2mg/L。所述的壮苗培养基优选MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L。所述的生根培养基包括MS+NAA0. 1-0. 3mg/L。所述的生根培养基优选MS+NAA0. lmg/L。所述的培养基还包括蔗糖20_40g/L、琼脂粉4_8g/L，培养基pH5. 5-6. 0,培养温度 24-26°C，光照 1500-25001x。与现有技术相比，本专利技术通过组织培养技术，极大提高了沼湿草的繁殖速度和苗 的整齐度，可以实现育苗的工厂化大批量生产。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。实施例1(1)无菌材料的获得在春季取萌发的沼湿草的小芽，除去叶片，用自来水冲洗lh，再于超净工作台上， 依次利用质量浓度为70%的乙醇浸泡10s，体积浓度为0. 5%。的汞浸泡lOmin，再用无菌水 冲洗4次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成0. 5cm的带腋芽的节段， 节段接种于包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. 05mg/L的腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖节段接种于腋芽诱导培养基上1周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，3周后 节段上可以看见芽分生组织，再培养1个月，芽可以长到3cm长，将不定芽切下移入包括 MS+6-BA0. 5mg/L+NAA0. 05mg/L的不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽基部的愈伤组 织较多，但不定芽仍增殖较快，生长发育良好，并无玻璃化等不良现象；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基里诱导出的不定芽处于矮化状态，将不定芽分成小丛，然后 将分成小丛的不定芽转至包括MS+6-BA0. 05mg/L+NAA0. lmg/L的壮苗培养基上，不定芽迅 速伸长，20天后可以长到3cm;(4)生根培养取3cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0. lmg/L的生根培养基中诱导生根， 8天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，25天后可以长至4cm，根系粗壮，须根众多， 生根率为90% ；(5)炼苗与移栽在生根培养15天，根系长至0. 5cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室 内开瓶炼苗1天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化25天，即可 移栽室外，并给予肥水管理，移栽成活率为90%。上述各种情况的培养基还包括蔗糖20g/L、琼脂粉4g/L，培养基pH5. 5，培养温度24°C，光照 15001x。实施例2(1)无菌材料的获得在春季取萌发的沼湿草的小芽，除去叶片，用自来水冲洗2h，再于超净工作台上， 依次利用质量浓度为75%的乙醇浸泡30s，体积浓度为1%。的汞浸泡15min，再用无菌水冲 洗5次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成1cm的带腋芽的节段，节段 接种于包括MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. lmg/L的腋芽诱导培养基上；(2)芽的分化和增殖节段接种于腋芽诱导培养基上3周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，4周后 节段上可以看见芽分生组织，再培养1个半月，芽可以长到4cm长，将不定芽切下移入包括 MS+6-BA2. 0mg/L+NAA0. 2mg/L的不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽基部的愈伤组 织较多，但不定芽仍增殖较快，生长发育良好，并无玻璃化等不良现象；(3)不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基里诱导出的不定芽处于矮化状态，将不定芽分成小丛，然后 将分成小丛的不定芽转至包括MS+6-BA1. 0mg/L+NAA0. lmg/L的壮苗培养基上，不定芽迅速 伸长，20天后可以长到4cm;(4)生根培养取4cm的不定芽小植株，转接入包括MS+NAA0. lmg/L的生根培养基中诱导生根，10 天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，30天后可以长至6cm，根系粗壮，须根众多， 生根率为100% ；(5)炼苗与移栽在生根培养20天，根系长至1cm时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室内 开瓶炼苗3天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化30天，即可移 栽室外，并给予肥水管理，移栽成活率为100%。上述各种情况的培养基还包括蔗糖30g/L、琼脂粉6g/L，培养基pH5. 8，培养温度 25°C，光照 20001x。实施例3(1)无菌材料的获得在春季取萌发的沼湿草的小芽，除去叶片，用自来水冲洗3h，再于超净工作台上， 依次利用质量浓度为75%的乙醇浸泡本文档来自技高网...

【技术保护点】
沼湿草的组织培养方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：（１）无菌材料的获得在春季取萌发的沼湿草的小芽，除去叶片，用自来水冲洗１－３ｈ，再于超净工作台上，依次利用质量浓度为７０－７５％的乙醇浸泡１０－５０ｓ，体积浓度为０．５－２‰的汞浸泡１０－３０ｍｉｎ，再用无菌水冲洗４－６次，利用无菌滤纸吸干小球茎表面的水分后，将小球茎切成０．５－２ｃｍ的带腋芽的节段，节段接种于腋芽诱导培养基上；（２）芽的分化和增殖节段接种于腋芽诱导培养基上１－３周后，腋芽部位开始膨大，出现绿色突起，３－４周后节段上可以看见芽分生组织，再培养１－２个月，芽可以长到３－４ｃｍ长，将不定芽切下移入不定芽增殖培养基中进行增殖培养，不定芽基部的愈伤组织较多，但不定芽仍增殖较快，生长发育良好，并无玻璃化等不良现象；（３）不定芽壮苗培养在不定芽增殖培养基里诱导出的不定芽处于矮化状态，将不定芽分成小丛，然后将分成小丛的不定芽转至壮苗培养基上，不定芽迅速伸长，２０－３０天后可以长到３－４ｃｍ；（４）生根培养取３－４ｃｍ的不定芽小植株，转接入生根培养基中诱导生根，８－１５天后小植株幼苗的基部分化出白色的根原基，２５－３５天后可以长至４－６ｃｍ，根系粗壮，须根众多，生根率为９０－１００％；（５）炼苗与移栽在生根培养１５－２５天，根系长至０．５－２ｃｍ时，选择根系发达、生长健壮的无菌幼苗，于室内开瓶炼苗１－３天，然后将苗取出，洗净其根部的琼脂，栽于温室内的苗床中驯化２５－４０天，即可移栽室外，并给予肥水管理，移栽成活率为９０－１００％。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈建华，黄建荣，沈勤，
申请(专利权)人：上海上房园林植物研究所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]