ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用。本发明专利技术通过在肿瘤组织中分析ERRFI1的表达水平，对肝癌患者的预后进行分析，从而更好的为患者提供可行的治疗方案，提供精准医疗，有助于延长肝癌患者的生存时间，提高生存率。提高生存率。提高生存率。

【技术实现步骤摘要】
ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用


[0001]本专利技术属于肿瘤标志物
，具体涉及一种ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用。
技术背景
[0002]肝癌是全球常见的恶性肿瘤之一，也是肿瘤导致死亡的第二大原因。世界范围内，每年肝癌新发病例约为70万，其发病率和死亡率高居恶性肿瘤前三位，仅次于肺癌和胃癌。原发性肝癌的发病原因不明，目前认为与肝炎病毒感染、黄曲霉毒素及某些化学致癌物质等因素有关；继发性肝癌是其他部位的恶性肿瘤转移到肝脏所致。患者有腹痛、腹部肿块、黄疸、消瘦等临床表现。早期或部位局限的肝癌患者通常采用手术切除术，中晚期及复发肝癌患者通常采用化疗手段。然而，耐药性和肿瘤异质性限制了药物的疗效，导致患者对化疗的短暂反应甚至无反应。
[0003]ERRFI1是早期反应蛋白，定位在细胞质，受胞内胞外多种刺激诱导，如EGF、胰岛素、血管活性肽、糖皮质激素、内质网应激、缺氧等。ERRFI1激活主要由MAPK途径，通过MEK
‑
ERK途径和糖皮质激素受体介导。ERRFI1的表达受包括miR
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200、miR
‑
148a、miR
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126、miR
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205等在内的小RNA负性调控。ERRFI1在多种肿瘤中异常表达。例如，79%的人乳头状甲状腺癌癌症患者标本中发现ERRFI1的启动子甲基化。ERRFI1在人类子宫内膜癌细胞中介导孕酮介导的生长抑制，ERRFI1的过度表达会诱导细胞凋亡，抑制子宫内膜癌细胞的增殖和侵袭。ERRFI1在三阴性乳腺癌的进展也发挥重要作用。研究发现，ERRFI1在三阴性乳腺癌中上调，并与患者的不良临床结果呈正相关。

技术实现思路

[0004]鉴于ERRFI1在肿瘤进程的作用，本专利技术目的在于：提供一种ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用。
[0005]本专利技术的再一目的在于：提供一种评价肝癌预后的试剂。
[0006]本专利技术目的通过以下方案实现：一种ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用，通过检测患者的ERRFI1表达情况作为肝癌预后的标志物。
[0007]通过在肿瘤组织中进行ERRFI1的表达情况分析，可以准确预测肝癌患者的预后情况。
[0008]进一步的，检测的样本为患者肝癌组织的石蜡切片。
[0009]本专利技术还提供一种能够评价肝癌预后的试剂，所述试剂能够在蛋白水平上检测ERRFI1的表达情况。
[0010]所述试剂为ERRFI1抗体。
[0011]ERRFI1抗体的使用浓度为6.5
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26μg/ml抗体稀释液。
[0012]较优的，ERRFI1抗体的使用浓度为26μg/ml抗体稀释液。
[0013]本专利技术综合利用了临床样本的免疫组织化学分析，发现ERRFI1在肝癌组织中表达
较低。本专利技术通过分析ERRFI1在肿瘤组织的表达情况，对肝癌患者的预后进行分析，从而更好的为患者提供可行的治疗方案，提供精准医疗，有助于延长肝癌患者的生存时间，提高生存率。
附图说明
[0014]附图1：免疫组化结果显示ERRFI1在肝癌组织中表达较高，此处ERRFI使用浓度为26μg/ml抗体稀释液；附图2: GEO数据库结果显示ERRFI1在肝癌组织中的表达情况。
[0015]利用公共数据库GEO验证ERRFI1在肝癌组织中的表达情况。
具体实施方式
[0016]ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用,利用免疫组织化学分析肝癌患者肿瘤组织中ERRFI1的表达情况。
[0017]收集上海市浦东医院肝癌患者的活检组织石蜡样本，制作成蜡块，切成4μm厚的石蜡组织切片备用,石蜡切片免疫组化步骤如下：1. 蜡切片放入60℃烘箱，烘烤过夜；2. 切片脱蜡：将切片依次放入二甲苯I、II、III溶液中每次15min，100%乙醇I、II每次10min，95%乙醇I、II每次10min后，75%乙醇I、II每次10min，双蒸水冲洗5min，PBS漂洗3次，每次5min；3. 修复：将石蜡切片放入柠檬酸修复液（0.01M，pH6.0）中，微波炉中火加热5
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10min，晾至室温，重复加热三次；然后，PBS洗3次，每次5min；4. 甩干PBS，滴加10%正常山羊血清室温封闭1h；5. 甩干封闭液，滴ERRFI1一抗，湿盒中4℃孵育过夜；6. PBS洗3次，每次10min，滴加生物素标记的二抗（1:200），室温孵育1h；7. PBS洗3次，每次10min，过氧化物酶HRP标记的链球菌亲和素室温标记1h；8. PBS洗3次，每次10min，DAB进行显色，在光学显微镜下观察，待棕色显示到合适时，立刻放入双蒸水中，终止显色；9. 在苏木素中进行复染，在盐酸酒精中进行分色；10. 脱水：在95%乙醇I、II、III中每次5min；100%乙醇I、II中每次5min；二甲苯I、II中每次5min；11. 用中性树胶封片，在光学显微镜下观察切片，进行拍照，分析结果。
[0018]实施例1：所有操作按照石蜡切片免疫组化步骤，步骤5中ERRFI1使用浓度为6.5μg/ml抗体稀释液。
[0019]实施例2：所有操作按照石蜡切片免疫组化步骤，只是步骤5中，ERRFI1使用浓度为13μg/ml抗体稀释液。
[0020]实施例3：所有操作按照石蜡切片免疫组化步骤，只是步骤5中，ERRFI1使用浓度为26μg/m抗
体稀释液l。
[0021]免疫组化结果显示ERRFI1在肝癌组织中表达高于癌旁组织，如图1所示。
[0022]通过上述实施例发现，ERRFI1使用浓度是26μg/ml抗体稀释液为最优浓度。
[0023]如图2，利用公共数据库GEO验证ERRFI1在肝癌组织中的表达情况， 该数据库收集了12名肝癌患者的肿瘤组织及相应癌旁组织，并进行测序分析。测序结果表明，ERRFI1在肝癌组织中的相对表达率明显提高，说明ERRFI1在肝癌患者体内表达增加。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种ERRFI1作为肝癌预后标志物的应用，其特征在于，通过检测肝癌患者的ERRFI1表达情况，作为肝癌预后的标志物。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，检测的样本为患者肝癌组织的石蜡切片。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，患者肝癌组织的石蜡切片按下述步骤制备：活检组织石蜡样本，制作成蜡块，切成4μm厚的石蜡组织切片备用,石蜡切片免疫组化步骤如下：1）. 蜡切片放入60℃烘箱，烘烤过夜；2）. 切片脱蜡：将切片依次放入二甲苯I、II、III溶液中每次15min，100%乙醇I、II每次10min，95%乙醇I、II每次10min后，75%乙醇I、II每次10min，双蒸水冲洗5min，PBS漂洗3次，每次5min；3）. 修复：将石蜡切片放入柠檬酸修复液（0.01M，pH6.0）中，微波炉中火加热5
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10min，晾至室温，重复加热三次；然后，PBS洗3次，每次5min；4）. 甩干PBS，滴加10%正常山羊血清室温封闭1h；5）. 甩干封闭液，...

【专利技术属性】
技术研发人员：崔大祥，崔明青，彭家伟，
申请(专利权)人：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司，
类型：发明
国别省市：