一种用于非小细胞肺癌的检测方法及试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种用于非小细胞肺癌的检测方法及试剂盒，其特征在于检测患者血清中的SERPINA6和GPDLD1的含量，并将其与正常人的SERPINA6和GPDLD1的含量进行比较，如果患者SERPINA6和GPDLD1的含量均高于正常人的SERPINA6和GPDLD1的含量，则患者患有小细胞肺癌的可能性高。本发明专利技术根据正常人和非小细胞肺癌患者的血清样品实验检测分析，获得一组差异表达蛋白质包括SERPINA6和GPDLD1，并且在100例血清中进行了验证，结果表明，所述的一组差异表达蛋白质SERPINA6和GPDLD1作为联合诊断标志物，有助于诊断非小细胞肺癌的敏感度和特异性。异性。异性。

【技术实现步骤摘要】
一种用于非小细胞肺癌的检测方法及试剂盒


[0001]本专利技术属于生物医药
，具体涉及一种用于非小细胞肺癌的检测方法及试剂盒。

技术介绍

[0002]肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,已成为我国城市人口恶性肿瘤死亡原因的第1位。非小细胞型肺癌包括鳞状细胞癌(鳞癌)、腺癌、大细胞癌，与小细胞癌相比其癌细胞生长分裂较慢,扩散转移相对较晚。非小细胞肺癌约占所有肺癌的80％，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。
[0003]非小细胞肺癌一经发现，一般为中晚期，手术治疗效果不佳。因此，非小细胞肺癌的早期诊断对其治疗有重要意义。同时，研究表明吸烟及环境质量下降与非小细胞肺癌发病密切相关，因此非小细胞肺癌的早期筛查具有较强的靶向性。
[0004]目前肺癌的检测手段包括影像学技术、组织活检和体外检测。目前，低剂量CT检查是较为推荐的用于肺癌及肺部结节的筛查。但由于高误报率、潜在的过度诊断可能、过高的成本以及可能造成的辐射暴露危害等原因导致其使用受到一定限制。而组织活检，如基于肺癌标志物，对肺癌的治疗有积极意义，但对患者创伤大，无法进行肺癌的早期诊断。新兴的肺癌体外检测大多基于血清中肺癌标志物micRNA含量，如miR
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106a、miR
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20a、等，进而实现肺癌的早期诊断和高风险人群筛查，但利用核酸检测的检测机制较为复杂，对样本要求较高且容易出现假阳性。
[0005]针对非小细胞肺癌的血清标志物，也已进行了一些研究。例如，中国授权专利技术专利CN109722480B公开了FGF19和β
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klotho可各自或联合作为生物标志物用于非小细胞肺癌的早期诊断、治疗方案选择、预后评估，特异性高、灵敏度好。可实现非小细胞肺癌早期体外诊断，克服原有非小细胞肺癌检测大多为活体组织检测的局限，克服现有非小细胞肺癌血清检测操作繁琐，假阳性多的缺点。
[0006]再例如，中国授权专利技术专利CN111273012B公开了利用自身抗体或自身抗体的检测试剂在制备诊断肺癌的产品中的应用，所述的自身抗体选自下列任一种抗原蛋白组合的自身抗体：
[0007](1)CTAG1A，ANXA1，ELAVL4，UCHL1，GAGE7，p53，ETHE1；
[0008](2)CTAG1A，ANXA1，MAGEA4，UCHL1，GAGE7，p53，ETHE1；
[0009](3)CTAG1A，ANXA1，MAGEA4，ELAVL4，GAGE7，p53，ETHE1；
[0010](4)CTAG1A，ANXA1，MAGEA4，ELAVL4，UCHL1，GAGE7，p53；或
[0011](5)CTAG1A，ANXA1，MAGEA4，ELAVL4，UCHL1，GAGE7，p53，ETHE1。
[0012]虽然一些肿瘤标志物已经被应用于临床中非小细胞肺癌的筛查工作，但是如何发掘更多的非小细胞肺癌的诊断标志物，特别是如何进一步提高诊断非小细胞肺癌的特异性以及灵敏度，仍然是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

技术实现思路

[0013]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种用于非小细胞肺癌的检测方法及试剂盒。为了实现本专利技术的目的，拟采用如下技术方案：
[0014]本专利技术提供了一种用于非小细胞肺癌的检测方法，其特征在于检测患者血清中的SERPINA6和GPDLD1的含量，并将其与正常人的SERPINA6和GPDLD1的含量进行比较，如果患者SERPINA6和GPDLD1的含量均高于正常人的SERPINA6和GPDLD1的含量，则患者患有小细胞肺癌的可能性高。
[0015]本专利技术另一方面还涉及一种用于非小细胞肺癌的诊断标志物，所述标志物包括SERPINA6和GPDLD1。
[0016]本专利技术的标志物之一SERPINA6，也称为皮质类固醇结合球蛋白，它是丝氨酸蛋白酶抑制剂家族的成员之一。SERPINA6能够分泌到外周血中，从而在患者血清中被检测到。
[0017]本专利技术的另一标志物GPDLD1，也称为糖基磷脂酰肌醇特异性磷脂酶D1(glycosylphosphatidylinositol specificphospholipase D1)是一种大量存在哺乳动物血清中的酶，具有两个功能域，一个N端催化域和一个C端β
‑
螺旋桨域。
[0018]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述诊断标志物为血清标志物。
[0019]本专利技术另一方面还涉及一种用于非小细胞肺癌的诊断试剂盒，所述试剂盒包括定量检测SERPINA6和GPDLD1的试剂。
[0020]在本专利技术的一个优选实施方式中，所述定量检测SERPINA6和GPDLD1的试剂是化学发光免疫试剂。
[0021]本专利技术另一方面还涉及上述标志物或诊断试剂盒在制备诊断非小细胞肺癌中的应用。
[0022]本专利技术根据正常人和非小细胞肺癌患者的血清样品实验检测分析，获得一组差异表达蛋白质包括SERPINA6和GPDLD1，并且在100例血清中进行了验证，结果表明，所述的一组差异表达蛋白质SERPINA6和GPDLD1作为联合诊断标志物，具有显著地有助于诊断非小细胞肺癌的敏感度和特异性。
附图说明
[0023]图1为SERPINA6和RBX1作为联合指标诊断非小细胞肺癌的ROC曲线图。
具体实施方式
[0024]为了进一步理解本专利技术，下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0025]如无特殊说明，本专利技术实施例中所涉及的试剂均为市售产品，均可以通过商业渠道购买获得。
[0026]实施例1：正常人、非小细胞肺癌患者去除高丰度蛋白质的血清中蛋白质表达差异检测
[0027]选正常人(60例)、非小细胞肺癌患者(60例)肿瘤病人血清，每组20例血清等体积
混合；
[0028]血清中的蛋白质含量动态范围达到12个数量级，但是高丰度蛋白的含量占血清蛋白质总含量的95％以上，而很多有意义的蛋白都是中低丰度的；为了更好地分析血清中的蛋白质差异，在前期的探索阶段，将血清中的高丰度蛋白通过去高丰度蛋白的抗体柱去除，获得更多的蛋白质鉴定和定量信息；每个血清混合样各取40μL，通过Agilent MARS 14柱去除高丰度蛋白质后，经过Bradford方法进行蛋白质定量，各组选取等量蛋白质进行还原、烷基化，和酶解，通过稳定同位素标记(iTRAQ)标记各组肽段，经由二维色谱和串联质谱联用技术(2D LC
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MS/MS)进行分析，通过数据库搜索和肽段进行蛋白质定量，共三套iTRAQ八重标记实验构建三次生物学重复；
[0029]结果显示，通过基于iTRAQ
‑
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于非小细胞肺癌的检测方法，其特征在于检测患者血清中的SERPINA6和GPDLD1的含量，并将其与正常人的SERPINA6和GPDLD1的含量进行比较，如果患者SERPINA6和GPDLD1的含量均高于正常人的SERPINA6和GPDLD1的含量，则患者患有小细胞肺癌的可能性高。2.一种用于非小细胞肺癌的诊断标志物，所述标志物包括SERPINA6和GPDLD1。3.根据权利要求2所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：于修楠，吴狄，李珊珊，
申请(专利权)人：齐齐哈尔市第一医院，
类型：发明
国别省市：