一种用于水母活性提取物质的纯化方法技术

本发明专利技术提出了一种用于水母活性提取物质的纯化方法，包括如下步骤：取水母，冷冻干燥，粉碎，得粉碎物；在粉碎物中加入复合酶，酶解，得粗提液；在粗提液中加入离子液体，搅拌，静置，调节溶液等电点，离心，取沉淀，清洗，调节pH，冷冻干燥，得粗提取物；在粗提取物中加入丙酮水溶液，浸提，离心，取上清液，得粗提取液；将粗提取液过SP

【技术实现步骤摘要】
一种用于水母活性提取物质的纯化方法


[0001]本专利技术涉及海洋生物提取领域，特别涉及一种用于水母活性提取物质的纯化方法。

技术介绍

[0002]海洋生物富含蛋白质，其中包括一系列生物抗菌肽，从海洋生物蛋白中提取抗菌肽应用于食品、化妆品和制药行业具有较大的潜力，现有技术中从海洋生物中提取的抗菌肽多采用高温蒸煮或机械压榨的方式，在此过程中蛋白质极易变性，导致抗菌肽纯度降低，活性较低，此外因蛋白质与脂肪等交合在一起，增加了蛋白质分解难度和抗菌肽分离难度。
[0003]为提高海洋生物中抗菌肽的分离提纯效率，公布号为CN111440835A的专利技术专利中通过发酵的方式从鲳鱼内脏中提取抗菌肽，其仍然存在发酵菌与抗菌肽分离难度大、得率低等问题。
[0004]水母是一种胶质状的浮游生物，含有丰富的胶原蛋白，提取、纯化其胶原蛋白成为科研研究的热点之一。但现有技术提取水母胶原蛋白获得的多肽分子量并不理想，其起到的活性功效则有所降低。

技术实现思路

[0005]鉴于此，本专利技术的目的在于提出一种用于水母活性提取物质的纯化方法，解决上述问题。
[0006]本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0007]一种用于水母活性提取物质的纯化方法，包括如下步骤：
[0008]S1：取水母，冷冻干燥，粉碎，得粉碎物；
[0009]S2：在粉碎物中加入复合酶，酶解，得粗提液；
[0010]S3：在粗提液中加入离子液体，搅拌，静置，调节溶液等电点，离心，取沉淀，清洗，调节pH，冷冻干燥，得粗提取物；
[0011]S4：在粗提取物中加入丙酮水溶液，浸提，离心，取上清液，得粗提取液；
[0012]S5：将粗提取液过SP
‑
琼脂糖凝胶柱，透析，冷冻干燥，得纯化肽提取物。
[0013]进一步说明，所述复合酶为中性蛋白酶、角蛋白酶和脱脂酶组成，所述中性蛋白酶、角蛋白酶和脱脂酶的质量比为1：1
‑
2：1
‑
2；所述复合酶的加入量为粉碎物重量的22
‰‑
26
‰
。
[0014]进一步说明，所述在复合酶中加入Tris
‑
HCl缓冲溶液，料液质量比1：5
‑
6。
[0015]进一步说明，酶解过程中，进行交变磁场处理，所述交变磁场处理的时间为18
‑
24h。
[0016]进一步说明，所述丙酮水溶液的质量浓度为60
‑
70％；所述浸提的温度为60
‑
70℃，浸提的时间为1
‑
5h。
[0017]进一步说明，所述酶解的条件为：温度50
‑
55℃、pH值6.2
‑
6.6、时间18
‑
24h。
[0018]进一步说明，所述粗提液和离子液体的体积比为1：2
‑
3，离子液体为1
‑
甲基咪唑氯盐或1
‑
乙基3
‑
甲基咪唑溴盐。
[0019]进一步说明，所述离子液体为1
‑
甲基咪唑氯盐或1
‑
乙基3
‑
甲基咪唑溴盐溶解于无水乙醇中制得，1
‑
甲基咪唑氯盐或1
‑
乙基3
‑
甲基咪唑溴盐和无水乙醇的体积比为1：2
‑
3。
[0020]进一步说明，所述离心的速率为5000
‑
6000r/min，离心时间为5
‑
8min。
[0021]本专利技术提供一种上述的纯化方法制得的水母纯化肽提取物。
[0022]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：
[0023]本专利技术通过依次将水母预处理，在粉碎物中加入复合酶，酶解，得粗提液，在粗提液中加入离子液体，搅拌，静置，调节溶液等电点，离心，取沉淀，清洗，调节pH，冷冻干燥，得粗提取物，在粗提取物中加入丙酮水溶液，浸提，离心，取上清液，得粗提取液，将粗提取液过SP
‑
琼脂糖凝胶柱，透析，冷冻干燥，得纯化肽提取物，本专利技术获得的水母纯化肽提取物的得率达52.4％。
[0024]本专利技术提取纯化获得的纯化肽提取物，含有4种分子量的肽段，其中，多肽分子量的分布主要为500Da以下，达到80.61％的占比，该纯化肽提取物对DPPH自由基清除率可达到90％以上，具有优良的自由基清除能力，生物活性优异。
[0025]本专利技术对水母的提取方式简单且快速，有效缩短提取所用时间，避免多肽遭到破坏或损失。
具体实施方式
[0026]为了更好理解本专利技术
技术实现思路
，下面提供具体实施例，对本专利技术做进一步的说明。
[0027]本专利技术实施例所用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0028]本专利技术实施例所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0029]实施例1
[0030]一种用于水母活性提取物质的纯化方法，包括如下步骤：
[0031]S1：取水母，冷冻干燥，粉碎，得粉碎物；
[0032]S2：在粉碎物中加入粉碎物重量的24
‰
复合酶(M
中性蛋白酶
：M
角蛋白酶
：M
脱脂酶
＝1：1：2)，以50℃、pH为6.4，进行酶解24h，在酶解4h后开始进行交变磁场处理，直到酶解结束，得粗提液；
[0033]复合酶在使用时，按料液质量比1：6加入Tris
‑
HCl缓冲溶液(pH为9.1，0.5M)；
[0034]S3：按体积比1：2，在粗提液中加入1
‑
甲基咪唑氯盐离子液体(V1‑
甲基咪唑氯盐
：V
无水乙醇
＝1：2)，搅拌，静置12h，调节溶液等电点，5500r/min离心7min，取沉淀，清洗，调节pH，冷冻干燥，得粗提取物；
[0035]S4：在粗提取物中加入质量浓度为65％丙酮水溶液，65℃浸提3h后，以5500r/min离心7min，取上清液，得粗提取液；
[0036]S5：将粗提取液过SP
‑
琼脂糖凝胶柱，采用Tris
‑
HCl缓冲溶液(pH为9.1，0.5M)和乙酸溶液(0.5M)冲洗，收集冲洗液，4℃透析3d，冷冻干燥，得纯化肽提取物。
[0037]实施例2
[0038]一种用于水母活性提取物质的纯化方法，包括如下步骤：
[0039]S1：取水母，冷冻干燥，粉碎，得粉碎物；
[0040]S2：在粉碎物中加入粉碎物重量的22
‰
复合酶(M
中性蛋白酶
：M
角蛋白酶
：M
脱脂酶
＝1：1：2)，以55℃、pH为6.2，进行酶解20h，在酶解开始时同时进行交变磁场处理，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于水母活性提取物质的纯化方法，其特征在于，包括如下步骤：S1：取水母，冷冻干燥，粉碎，得粉碎物；S2：在粉碎物中加入复合酶，酶解，得粗提液；S3：在粗提液中加入离子液体，搅拌，静置，调节溶液等电点，离心，取沉淀，清洗，调节pH，冷冻干燥，得粗提取物；S4：在粗提取物中加入丙酮水溶液，浸提，离心，取上清液，得粗提取液；S5：将粗提取液过SP
‑
琼脂糖凝胶柱，透析，冷冻干燥，得纯化肽提取物。2.根据权利要求1的一种用于水母活性提取物质的纯化方法，其特征在于，所述复合酶为中性蛋白酶、角蛋白酶和脱脂酶组成，所述中性蛋白酶、角蛋白酶和脱脂酶的质量比为1：1
‑
2：1
‑
2；所述复合酶的加入量为粉碎物重量的22
‰‑
26
‰
。3.根据权利要求2的一种用于水母活性提取物质的纯化方法，其特征在于，在复合酶中加入Tris
‑
HCl缓冲溶液，料液质量比1：5
‑
6。4.根据权利要求1的一种用于水母活性提取物质的纯化方法，其特征在于，酶解过程中，进行交变磁场处理，所述交变磁场处理的时间为18
‑
24h。5.根据权利要求1的一种用于水母活性提取物质的纯化方法，其特征在于，所述丙酮水溶液的质量浓度为60
‑
70％；所述浸提的温度为60
...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵冬瑞，曾顺辉，袁用华，谢志娟，
申请(专利权)人：海南春蕾海洋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：