一种光激化学发光检测试剂盒及其使用方法和应用技术

本发明专利技术涉及一种光激化学发光检测试剂盒及其使用方法和应用。所述光激化学发光检测试剂盒包括与PEG偶联的抗体；所述PEG选自PEG4～PEG24中的至少一种；优选地，所述PEG选自PEG10～PEG20中的至少一种。将所述光激化学发光检测试剂盒应用在光激化学发光平台上检测待测抗原时，在平台上的检测本底更低，比传统检测试剂区分度更高，检测灵敏度更高，试剂性能更加优越，在光激化学平台上的应用效果良好，前景较好。景较好。

【技术实现步骤摘要】
一种光激化学发光检测试剂盒及其使用方法和应用
[0001]本专利技术要求申请号CN 202111671497.6，申请日2021年12月31日，申请名称为“一种PEG修饰的抗体及其制备方法和应用”专利的优先权。


[0002]本专利技术属于光激化学发光免疫检测
，具体涉及一种光激化学发光检测试剂盒及其使用方法和应用。

技术介绍

[0003]光激化学发光法是化学发光分析技术的常用方法之一，可用于研究生物分子间的相互作用。该技术整合了高分子微粒技术、有机合成、蛋白质化学及临床检测等相关领域的研究。它通过生物素和链霉亲和素的作用，使感光微粒和发光微粒在一定范围内结合，产生离子氧能量的传递，发出光信号，从而对待测样本进行检测。与传统的酶联免疫分析方法相比，它具有均相、灵敏度高和操作简便易于自动化等特点。因此，其应用前景十分广阔。
[0004]现有技术中，运用光激化学发光法检测某些项目(例如，传染病HBsAg项目)时，存在本底较高，灵敏度较低等缺陷。
[0005]因此，如何提高利用光激化学发光法检测某些项目的灵敏度以及降低本底信号，是亟待解决的问题。

技术实现思路

[0006]本专利技术针对现有技术中利用光激化学发光平台上检测有些项目时存在本底较高、灵敏度较低的问题，提供了一种光激化学发光检测试剂盒，该试剂盒中引入了PEG偶联的抗体，其能够降低非特异性吸附，并且具有优异的生物相容性等特点。将所述光激化学发光检测试剂盒应用在光激化学发光平台上时，能够显著的降低检测本底，提升检测灵敏度。
[0007]为此，本专利技术第一方面提供了一种光激化学发光检测试剂盒，其包括与PEG偶联的抗体；所述PEG选自PEG4～PEG24中的至少一种；优选地，所述PEG选自PEG10～PEG20中的至少一种。
[0008]在本专利技术的一些实施方式中，所述PEG选自PEG12。
[0009]在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体与特异性结合配对成员中的一员结合；优选地，所述抗体经由PEG与特异性结合配对成员中的一员结合。
[0010]在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体与PEG连接的特异性结合配对成员中的一员的摩尔比为1:(15～25)，优选为1:(18～22)。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述特异性配对结合成员选自抗体、抗体片段、配体、寡核苷酸、寡核苷酸结合蛋白、凝集素、半抗原、抗原、免疫球蛋白结合蛋白、抗生物素蛋白、亲和素或生物素组成的一对物质；优选地，所述特异性配对成员为生物素
‑
亲和素；进一步优选地，所述特异性配对结合成员中的一员为生物素。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述PEG连接的特异性结合配对成员中的一员的试
剂为生物素
‑
PEG
‑
NHS；优选为生物素
‑
PEG12
‑
NHS。
[0013]在本专利技术的一些实施方式中，所述抗体选自单克隆抗体、多克隆抗体、人工抗体或修饰的抗体；优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体；进一步优选为单克隆抗体。
[0014]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括以下组分：
[0015]受体，其与能够与待测抗原特异性结合的另一抗体偶联，且能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；和/或，
[0016]供体，其与特异性结合配对成员中的另一员结合，且能够在激发状态产生活性氧。
[0017]在本专利技术的另一些实施方式中，所述受体为通过功能基团填充于基质中形成填充有发光组合物的高分子微粒；和/或，
[0018]所述供体为通过功能基团被包被在基体上形成填充有感光化合物的高分子微粒。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述特异性结合配对成员中的另一员为亲和素。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述发光组合物包含有能够与活性氧发生反应的化学发光化合物。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒具体包括：
[0022]组分a1，其包含与另一抗体结合的受体，所述另一抗体能够与待测抗原特异性结合；所述受体能够与活性氧反应产生可检测的化学发光信号；
[0023]组分b1，其包含与PEG连接的生物素偶联的抗体，所述抗体能够与待测抗原特异性结合；
[0024]组分c1，其包含与亲和素结合的供体；所述供体能够在激发状态产生活性氧。
[0025]本专利技术第二方面提供了一种制备如本专利技术第一方面所述的光激化学发光检测试剂盒的方法，其包括如下步骤：将待修饰的抗体与PEG连接的特异性结合配对成员中的一员混合后进行反应，获得与PEG偶联的抗体。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述待修饰的抗体与PEG连接的特异性结合配对成员中的一员的摩尔比为1:(15～25)，优选为1:(18～22)。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述PEG连接的特异性结合配对成员中的一员的试剂为生物素
‑
PEG
‑
NHS；优选为生物素
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PEG12
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NHS。
[0028]在本专利技术的一些实施方式中，所述方法具体包括如下步骤：将待修饰的抗体与生物素
‑
PEG12
‑
NHS按比例混合，于0～10℃，10～50rpm转速下反应8～16h。
[0029]本专利技术第三方面提供了一种如本专利技术第一方面所述的试剂盒或者第二方面所述的方法制备的试剂盒的使用方法，其包括如下步骤：
[0030]S1，将待测样本与包含与另一抗体结合的受体的试剂a、包含与PEG连接的生物素偶联的抗体的试剂b混合，获得混合液1；
[0031]S2，将混合液1与包含与亲和素结合的供体的试剂c混合，获得混合液2；
[0032]S3，利用能量或活性化合物处理混合液2，激发供体产生活性氧，受体与活性氧反应生成可检测的化学发光信号；
[0033]S4，分析所述化学发光信号情况，确定待测样本中是否存在待测抗原。
[0034]在本专利技术的一些实施方式中，所述待测抗原为亲水性抗原。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，步骤S3中，以600～700nm的红色激发光照射混合液2激发其发生化学发光。
[0036]在本专利技术的一些实施方式中，步骤S4中，记录所述发光信号值的检测波长为520～620nm。
[0037]在本专利技术的一些实施方式中，试剂混合后均可以根据需要进行温育。具体地，所述温育的温度可以是35～40℃，时间可以是10～20min。
[0038]在本专利技术的一些实施方式中，所述活性氧为单线态氧。
[0039]本专利技术第四方面提供了一种如本专利技术第一方面所述的试剂盒或者第二方面所述的方法制备的试剂盒或者第三方面所述的使用方法在光激化学发光检测待测抗原中的应用。
[0040]本专利技术的有益效果为：本专利技术提供了一种光激化学发光检测试剂盒，其在抗体的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种光激化学发光检测试剂盒，其包括与PEG偶联的抗体；所述PEG选自PEG4～PEG24中的至少一种；优选地，所述PEG选自PEG10～PEG20中的至少一种。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体与特异性结合配对成员中的一员结合；优选地，所述抗体经由PEG与特异性结合配对成员中的一员结合。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体与PEG连接的特异性结合配对成员中的一员的摩尔比为1:(15～25)，优选为1:(18～22)。4.根据权利要求2或3所述的试剂盒，其特征在于，所述特异性结合配对成员选自抗体、抗体片段、配体、寡核苷酸、寡核苷酸结合蛋白、凝集素、半抗原、抗原、免疫球蛋白结合蛋白、抗生物素蛋白、亲和素或生物素组成的一对能够相互特异性结合的物质；优选地，所述特异性结合配对成员为生物素
‑
亲和素；进一步优选地，所述特异性结合配对成员中的一员为生物素。5.根据权利要求2
‑
4中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述PEG连接的特异性结合配对成员中的一员的试剂为生物素
‑
PEG
‑
NHS；优选为生物素
‑
PEG12
‑
NHS。6.根据权利要求1
‑
5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述抗体选自单克隆抗体、多克隆抗体、人工抗体或修饰的抗体；优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体；进一步优选为单克隆抗体。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄正铭，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：科美博阳诊断技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：