一株玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株及其应用。本发明专利技术鉴定得到一株玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株，该菌株已于2022年12月6日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62912；本发明专利技术研究显示接种HP25后能够提高花生的生物量和叶片SPAD值，并显著增加花生的根瘤干重，以及根瘤个数，从而促进植物生长；同时，显示HP25能改善花生氮营养，显著增加花生的地上部氮含量，从而达到花生高产并且培肥土壤，对花生的结瘤固氮有促进作用；且HP25菌株具有耐酸特性，适用于华南酸性地区，能够帮助优化酸性土壤作物根系生长以及优化微生态环境，为提高花生产量提供有效手段和更多的优良菌种资源。多的优良菌种资源。多的优良菌种资源。

【技术实现步骤摘要】
一株玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株及其应用


[0001]本专利技术属于农业微生物
更具体地，涉及一株玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株及其应用。

技术介绍

[0002]花生(Arachis hypogaea Linn.)是我国重要的经济作物和油料作物之一，富含蛋白质和油脂，营养价值高，花生除了压榨花生油外，还将其加工成休闲食品，如烘烤、咸酥、炒食。近年来，我国的花生消费需求就保持稳定增加趋势。由于，我国不同地区土壤的理化性质不同，土壤的酸碱性差异以及环境污染等生态问题，导致氮肥的利用率极低，从而影响作物的生长及产量。
[0003]根瘤菌(Rhizobia)是一类革兰氏阴性菌，它可以将空气中的分子态氮转变为可直接利用的氮素。根瘤菌首先在根毛进行繁殖，经过一系列过程最终导致类菌体形成，开始进行生物固氮。研究者们发现，接种高效根瘤菌不仅能促进植株的生长，提高植株的氮营养水平，减少化学氮肥的施用，提高豆科作物的产量和品质，而且还能提高植株的抗逆性。但根瘤菌与豆科植物共生后固氮和促生能力受豆科植物、根瘤菌及土壤理化性状的影响。在目前能应用于不同环境条件下的花生固氮菌还较少，如现有技术公开的一种新的根瘤固氮菌(Rhizobium leguminosarum)具有较好的耐盐碱性和耐高温特性，能更加高效地用于碱性土壤，但目前针鲜少有适用于酸性土壤条件的高效根瘤菌菌株；因此，为了提高我国花生的产量，研发出更多的优良菌种资源具有重要的经济价值和意义，为开发和利用不同条件的土壤提供更多方法和途径。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是克服上述的缺陷和不足，提供玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株及其应用。
[0005]本专利技术的目的是提供一株玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株。
[0006]本专利技术另一目的是提供玛瑙斯慢生根瘤菌HP25菌株的应用。
[0007]本专利技术另一目的是提供一种耐酸、固氮和/或促植物生长的微生物制剂。
[0008]本专利技术的再一目的是提供一种促进花生生长和/或结瘤固氮的方法。
[0009]本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
[0010]本专利技术鉴定得到一株玛瑙斯慢生根瘤菌(Bradyrhizobium sp.)HP25菌株，该菌株已于2022年12月6日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62912。研究显示HP25菌株的菌落呈圆形较小、乳白色、半透明、粘质较多，属于革兰氏阴性菌，呈小短杆状；最适生长条件为：温度28℃，转速180r/min，能够利用广泛的碳源和氮源。HP25菌株具有耐酸特性，能用于酸性土壤，帮助优化酸性土壤作物根系生长以及优化微生态环境。在接种HP25菌株后，能够显著提高豆科植物的生物量和结瘤量，促进花生生长，能使花生高产，对花生的结瘤固氮有促进的作用。
[0011]因此，本专利技术提供慢生根瘤菌HP25菌株或其菌液在促进花生结瘤固氮、在制备促进花生结瘤固氮的产品、提高花生产量、促进植物生长或在酸性条件下促进植物生长、在制备具有耐酸、固氮和/或促植物生长的微生物制剂中的应用。
[0012]本专利技术提供一种耐酸、固氮和/或促植物生长的微生物制剂，含慢生根瘤菌HP25菌株或其菌液。
[0013]本专利技术还提供一种促进花生生长和/或结瘤固氮的方法，将慢生根瘤菌HP25菌株或其菌液直接施用于花生根部或土壤环境中。
[0014]优选地，所述菌液OD
600
＝0.8～1.0。
[0015]优选地，所述土壤环境为酸性条件下的土壤。
[0016]本专利技术具有以下有益效果：
[0017]本专利技术提供的玛瑙斯慢生根瘤菌(Bradyrhizobium sp.)HP25菌株，具有耐酸特性，适用于华南酸性地区，能够帮助优化酸性土壤作物根系生长以及优化微生态环境；在接种HP25后，能够提高花生的生物量和叶片SPAD值，并显著增加花生的根瘤干重，以及根瘤个数，从而促进植物生长；同时，显示根瘤菌HP25能改善花生氮营养，显著增加花生的地上部氮含量，从而达到花生高产并且培肥土壤，对花生的结瘤固氮有促进作用。把菌体释放到自然环境中，对人、动物和植物无害，不会污染环境，还能增加土壤中根瘤菌的群体丰度。
附图说明
[0018]图1为根瘤菌HP25在YMA培养基上的菌落形态图；
[0019]图2为根瘤菌HP25经革兰氏染色后在显微镜下的观察图；
[0020]图3为根瘤菌HP25的耐酸性评价结果；
[0021]图4为根瘤菌HP25的16S rDNA部分序列分析系统发育树状图；
[0022]图5为接种根瘤菌对植株干重和叶片SPAD值的影响；
[0023]图6为接种根瘤菌对植株结瘤性状的影响；
[0024]图7为接种根瘤菌对植株地上部和根部氮含量的影响。
具体实施方式
[0025]以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。
[0026]除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0027]实施例1菌株的分离和纯化
[0028]从广东省广州市增城区华南农业大学宁西试验基地中挖回来几株带有根瘤的花生植株。将带回来的花生植株的根洗干净(表面不能有泥土)，利用超声波水池超声10分钟去除表面的杂质，再用超纯水反复冲洗，用无菌滤纸吸干表面水分后，利用95％乙醇浸泡3min，无菌水冲洗6次，10％次氯酸钠表面消毒10min，再用无菌水冲洗6次。收获植物根系上新鲜、成熟且个大饱满的根瘤(根瘤直径大于3mm)，利用无菌刀片将消毒根瘤切为两半，将根瘤切面在YMA培养基表(配方如下表1所示)面划线，倒置封好，28℃恒温培养。从第2天起，挑取单菌落继代培养，直至获得纯净的菌落。待长出菌体后，从平板上挑选形态上像根瘤菌
的菌落在平板上划线培养。3天之后观察菌落情况，一直观察到15天，因为慢生根瘤菌需7～15天出现菌落。
[0029]表1YMA(Yeast Mannitol Agar)培养基配方(/L)
[0030][0031]待长出菌体后，根据以下两个方面初步判断是否为根瘤菌：
[0032](1)菌落形态：根瘤菌的菌落如图1所示，菌落为圆形、乳白色、半透明、边缘整齐、粘质或多或少。培养3～5天菌落直径达2～4mm为快生型根瘤菌，培养7～10天菌落才1mm的为慢生型根瘤菌。
[0033](2)菌体形态：标记初步确认为根瘤菌菌落，从中挑取菌苔涂片，进行革兰氏染色，油镜下观察。根瘤菌为(0.5～0.9)
×
(1.2～0.3)μm的小杆菌，内常含β
‑
羟基丁酸，即折射强的似空洞的颗粒或使菌体呈环节状，革兰氏阴性(G
‑
)，如图2所示，无芽孢，菌体单个或成对。
[0034]根据上述两个方面，用接种环从培养基上挑选优势菌落继续在新的YMA本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株玛瑙斯慢生根瘤菌(Bradyrhizobium sp.)HP25菌株，其特征在于，该菌株已于2022年12月6日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：62912。2.权利要求1所述慢生根瘤菌HP25菌株或其菌液在促进花生结瘤固氮中的应用。3.权利要求1所述慢生根瘤菌HP25菌株或其菌液在制备促进花生结瘤固氮的产品中的应用。4.权利要求1所述慢生根瘤菌HP25菌株或其菌液在提高花生产量中的应用。5.权利要求1所述慢生根瘤菌HP25菌株或其菌液在促进植物生长或在酸性条件下促进植物生长中的应用。6.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王秀荣，罗莎莉，陈康，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：