一种液体活检样本的处理方法及其应用技术

本发明专利技术涉及质谱法、光谱法测定用液体活检样本中蛋白、多肽以及代谢产物的前处理方法。多肽以及代谢产物的前处理方法。多肽以及代谢产物的前处理方法。

【技术实现步骤摘要】
一种液体活检样本的处理方法及其应用


[0001]本专利技术涉及液体活检样本的处理方法，具体而言涉及不同分子量的疾病检测用液体活检样本的处理方法。

技术介绍

[0002]随着体外诊断技术(intro diagnostic)技术应用的普及，用于体外诊断的生物样本的预处理工艺也越来越受到关注。以往，在液体活检样本中存在大量的盐类及基因碎片，对仪器检测产生严重的干扰。因此，降低生物样本中的干扰，提高检测精度，在当前生物检测领域备受瞩目。而且，当前使用的疾病筛查手段中使用的样本处理，往往精度比较低，漏检率较高，这也让很多患者失去早期治疗的机会，从而降低了患者的生存率。例如血液代表了一种方便的临床分析诊断样本。血清代谢物和肽有可能作为从正常状态到疾病状态进展的可靠指标。然而，血清中盐、脂质和高浓度蛋白质的存在会对仪器分析产生不利影响，因为所有这些部分都会干扰仪器对生物诊断标志物的检测。
[0003]本专利技术在实验过程中，已评估、优化和标准化许多处理步骤，通过对少量血清等液体活检样本进行特定的前处理，便会得到消除干扰物质，富集和纯化多肽、代谢产物等目标物质的目的，更加适用于高通量和临床环境，从而更适用于精确的疾病筛查。
[0004]现有技术文献
[0005]非专利文献
[0006]Machine learning of serum metabolic patterns encodes early
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stage lung adenocarcinoma，Lin Huang et.，NATURE COMMUNICATIONS(2020)11：3556

技术实现思路

[0007]专利技术要解决的技术问题
[0008]在液体活检样本中存在大量的盐类及基因碎片，对仪器检测产生严重的干扰。本方法通过使用填料为色谱吸附剂的过滤装置，对样本中的干扰物质进行过滤，对待检测物质进行富集再分离，后续通过检测仪器对洗脱液进行检测，可以筛查出包括肿瘤、冠心病、高血压等慢性疾病。
[0009]解决问题的手段
[0010]为了解决上述问题，本专利技术提供一种光谱法、质谱法测定液体活检样本中蛋白、多肽以及代谢产物的前处理方法，建立一种准确性良好的、样品消耗量低的、高通量检测的一种的非侵袭性诊断疾病的方法，大大降低了样本中干扰物质的浓度，提高了诊断的准确率。
[0011]具体而言，本专利技术包含以下实施方式。
[0012]1、一种样本处理方法，其包括下述步骤：
[0013]步骤一：将样本与酸化试剂混合，进行酸化；
[0014]步骤二：使过滤装置的过滤头润湿；
[0015]步骤三：使步骤二的过滤装置的过滤头吸附步骤一的酸化样本；
[0016]步骤四：使用冲洗液冲洗步骤三的过滤装置的过滤头；
[0017]步骤五：使用步骤四的过滤装置的过滤头吸取洗脱液；
[0018]步骤六：收集洗脱液。
[0019]2、根据1所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置选自固相萃取柱无筛板固相萃取柱、层析柱、微量层析柱、针头过滤器。
[0020]3、根据2所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置中的填料选自C18十八烷基硅胶、C8辛烷基硅烷键合硅胶、C4硅胶键合丁基、C6H5苯基硅烷键合硅胶、CN硅胶键合氰基、NH2硅胶键合氨基以及OH硅胶键合二醇基中的一种。
[0021]4、根据1～3中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的样本选自血清、尿液、组织液中的任意一种。
[0022]5、根据1～4中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂选自卤代有机酸溶液。
[0023]6、根据5所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为体积浓度0.05％～2％的卤代有机酸的水溶液。
[0024]7、根据6所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为体积浓度0.1％的卤代有机酸的水溶液。
[0025]8、根据1～7中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂选自三氟乙酸、三氟丙酸中的一种以上的酸的溶液。
[0026]9、根据1～8任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为三氟乙酸的水溶液。
[0027]10、根据1～9中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用乙腈水溶液润湿1、2或3次。
[0028]11、根据10所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中，再使用三氟乙酸水溶液别润湿1、2或3次。
[0029]12、根据10或11所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度30
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70％乙腈水溶液。
[0030]13、根据10～12中任一项～所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度40
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60％乙腈水溶液。
[0031]14、根据10～13中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度50％乙腈水溶液。
[0032]15、根据11所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度0.05％～0.2％的三氟乙酸溶液。
[0033]16、根据11或15所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度0.08％～0.15％的三氟乙酸溶液。
[0034]17、根据10、15或16中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度0.1％三氟乙酸溶液。
[0035]18、根据1～17中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤四中的冲洗液包含水、三氟乙酸以及体积浓度为3％～8％的选自乙腈、丙酮、乙醇、异丙醇、甲酸和甲醇中的一种以上的溶剂，其中，三氟乙酸的体积浓度为0.05％～2％。
[0036]19、根据18所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤四中的冲洗液包含水、三氟乙酸和乙腈。
[0037]20、根据19所述的样本处理方法，其特征在于，三氟乙酸：乙腈以体积比计为1∶100～1∶20。
[0038]21、根据19或20所述的样本处理方法，其特征在于，三氟乙酸：乙腈以体积比计为1∶50。
[0039]22、根据19～21中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，相对于冲洗液的总量，三氟乙酸的体积浓度为0.1％。
[0040]23、根据19～21中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，相对于冲洗液的总量，乙腈的体积浓度为5％。
[0041]24、根据1～23中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五中的洗脱液包含水、三氟乙酸和体积浓度为10％～95％的选自乙腈、丙酮、乙醇、异丙醇、甲酸和甲醇中的一种以上的溶剂。
[0042]25、根据1～24中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤五中的洗脱液包含水、三氟乙酸和乙腈。
[0043]26、根据25所述的样本处理方法，其特征在于，所本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种样本处理方法，其包括下述步骤：步骤一：将样本与酸化试剂混合，进行酸化；步骤二：使过滤装置的过滤头润湿；步骤三：使步骤二的过滤装置的过滤头吸附步骤一的酸化样本；步骤四：使用冲洗液冲洗步骤三的过滤装置的过滤头；步骤五：使用步骤四的过滤装置的过滤头吸取洗脱液；步骤六：收集洗脱液。2.根据权利要求1所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置选自固相萃取柱无筛板固相萃取柱、层析柱、微量层析柱、针头过滤器。3.根据权利要求2所述的样本处理方法，其特征在于，所述过滤装置中的填料选自C18十八烷基硅胶、C8辛烷基硅烷键合硅胶、C4硅胶键合丁基、C6H5苯基硅烷键合硅胶、CN硅胶键合氰基、NH2硅胶键合氨基以及OH硅胶键合二醇基中的一种。4.根据权利要求1～3中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的样本选自血清、尿液、组织液中的任意一种。5.根据权利要求1～4中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂选自卤代有机酸溶液。6.根据权利要求5所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为体积浓度0.05％～2％的卤代有机酸的水溶液。7.根据权利要求6所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为体积浓度0.1％的卤代有机酸的水溶液。8.根据权利要求1～7中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂选自三氟乙酸、三氟丙酸中的一种以上的酸的溶液。9.根据权利要求1～8任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤一中的酸化试剂为三氟乙酸的水溶液。10.根据权利要求1～9中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用乙腈水溶液润湿1、2或3次。11.根据权利要求10所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中，再使用三氟乙酸水溶液别润湿1、2或3次。12.根据权利要求10或11所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度30
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70％乙腈水溶液。13.根据权利要求10～12中任一项～所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度40
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60％乙腈水溶液。14.根据权利要求10～13中任一项所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度50％乙腈水溶液。15.根据权利要求11所述的样本处理方法，其特征在于，所述步骤二中使用体积浓度0.0...

【专利技术属性】
技术研发人员：傅博，韩嘉宸，
申请(专利权)人：上海固容生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：