CARP基因在PGC1α通路中的调控方法、抗阿霉素心肌毒性药物及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种CARP基因在PGC1α通路中的调控方法、抗阿霉素心肌毒性药物及其制备方法，所述调控方法用于抗阿霉素心肌毒性药物的制备过程，所述调控方法包括以下步骤：S1：通过慢病毒过表达CARP，激活PGC1α基因启动子活性，升高PGC1αmRNA和蛋白在H9c2心肌细胞中的表达；S2:通过RNAi干扰CARP表达，抑制荧光素酶活性，降低PGC1αmRNA和蛋白在H9c2心肌细胞中的表达，本发明专利技术在阿霉素诱导的心肌损伤中升高CARP表达水平可以通过激活PGC1α信号通路缓解线粒体损伤和氧化应激，进而减轻心肌损伤，可以为临床上阿霉素诱导的心肌损伤提供新的策略和靶点。策略和靶点。策略和靶点。

【技术实现步骤摘要】
CARP基因在PGC1
α
通路中的调控方法、抗阿霉素心肌毒性药物及其制备方法


[0001]本专利技术涉及医药生物
，尤其涉及一种CARP基因在PGC1α通路中的调控方法、抗阿霉素心肌毒性药物及其制备方法。

技术介绍

[0002]阿霉素，又名多柔比星，是一种疗效确切的蒽环类抗肿瘤药物，广泛应用于乳腺癌、卵巢癌、淋巴瘤等恶性肿瘤的治疗。然而，阿霉素与心肌的高亲和力可导致各种急性和慢性心脏毒性，包括心律失常、心肌病和心力衰竭，这严重限制了阿霉素的临床应用。目前普遍认为，阿霉素诱导的心脏毒性机制可归因于细胞死亡、线粒体损伤和氧化应激。因此，开发有效的药物来预防阿霉素引起的心脏毒性具有重要意义。
[0003]CARP(Cardiac Adriamycin Responsive Protein)是Jeyaseelan等在心肌细胞中鉴定出的一种能被阿霉素迅速抑制的蛋白，因其在心脏中特异表达，被命名为心脏阿霉素反应蛋白。CARP在心脏的信号转导、转录调节和心肌结构维持中发挥重要作用。CARP在各种心肌病和心力衰竭中表达上调，被认为是心脏疾病的生物标志物。在人类扩张型心肌病中已经报道了数个CARP基因位点突变。因此，推测CARP在各种心脏疾病中的表达增加可能是一种适应性反应，它可以对抗疾病条件下心脏功能的恶化。
[0004]阿霉素可快速抑制心肌细胞中CARP的表达，这表明CARP可能在阿霉素诱导的心脏毒性中发挥作用。然而，CARP在阿霉素诱导的急性心脏毒性中的确切作用及潜在机制尚不清楚。先前的研究发现，在主动脉弓缩窄(TAC)诱导的心肌肥厚模型中，与野生型小鼠相比，CARP转基因小鼠的心脏组织中过氧化物酶体增殖物活化受体γ协同刺激因子1α(Peroxisome Proliferator
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activated Receptor
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γCoactivator
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1α，PGC1α)表达显著上调。PGC1α在心脏中表达丰度高。PGC1α及其下游信号核呼吸因子(Nuclear Respiration Factor，NRF)和线粒体转录因子A(Mitochondrial Transcription Factor A，TFAM)可促进线粒体生物合成，并诱导生成多种活性氧清除酶，如锰超氧化物歧化酶(Manganese Superoxide Dismutase，MnSOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione Peroxidase，GPx)、过氧化氢酶(Catalase，Cat)等。近期研究表明线粒体功能障碍和氧化应激与阿霉素相关的心脏毒性密切相关。PGC1α基因敲低能进一步加重阿霉素诱导的心肌损伤，表明PGC1α的心脏保护作用。目前，尚无数据评估CARP对线粒体功能和ROS清除的影响。Genecards预测CARP可能在线粒体中表达，表明CARP可能也在线粒体中发挥作用。因此，推测阿霉素对CARP表达的抑制可能导致PGC1α介导的线粒体功能低下，并阻碍ROS清除，从而导致心肌损伤。
[0005]因此，有必要研究一种CARP基因在PGC1α通路中的调控方法、抗阿霉素心肌毒性药物及其制备方法来应对现有技术的不足，以解决或减轻上述一个或多个问题。

技术实现思路

[0006]有鉴于此，本专利技术提供了一种CARP基因在PGC1α通路中的调控方法、抗阿霉素心肌
毒性药物及其制备方法，在阿霉素诱导的心肌损伤中升高CARP表达水平可以通过激活PGC1α信号通路缓解线粒体损伤和氧化应激，进而减轻心肌损伤，可以为临床上阿霉素诱导的心肌损伤提供新的策略和靶点。
[0007]一方面，本专利技术提供一种CARP基因在PGC1α通路中的调控方法，所述调控方法用于抗阿霉素心肌毒性药物的制备过程，所述调控方法包括以下步骤：
[0008]S1：通过慢病毒过表达CARP，激活PGC1α基因启动子活性，升高PGC1αmRNA和蛋白在H9c2心肌细胞中的表达；
[0009]S2:通过RNAi干扰CARP表达，抑制荧光素酶活性，降低PGC1αmRNA和蛋白在H9c2心肌细胞中的表达。
[0010]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种实现方式，所述S1中通过慢病毒过表达CARP具体包括以下步骤：
[0011]所述S1中通过慢病毒过表达CARP具体包括以下步骤：
[0012]S11：慢病毒转染前24h，将H9c2细胞以预设密度铺到六孔板中；
[0013]S12：慢病毒转染当天，取出细胞培养皿，显微镜下观察H9c2细胞的生长状况及细胞密度，将培养皿置于工作台中，弃原培养液，加入含0.5ug/mL polybrene的新培养基2mL/孔，加入适量CARP过表达病毒悬液，做好标记后放入37℃、5％CO2恒温培养箱中培养；
[0014]S13：慢病毒转染24h后，在2mL/孔中重新加入培养基，放入37℃、5％CO2恒温培养箱中培养；
[0015]S14：慢病毒转染48h后，收集H9c2细胞进行体外实验，完成慢病毒过表达CARP。
[0016]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种实现方式，所述S11中预设密度为2*10^5/孔。
[0017]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种实现方式，所述S12中适量CARP过表达病毒悬液为moi＝10。
[0018]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种实现方式，所述S2中通过RNAi干扰CARP表达具体包括以下步骤：
[0019]S21：慢病毒转染前24h，将H9c2细胞以预设密度铺到六孔板中；
[0020]S22：慢病毒转染当天，取出细胞培养皿，显微镜下观察H9c2细胞的生长状况及细胞密度，将培养皿置于工作台中，弃原培养液，加入含0.5ug/mL polybrene的新培养基2mL/孔，加入适量CARP RNAi病毒悬液，做好标记后放入37℃、5％CO2恒温培养箱中培养；
[0021]S23：慢病毒转染24h后，在2mL/孔中重新加入培养基，放入37℃、5％CO2恒温培养箱中培养；
[0022]S24：慢病毒转染48h后，收集H9c2细胞进行体外实验,完成RNAi干扰CARP表达。
[0023]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种实现方式，所述S21中预设密度为：2*10^5/孔。
[0024]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种实现方式，所述S22中适量CARP RNAi病毒悬液为moi＝10。
[0025]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种抗阿霉素心肌毒性药物的制备方法，所述制备方法通过如上述权利要求1
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9之一所述的调控方法，将CARP基因或其编码的蛋白作为药物、药物靶点或基因治疗中的靶基因加入抗阿霉素心肌毒性药物中。
[0026]如上所述的方面和任一可能的实现方式，进一步提供一种抗阿霉本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种CARP基因在PGC1α通路中的调控方法，所述调控方法用于抗阿霉素心肌毒性药物的制备过程，其特征在于，所述调控方法包括以下步骤：S1：通过慢病毒过表达CARP，激活PGC1α基因启动子活性，升高PGC1αmRNA和蛋白在H9c2心肌细胞中的表达；S2:通过RNAi干扰CARP表达，抑制荧光素酶活性，降低PGC1αmRNA和蛋白在H9c2心肌细胞中的表达。2.根据权利要求1所述的调控方法，其特征在于，所述S1中通过慢病毒过表达CARP具体包括以下步骤：S11：慢病毒转染前24h，将H9c2细胞以预设密度铺到六孔板中；S12：慢病毒转染当天，取出细胞培养皿，显微镜下观察H9c2细胞的生长状况及细胞密度，将培养皿置于工作台中，弃原培养液，加入含0.5ug/mL polybrene的新培养基2mL/孔，加入适量CARP过表达病毒悬液，做好标记后放入37℃、5％CO2恒温培养箱中培养；S13：慢病毒转染24h后，在2mL/孔中重新加入培养基，放入37℃、5％CO2恒温培养箱中培养；S14：慢病毒转染48h后，收集H9c2细胞进行体外实验，完成慢病毒过表达CARP。3.根据权利要求2所述的调控方法，其特征在于，所述S11中预设密度为2*10^5/孔。4.根据权利要求2所述的调控方法，其特征在于，所述S12中适量CARP过表达病毒悬液为moi＝10。5.根据权利要求1所述的调控方法，其特征在于，所述S2中通过RNAi干扰CARP表达具...

【专利技术属性】
技术研发人员：马国达，许旭三，汪亚君，梁春梅，程一森，罗飞，陈日玲，王小霞，
申请(专利权)人：广东医科大学顺德妇女儿童医院佛山市顺德区妇幼保健院，
类型：发明
国别省市：