一种多西霉素浓度梯度依赖性TFF3诱导表达质粒及其应用制造技术

技术编号:38055496 阅读:21 留言:0更新日期:2023-06-30 11:21
本发明专利技术公开了一种多西霉素浓度梯度依赖性TFF3诱导表达质粒及其应用,所述质粒以pCW

【技术实现步骤摘要】
Lobie博士,曾分别以第一作者与通讯作者的身份,在一篇研究性论文中报道了以双质粒骨架装载TFF3蛋白编码DNA序列的tet

on系统(Tet

On advanced与pTRE

Dual2

TFF3)[1]。尽管在这项研究中,该双质粒成功地实现了基于tet

on系统的多西霉素浓度梯度依赖性TFF3诱导表达,但由于双质粒骨架的局限性,使得这套系统在实际应用中存在以下短板:1)该双质粒系统缺少真核筛选基因,无法通过药筛的方式对阳性克隆进行大规模筛选;2)受限于荧光激发细胞筛选术的昂贵的价格与时间成本,双质粒系统中的荧光基因对阳性克隆的筛选不适用大规模筛选的应用场景;3)筛选压力的缺乏容易导致阳性克隆质粒丢失而返阴。出于自身局限性以及不经济的成本的顾虑,该装载TFF3蛋白编码DNA的双质粒tet

on系统并不适合作为商业化产品来进行开发。目前,国内外尚无任一一家公司经营基于tet

on系统的多西霉素浓度梯度依赖性TFF3诱导表达质粒及相关产品。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种多西霉素浓度梯度依赖性TFF3诱导表达质粒,其特征在于,所述质粒以pCW

puro为骨架载体,以EcoRI和BamHI为剪接位点将编码TFF3蛋白的核苷酸序列插入其中。2.根据权利要求1所述的TFF3诱导表达质粒,其特征在于,所述TFF3蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要求1所述的TFF3诱导表达质粒,其特征在于,所述编码TFF3蛋白的核苷酸序列为密码子优化后的核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的TFF3诱导表达质粒,其特征在于,所述编码TFF3蛋白的核苷酸序列为以人类细胞为表达宿主细胞的密码子优化后的核苷酸序列,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。5.一种慢病毒,其特征在于,所述慢病毒由包括权利要求1

4任一项所述TFF3诱导表达质粒包装得到。6.一种细胞,其特征在于,所述...

【专利技术属性】
技术研发人员:黄鹏维杰
申请(专利权)人:清华大学深圳国际研究生院
类型:发明
国别省市:

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