【技术实现步骤摘要】
荧光标记慢病毒载体及其制备方法和应用
[0001]本专利技术属于慢病毒标记技术，尤其涉及荧光标记慢病毒载体及其制备方法和应用。
技术介绍
[0002]慢病毒能够将外源基因(或RNAi)有效整合到宿主细胞基因组中，并稳定持久表达目的蛋白或者介导基因沉默。慢病毒载体在基因治疗、细胞治疗、基因编辑、转基因动物、药物研究、构建稳转细胞系等方面应用广泛。慢病毒通过包膜蛋白与宿主细胞表面受体结合感染细胞，与细胞膜融合后进入细胞，并经过一系列生物过程将目的基因整合至宿主染色体。既往常以荧光蛋白标签检测慢病毒转染是否成功，但不能连续性动态观察慢病毒在宿主细胞中的实时侵染行为。迄今为止，尚无有效的技术手段监测和破译慢病毒的生物入侵过程。
技术实现思路
[0003]针对上述问题，本专利技术提供荧光标记慢病毒载体及其制备方法和应用，主要为了解决现有技术无法实现连续性动态观察慢病毒在宿主细胞中的实时侵染行为，使得慢病毒的生物入侵过程的研究无法较好的开展等问题。
[0004]为了解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.荧光标记慢病毒载体的制备方法，其特征在于，包括下述步骤获取N3‑
LVs：将293T细胞与叠氮糖共孵育，通过糖代谢使细胞膜系统叠氮化，制得包膜表面可表达叠氮基团的N3‑
293T细胞，将N3‑
293T细胞与质粒包装系统共转染形成慢病毒载体N3‑
LVs；制备Cy5
‑
LVs：将N3‑
LVs与足量的二环并苯辛炔
‑
花菁素5混合，共孵育，去除多余二环并苯辛炔
‑
花菁素5，收集病毒浓缩液，获得荧光标记慢病毒载体Cy5
‑
LVs。2.根据权利要求1所述的荧光标记慢病毒载体的制备方法，其特征在于，所述质粒包装系统为三质粒包装系统或四质粒包装系统；其中，三质粒包装系统为：载体质粒、PsPAX2、PMD2.G，四质粒包装系统为：载体质粒、pVSV
‑
G、pGap/pol、pRev。3.根据权利要求2所述的荧光标记慢病毒载体的制备方法，其特征在于，获取N3‑
LVs的步骤具体为：将293T细胞与叠氮糖在细胞培养基中共孵育，传代，弃细胞培养基，转入无血清培养基，将溶液B滴加至溶液A中形成的混合液滴加至无血清培养基中，换液为含有胎牛血清的DMEM完全培养基，转染后吸取细胞培养上清，获取病毒浓缩液，获得N3‑
LVs；其中，溶液A由载体质粒、PsPAX2、PMD2.G置于减血清培养基中形成，溶液B由PEI溶于减血清培养基中形成，或溶液A由载体质粒、pVSV
‑
G、pGap/pol、pRev置于减血清培养基中...
【专利技术属性】
技术研发人员：梅恒，胡豫，陈钊钊，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。