一种核苷酸组合物、包含其的试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物检测领域，具体提供一种核苷酸组合物、包含其的试剂盒及其应用，所述核苷酸组合物包括：多条扩增引物，多条所述扩增引物用于在环介导等温扩增方法中，识别所述目标基因的特异性片段，以对所述目标基因进行扩增；及竞争寡核苷酸，与所述被干扰片段对应，且与所述被干扰片段相比，所述竞争寡核苷酸缺少至少一个所述端部序列。本发明专利技术中，添加可与扩增引物结合的竞争寡核苷酸，采用减少碱基的方式设计竞争性寡核酸可以使扩增引物最优先选择与目标基因结合后，使扩增引物与竞争寡核苷酸结合，从而消除对高度相似序列干扰基因的非特异扩增，增强特异性；由于本发明专利技术技术方案不需要设计特殊序列的引物和添加特殊反应物质，降低制备成本。降低制备成本。降低制备成本。

【技术实现步骤摘要】
一种核苷酸组合物、包含其的试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种核苷酸组合物、包含其的试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]核酸检测作为一种具有高灵敏度及特异性的方法，目前已经被广泛应用于包括疾病诊断、食品安全、传染病防治等在内的诸多领域。环介导等温扩增(LAMP)首先由日本荣研化学的Notomi博士于2000年提出，是一种利用具有链置换活性的Bst DNA聚合酶以及4条引物(两条内部引物，两条外部引物)进行快速等温扩增的技术。在扩增起始阶段，内部引物和外部引物会参与到反应中来，但是在后期的环介导反应中，则只有内部引物会参与其中。由于内部引物能够与其扩增产生的单链形成茎环结构，使得内部引物序列在扩增过程中也会不断地被复制并利用到之后的扩增中。除此之外，还可以通过向反应体系中添加额外的2条引物，增加扩增反应起始点的方式，进一步加速LAMP反应的速度，这其中，目前使用最为广泛的额外引物是针对茎环结构环片段序列设计的环引物。最终，LAMP反应能够在短时间(1小时)内扩增产生大量的(109～1010倍)，含有不同茎长度的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种核苷酸组合物，用于区别目标基因和干扰基因，其特征在于，所述目标基因包括多个特异性片段，多个所述特异性片段包括F3片段、F2片段、F1片段、B3c片段、B2c片段和B1c片段，且与所述干扰基因相比，所述目标基因中的至少一个所述特异性片段存在相异的碱基，定义所述目标基因中含有所述相异的碱基的所述特异性片段为被干扰片段，所述被干扰片段由主序列和位于主序列5
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端和3
’
端的两个端部序列组成，所述主序列包含所述相异的碱基，所述端部序列的碱基数为1～3个；所述核苷酸组合物包括：多条扩增引物，多条所述扩增引物用于在环介导等温扩增方法中，识别所述目标基因的特异性片段，以对所述目标基因进行扩增；及，竞争寡核苷酸，与所述被干扰片段对应，且与所述被干扰片段相比，所述竞争寡核苷酸缺少至少一个所述端部序列。2.如权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于，所述竞争寡核苷酸的3
’
端连接核酸聚合酶延伸反应阻断基团；和/或，多条所述扩增引物中，至少一条包括至少一个与所述被干扰片段对应的差异序列，所述差异序列与对应的所述被干扰片段的序列互补或相同，且各所述被干扰片段在多条所述扩增引物中均有对应的差异序列。3.如权利要求2所述的核苷酸组合物，其特征在于，所述干扰基因具有干扰片段，所述被干扰片段相较于所述干扰片段，具有所述相异的碱基；具有所述差异序列的所述扩增引物与所述被干扰片段形成双链结构的自由能为ΔG1，具有所述差异序列的所述扩增引物与所述竞争寡核苷酸形成双链结构的自由能为ΔG2，具有所述差异序列的所述扩增引物与所述干扰片段形成双链结构的自由能为ΔG3，其中，ΔG1<ΔG2<ΔG3。4.如权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于，所述F3片段、F2片段、所述F1片段，所述B1c片段、所述B2c片段、所述B3c片段在所述目标基因5
’
端起沿3
’
端的方向上依次排布，多条所述扩增引物包括FIP引物、F3引物、BIP引物及B3引物，其中，所述FIP引物含有与所述F2片段序列一致的FIP
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F2及连接在所述FIP
‑
F2 5
’
端的且与所述F1片段序列互补的FIP
‑
F1c，所述F3引物与所述F3片段的序列一致或互补，所述BIP引物含有与所述B2c片段序列互补的BIP
‑
B2及连接在所述BIP
‑
B2 5
’
端的且与所述B1c片段序列一致的BIP
‑
B1，所述B3引物的序列与所述B3c片段的序列相同或互补。5.如权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于，所述F2片段和/或所述B2c片段为所述被干扰片段。6.如权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于，还包括封闭序列，所述封闭序列与所述被干扰片段对应，且所述封闭序列的一部分与相应的所述被干扰片段的一部分相同或互补；和/或，还包括内标基因以及可检测所述目标基因的探针。7.如权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于，所述目标基因还包括LF片段和LBc片段，所述F3片段、F2片段、所述LF片段、所述F1片段，所述B1c片段、所述LBc片段、所述B2c片段及所述B3c片段在所述目标基因5
’
端起沿3
’
端的方向上依次排布，多条所述扩增引物采用环介导等温扩增产生两端为环形的中间产物，且所述中间产物的一端的环形部分包括与LF片段一致的靶标LF片段或与所述LF片段序列互补的靶标LFc片段，所述中间产物的另
一端的环形部分包括与LBc片段一致的靶标LBc片段或与所述LBc片段序列互补的靶标LB片段；所述核苷酸组合物还包括内标基因以及可检测所述目标基因的MGB探针，所述内标基因是将所述目标基因的所述LF片段和/或所述LBc片段采用非同源序列进行替换而得。8.如权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于，多条所述扩增引物包括如SEQ ID NO:1所示的NG
‑
FIP引物、如SEQ ID NO:2所示的NG
‑
BIP引物、如SEQ ID NO:3所示的NG
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F3引物及如SEQ ID NO:4所示的NG
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B3引物；所述竞争寡核苷酸包括NG
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CON
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F和NG
‑
CON
‑
B，所述NG
‑
CON
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F的序列如SEQ ID NO:5所示，所述NG
‑
CON
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B的序列如SEQ ID NO:6所示。9.如权利要求8所述的核苷酸组合物，其特征在于，所述核苷酸组合物还包括封闭序列，所述封闭序列包括NM
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FIP
‑
B和NM
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BIP
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B，所述NM
‑
FIP
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B的序列如SEQ ID NO:7所示，所述NM
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BIP
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B的序列如SEQ ID NO:8所示；和/或，所述核苷酸组合物还包括NG内参基因和NG探针，所述NG内参基因的序列如SEQ ID NO:9所示，所述NG探针的序列如SEQ ID NO:10所示，所述NG探针的5
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端的连接有荧光基团，3
’
端连接有MGB。10.如权利要求1所述的核苷酸组合物，其特征在于，多条所述扩增引物包括MG
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FIP引物、MG
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BIP引物、MG
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F3引物和MG
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B3引物，所述MG
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FIP引物的序列如SEQ ID NO:12所示，所述MG
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BIP引物的序列如SEQ ID NO:13所示，所述MG
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F3引物的序列SEQ ID NO:14所示，所述MG
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B3引物的序列如SEQ ID NO:15所示；所述竞争寡核苷酸包括MG
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CON
‑
F，所述MG
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CON
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F的序列如SEQ ID NO:16所示。11.如权利要求10所述的核苷酸组合物，其特征在于，所述核苷酸组合物还包括封闭序列，所述封闭序列...

【专利技术属性】
技术研发人员：周利建，刘福平，刘晶晶，孙芳，郑建权，
申请(专利权)人：深圳会众生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：