一种基因SNP检测试剂盒在预测2型糖尿病患者血脂代谢水平中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种基因SNP检测试剂盒在预测2型糖尿病患者血脂代谢水平中的应用，所述的试剂盒包括rs3765467正向引物、rs3765467反向引物、rs10305420正向引物、rs10305420反向引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID No:1、SEQ ID No:2、SEQ ID No:3和SEQ ID No:4所示，为非疾病诊断方法的2型糖尿病患者血脂代谢编码基因的测序。本发明专利技术利用聚合酶链反应（PCR）技术，对2型糖尿病患者血脂代谢水平相关的GLP1R基因多态性位点进行检测，为研究2型糖尿病人群GLP1R基因多态性和科学预测T2DM患者血脂代谢水平提供了技术支持。水平提供了技术支持。水平提供了技术支持。

【技术实现步骤摘要】
一种基因SNP检测试剂盒在预测2型糖尿病患者血脂代谢水平中的应用


[0001]本专利技术属于血脂水平预测
，具体涉及一种基因SNP检测试剂盒在预测2型糖尿病患者血脂代谢水平中的应用。

技术介绍

[0002]2型糖尿病（T2DM）是一种以高血糖为特征的内分泌及代谢性疾病，T2DM患者表现出胰岛素分泌受损或功能下降的特征。
[0003]胰高糖素样肽
‑
1（Glucagon
‑
like peptide
‑
1, GLP
‑
1）是一种由肠道L细胞分泌的内源性肠促胰岛素，在维持血糖平衡的过程中发挥重要的作用。GLP
‑
1通过结合并激活GLP
‑
1受体（Glucagon
‑
like peptide
‑
1 receptor, GLP
‑
1R），以葡萄糖依赖的方式促进胰岛素的合成和分泌、抑制胰岛 β 细胞凋亡、促进 β 细胞增殖。GLP
‑
1R属于G蛋白偶联受体家族的一员，由463个氨基酸组成，含有7个跨膜结构域，是2型糖尿病治疗药物胰高糖素样肽
‑
1受体激动剂（GLP1RAs）的治疗靶点。GLP
‑
1R由GLP
‑
1R基因编码，其基因多态性的发生可能会影响GLP
‑
1R的结构组成从而进一步影响受体功能，rs10305420和rs3765467两位点均位于第6号染色体短臂（chr6939048860（GRCh38.p12））上。rs10305420位点的基因多态性导致受体7位的脯氨酸变为亮氨酸，rs3765467位点多态性可致受体132位的精氨酸被谷氨酰胺替代。
[0004]GLP
‑
1R的功能对预测胰岛素的分泌、GLP
‑
1及其类似物的药理作用等有重要的参考价值。GLP
‑
1R突变位点较多，东亚人群中突变频率最高的单核苷酸多肽性（SNP）位点为rs3765467（G>A）和rs10305420（C>T），最小基因频率分别为22.7%和13.7%。研究发现，接受GLP1RAs治疗后，rs3765467野生型（GG型）患者比rs3765467突变型（GA/AA型）患者能获得更好的降糖、减重疗效。另一项研究表明，与rs10305420（CC型）相比，rs10305420（CT/TT型）与欧洲肥胖人群和多囊卵巢综合征女性对利拉鲁肽（一种GLP
‑
RA）反应降低有关。
[0005]目前，对于GLP
‑
1R基因的研究主要集中于与血糖相关水平的研究，但GLP
‑
1R基因在脂质代谢过程中表现出的作用不容忽视。与肥胖相关的胰岛素抵抗风险增加导致T2DM患者的脂肪组织表现出特异的脂质组学特征，因此控制T2DM不仅需要降糖，还需制定合理的降脂、降压、减重等综合管理目标。对于已诊断T2DM而尚未确定是否存在脂质代谢紊乱的患者而言，科学的预测其血脂水平的未来变化趋势非常必要。

技术实现思路

[0006]针对现有技术中对2型糖尿病人缺乏血脂水平研究及预测因子的问题，本专利技术提供了一种基因SNP检测试剂盒在预测2型糖尿病患者血脂代谢水平中的应用，利用聚合酶链反应（PCR）技术，对2型糖尿病患者血脂代谢水平相关的GLP1R基因多态性位点进行检测，从而可以预测患者的血脂代谢的发展趋势，为制定血糖血脂管理的给药方案给出指导。
[0007]本专利技术通过以下技术方案实现：
一种基因SNP检测试剂盒在预测2型糖尿病患者血脂代谢水平中的应用，所述的试剂盒包括rs3765467正向引物、rs3765467反向引物、rs10305420正向引物、rs10305420反向引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；所述的应用为非疾病诊断方法的2型糖尿病患者血脂代谢编码基因的测序。
[0008]进一步地，所述的试剂盒还包括检测试剂、检测芯片和检测载体。
[0009]进一步地，所述的检测试剂包括Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、Buffer DE
‑
A、Buffer DE
‑
B、Buffer W1、Buffer W2、Eluent、BigDye 2.5
×
和BigDye Seq Buffer5
×
。
[0010]进一步地，所述的试剂盒还包括纯化用树脂、点样以及质谱检测用钯片和人基因组DNA提取试剂。
[0011]进一步地，所述的试剂盒的使用方法包括以下步骤：（1）利用试剂盒中的引物组对待测样本进行PCR扩增，得到第一扩增产物；（2）对第一扩增产物进行纯化；（3）纯化后的第一扩增产物进行再扩增，得到第二扩增产物；（4）对第二扩增产物进行测序。
[0012]进一步地，步骤（1）中PCR扩增体系为：。
[0013]进一步地，步骤（1）中PCR扩增程序为：。
[0014]进一步地，步骤（3）中PCR扩增体系为：。
[0015]进一步地，步骤（3）中PCR扩增程序为：
。
[0016]进一步地，利用基因的测序结果预测2型糖尿病患者血脂代谢水平，有利于科学预测T2DM患者脂代谢变化趋势，在临床实践中制定血脂管理的最佳方案。
[0017]有益效果本专利技术利用PCR技术，对2型糖尿病患者血脂代谢水平相关的GLP1R基因多态性位点进行检测，为研究2型糖尿病人群GLP1R基因多态性和科学预测T2DM患者血脂代谢水平发展趋势提供了技术支持，有利于科学预测T2DM患者的疾病进程，在临床实践中制定血脂管理的最佳方案，节约医疗成本，同时也为基于药物基因组学理念的新药研发提供指导依据。
附图说明
[0018]图1为rs10305420（C>T）基因位点的扩增片段经Sanger双脱氧终止测序法检测，所得的两位点多态性峰图，从左到右一次为rs10305420（杂合子CT）、rs10305420（野生型CC）、rs10305420（突变纯合子TT）基因型；图2为rs3765467(G>A)基因位点的扩增片段经Sanger双脱氧终止测序法检测，所得的两位点多态性峰图；从左到右一次为rs3765467（野生型GG）、rs3765467（杂合子GA）、rs3765467（突变纯合子AA）基因型。
具体实施方式
[0019]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优势更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0020]实施例1基因SNP检测试剂盒包括rs3765467、rs1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基因SNP检测试剂盒在预测2型糖尿病患者血脂代谢水平中的应用，其特征在于，所述的试剂盒包括rs3765467正向引物、rs3765467反向引物、rs10305420正向引物、rs10305420反向引物，其核苷酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3和SEQ ID No.4所示；所述的应用为非疾病诊断方法的2型糖尿病患者血脂代谢编码基因的测序。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的试剂盒还包括检测试剂、检测芯片和检测载体。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的检测试剂包括Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、Buffer DE
‑
A、Buffer DE
‑
B、Buffer W1、Buffer W2、Eluent、BigDye 2.5
×
和BigDye Seq Buffer5...

【专利技术属性】
技术研发人员：李妍，李越，杨祉妍，杨蕊，董中华，王昕宇，
申请(专利权)人：山东第一医科大学第一附属医院山东省千佛山医院，
类型：发明
国别省市：