一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001及其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及天然产物制备技术领域，公开了一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001及其制备和应用，其制备方法包括如下步骤：步骤一、将石斛内生菌培养、发酵得发酵液；步骤二、将发酵液减压浓缩后萃取，并对萃取液进行浓缩得浸膏；步骤三、将浸膏梯度洗脱、显色合并后，分为A～F6个粗组分；步骤四、将组分D经中压液相色谱梯度洗脱，得到9个亚组分D1～D9；步骤五、将组分D3经正相硅胶柱色谱梯度洗脱，得到8个亚组分D3

【技术实现步骤摘要】
一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001及其制备和应用


[0001]本专利技术涉及天然产物制备
，具体涉及一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001及其制备和应用。

技术介绍

[0002]金沙江石斛(Dendrobium wangliangii G.W.Hu,C.L.Long et X.H.Jin)，是我国兰科特有种类，为金沙江干热河谷云南段特有类群，在药用及观赏方面有着潜在价值。但由于分布区域狭窄、气候异常以及认为采集等诸多因素的影响，金沙江石斛目前濒临灭绝，亟待保护。成熟的兰科植物种子极其微小且没有储存营养的胚乳，这使得兰科植物在长期进化中，形成了独特的与内生真菌的共萌发出芽的方式。胶膜属真菌Tullasnella sp.就是其中一种，目前有研究发现，该属内生真菌能对不同种类的石斛种子产生促萌发作用。
[0003]内生真菌能产生种类丰富且具有良好生物活性的代谢产物，但在内生真菌Tullasnella sp.与宿主植物金沙江石斛种子共萌发过程中哪些化合物能促进种子萌发，目前还尚不清楚。所以对金沙江石斛内生真菌Tullasnella sp.的化学成分及其生物活性的研究，能够为金沙江石斛的保护保育工作提供化学基础，同时也能挖掘有良好活性的新颖化合物。

技术实现思路

[0004]本专利技术意在提供一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001及其制备和应用，以实现石斛种子的萌发促进并开发该化合物的生物活性。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001，其特征在于：化合物结构如式(I)所示：
[0006][0007]另一方面，本技术方案提供一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001的制备方法，包括如下步骤：
[0008]步骤一、将石斛内生菌培养、发酵得发酵液；
[0009]步骤二、将发酵液减压浓缩后萃取，并对萃取液进行浓缩得浸膏；
[0010]步骤三、将浸膏梯度洗脱、显色合并后，分为A～F 6个粗组分；
[0011]步骤四、将组分D经中压液相色谱梯度洗脱，得到9个亚组分D1～D9；
[0012]步骤五、将组分D3经正相硅胶柱色谱梯度洗脱，得到8个亚组分D3
‑
1～D3
‑
8；
[0013]步骤六、将组分D3
‑
6经制备型HPLC分离，得到化合物DWT001。
[0014]再一方面，本技术方案还提供一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001在制备抑菌剂中的应用。
[0015]优选的，作为一种改进，步骤一中，培养条件为在PDB液体培养基里25℃恒温培养5d。
[0016]优选的，作为一种改进，步骤一中，发酵培养基组成为：5％葡萄糖、0.15％蛋白胨、0.5％酵母、0.05％ KH2PO4、0.05％ MgSO4、余量为水；发酵条件为24
‑
28℃、140
‑
180rpm条件下液体发酵一个月。
[0017]优选的，作为一种改进，步骤二中，萃取剂为乙酸乙酯，萃取次数为3次。
[0018]优选的，作为一种改进，步骤三中，采用200
‑
300目正相硅胶柱色谱洗脱，洗脱时氯仿与甲醇的体积比依次为1:0、50:1、30:1、15:1、10:1、5:1、3:1、2:1、1:1。
[0019]优选的，作为一种改进，步骤四中，洗脱液为甲醇
‑
水，洗脱时甲醇与水的体积比依次为20:80、40:60、60:40、80:20、100:0。
[0020]优选的，作为一种改进，步骤五中，洗脱液为石油醚
‑
丙酮体系，洗脱时石油醚与丙酮的体积比依次为8:1、6:1、4:1、2:1、1:1、0:1。
[0021]优选的，作为一种改进，步骤六中，分离液为甲醇
‑
水，甲醇与水的体积比为40:60
‑
44:56，流速4mL/min，分离时间20min。
[0022]本方案的原理及优点是：实际应用时，本技术方案中，从石斛内生真菌Tullasnella sp.的发酵液中通过梯度洗脱剂薄层色谱分析得到不同的组分，从特定组分中分离得到1个新的化合物(DWT001)，经核磁共振及质谱鉴定，DWT001为新的chromone类化合物。经过抗人类病原菌活性的检测，化合物DWT001表现出对大肠埃希菌E.coli和白色念珠菌C.albicans较好的抑制活性。
附图说明
[0023]图1为本专利技术金沙江石斛内生真菌Tullasnella sp.平板图。
[0024]图2为本专利技术实施例中金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001氢谱。
[0025]图3为本专利技术实施例中金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001碳谱。
[0026]图4为本专利技术实施例中金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001 HSQC图谱。
[0027]图5为本专利技术实施例中金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001 HMBC图谱。
[0028]图6为本专利技术实施例中金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001 1
H
‑1HCOSY图谱。
[0029]图7为本专利技术实施例中金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001 ROESY图谱。
[0030]图8为本专利技术实施例中金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001 MS图谱。
具体实施方式
[0031]下面通过具体实施方式进一步详细说明，但本专利技术的实施方式不限于此。若未特别指明，下述实施方式所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；所用的实验方法均为常规方法；所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到。
[0032]一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001，化合物结构如式(I)所示：
[0033][0034]一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001的制备方法，包括如下步骤：
[0035]步骤一、发酵液的制备：将石斛内生真菌Tullasnella sp.在PDB液体培养基里25℃恒温培养5天。然后将培养基倒入含有液体培养基的发酵罐中，在25℃和160rpm条件下液体发酵一个月，最后获得发酵液25L(液体培养基组成：5％葡萄糖，0.15％蛋白胨，0.5％酵母，0.05％ KH2PO4和0.05％ MgSO4，余量为水)。其中，金沙江石斛内生真菌Tullasnella sp.为云南大学生态与环境学院提供。
[0036]步骤二、化合物DWT001的制备：将25L发酵液减压浓缩至5L，用4L乙酸乙酯反复萃取三次，乙酸乙酯萃取液浓缩后获得浸膏136g。采用200
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300目正相硅胶柱色谱，用氯仿
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甲醇为洗脱液(1:0
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0:1，v/v)梯度洗脱，洗脱时氯仿与甲醇的体积比依次为1:0、50:1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001，其特征在于：化合物结构如式(I)所示：2.根据权利要求1所述的一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一、将石斛内生菌培养、发酵得发酵液；步骤二、将发酵液减压浓缩后萃取，并对萃取液进行浓缩得浸膏；步骤三、将浸膏梯度洗脱、显色合并后，分为A～F 6个粗组分；步骤四、将组分D经中压液相色谱梯度洗脱，得到9个亚组分D1～D9；步骤五、将组分D3经正相硅胶柱色谱梯度洗脱，得到8个亚组分D3
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1～D3
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8；步骤六、将组分D3
‑
6经制备型HPLC分离，得到化合物DWT001。3.根据权利要求2所述的一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001的制备和应用，其特征在于：步骤一中，培养条件为在PDB液体培养基里25℃恒温培养5d。4.根据权利要求3所述的一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001的制备和应用，其特征在于：步骤一中，发酵培养基组成为：5％葡萄糖、0.15％蛋白胨、0.5％酵母、0.05％KH2PO4、0.05％MgSO4、余量为水；发酵条件为24
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28℃、140
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180rpm条件下液体发酵一个月。5.根据权利要求4所述的一种金沙江石斛内生真菌色原酮类化合物DWT001的制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：王文祥，熊伟，杨策，李宁，冯彬彬，易东阳，
申请(专利权)人：重庆三峡医药高等专科学校，
类型：发明
国别省市：