一种基于VPCR-Cas13a的CRP2C19基因多态性检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于VPCR

【技术实现步骤摘要】
一种基于VPCR
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Cas13a的CRP2C19基因多态性检测方法


[0001]本专利技术属于分析检测
，具体涉及一种基于VPCR
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Cas13a的CYP2C19基因多态性检测方法。

技术介绍

[0002]脑卒中是我国居民致死的第一病因，致残的主要病因。我国对脑卒中急性期、一级预防、二级预防治疗的最新指南和专家共识治疗推荐意见中，均提到抗血小板聚集治疗方案。氯吡格雷作为抗血小板聚集药物，广泛用于临床治疗。氯吡格雷需要CYP450酶家族将其代谢转化为活性物质，发挥抗血小板聚集作用，其中CYP2C19酶发挥主要作用。然而，编码CYP2C19酶的CYP2C19基因的单核苷酸多态性(SNP)会影响对氯吡格雷的代谢能力，最常见基因型有CYP2C19*2(c.681G>A)、CYP2C19*3(c.636G>A)和CYP2C19*17(c.806C>T)，在中国人群的发生频率分别约为23.1
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35％、2
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7％和0.5
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高Cas13a对CYP2C19标准ssRNA检测特异性的crRNA筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在crRNA与CYP2C19等位基因结合的位点的一侧或两侧，引入一个或两个以上的碱基突变；(2)将步骤(1)得到的crRNA与Cas13a结合，用于CYP2C19标准ssRNA的识别检测，激活Cas13a的反式切割活性，切割FQ
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ssRNA信号分子，释放荧光，筛选能够提高Cas13a对CYP2C19标准ssRNA检测特异性的crRNA。2.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(1)所述的crRNA包括如SEQ ID NO.7～SEQ ID NO.24所示的核苷酸序列。3.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)所述的标准ssRNA包括如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列；FQ
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ssRNA信号分子为FAM
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UUUUU
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BHQ1。4.根据权利要求1所述的筛选方法，其特征在于，步骤(2)中Cas13a的浓度为30
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50nM，crRNA浓度为10
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30nM，目标ssRNA浓度为50
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200pM，核糖核酶抑制剂0.1
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10U/μL，FQ
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ssRNA信号分子浓度为50
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300nM。5.一种基于VPCR
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Cas13a的CYP2C19基因多态性检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)利用设计的VPCR引物，VPCR扩增CYP2C19*2、*3、*17基因多态性位点正义链对应的标准ssDNA；2)将步骤1)得到的VPCR产物直接加入T7转录
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Cas13a检测体系，根据检测的荧光强度进行基因分型。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘猛，吴云萍，常洋洋，刘毅，
申请(专利权)人：大连理工大学，
类型：发明
国别省市：