一种芝麻主要过敏原蛋白Sesi3B细胞线性表位鉴定方法技术

本发明专利技术涉及一种芝麻过敏原蛋白Sesi3的B细胞线性表位鉴定方法，包括以下步骤：首先通过生物信息学技术对芝麻过敏原Sesi3的B细胞线性表位进行预测；然后通过slot

【技术实现步骤摘要】
一种芝麻主要过敏原蛋白Ses i 3 B细胞线性表位鉴定方法


[0001]本专利技术涉及生物领域，具体涉及一种芝麻过敏原蛋白的B细胞线性表位鉴定方法。

技术介绍

[0002]芝麻(Sesamum indicum L.)属于胡麻科、芝麻属，一年生草本植物。芝麻是世界上最古老的油料作物之一，其富含脂质、蛋白质、维生素、矿物质和诸多功能性成分。具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗高血压、抗黑色素、保护听觉、抗胆固醇等作用。此外，芝麻因含大量油脂及芝麻素，其独特的香味受到食品工业的广泛关注，可用于生产各种食物，如芝麻酱，芝麻油等等。然而，作为新的八大类过敏原之一，芝麻也会引起严重的过敏反应。据报道，美国约有17％的食物过敏儿童对芝麻过敏，而芝麻同样也是中国过敏患者中最常见的过敏原之一。与其他食物过敏一样，芝麻过敏是由IgE介导的I型超敏反应，是通过摄入、吸入或接触过敏原引起的。它会引起包括呼吸系统、胃肠消化系统、皮肤黏膜系统等多个系统的全身性过敏反应，严重者甚至会导致休克或死亡。这些过敏症状通常会持续到患者的余生。
[0003]芝麻主要含有七种过敏原蛋白，被国际免疫学会联盟(IUIS)命名为Ses i 1
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Ses i 7。Ses i 3是7S类豌豆球蛋白，属于Cupin超家族，在其三维空间结构中具有β
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折叠桶的蛋白质超二级结构。豌豆球蛋白由单个肽链的三个单体结合成三角形的扁平三聚体，能够抵抗热变性和酶消化。Ses i 3由585个氨基酸组成，缺乏二硫键，分子量约为45kDa。相关研究表示，Ses i 3可被75％的芝麻过敏患者血清所识别，是芝麻的主要过敏原之一。而Ses i 3与开心果、榛子、花生、碧根果中的7S豌豆球蛋白家族具有超过40％的同源性，这也使得芝麻中的Ses i 3与其他坚果具有临床交叉过敏反应的可能性。同时，Ses i 3对不同酶消化的反应各不相同，其容易被胃蛋白酶酶解，而对胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶的抵抗性较强。由于Ses i 3具有较强的抗消化能力和热稳定性，并且具有较高的临床交叉过敏反应的可能性。使得Ses i 3具有很强的致敏风险，与芝麻子中其他过敏蛋白相比，可引起更严重的过敏反应。
[0004]由IgE介导的I型超敏反应可分为三个阶段：致敏阶段、激发阶段和效应阶段。在致敏阶段，食物过敏原被抗原呈递细胞(APCs)处理，形成小肽，与主要组织相容性分子(MHCs)结合，形成肽
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主要组织相容性分子(pMHCs)。分布在细胞表面的pMHCs被T淋巴细胞识别并诱导其增殖，促进其分化为Th2型，并释放一系列细胞因子，激活B细胞以产生特异性IgE抗体。这些IgE抗体随后被肥大细胞和嗜碱性粒细胞表面的FcεRI受体识别，以获得致敏状态。激活T淋巴细胞并促进其分化的肽被称为T细胞表位。由于T细胞表位通常经过APCs处理得到的，它们通常是线性表位。在激发阶段，一旦食物过敏原再次进入体内，就会与IgE抗体交联，刺激肥大细胞脱颗粒，释放各种促炎因子，包括白介素，组胺，激肽原酶等，在皮肤、胃肠道、呼吸道和整个身体产生过敏症状。由于B细胞表位是直接与IgE抗体结合的多肽，因此B细胞表位可以是线性的，也可以使构象型的。与表位鉴定有关的研究主要分为T细胞表位鉴定和B细胞表位鉴定。目前还没有利用免疫学方法对Ses i 3表位鉴定的详细报道，因此，明确Ses i 3抗原表位等生物信息，有助于深入阐释Ses i 3的致敏机理，可为芝麻过敏原防
控打下坚实的理论基础。
[0005]免疫微阵列检测法采用微点取样，将通过生物信息学软件预测得到的表位肽有序地固定在固相载体上，通过对每个肽的免疫活性进行评分，建立免疫评分矩阵，能够准确筛选出过敏原蛋白的主要B细胞线性表位。这种方法仅要消耗微升量的血清，而且可以同时检测数千个目标，可以大大降低单个生物样品的检测成本，有利于高通量表位的筛选。此外，免疫得分矩阵的建立也大大提高了表位筛选的准确性，以获得更可靠的数据。

技术实现思路

[0006]针对现有表位鉴定技术的不足，本专利技术的目的在于合成高纯度且具有一定免疫活性的重组蛋白Ses i 3，并对其结构及同源性进行分析。本专利技术还提供一种芝麻过敏原蛋白Ses i 3 B细胞线性表位的鉴定方法。
[0007]为实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案实现的：
[0008]一种芝麻过敏原蛋白Ses i 3的B细胞线性表位鉴定方法，包括以下步骤：
[0009](1)通过生物信息学技术对芝麻过敏原Ses i 3的B细胞线性表位进行预测；
[0010](2)通过Fmoc固相法合成相应抗原表位多肽；
[0011](3)通过slot
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blot免疫微阵列技术结合免疫得分矩阵，对芝麻过敏原Ses i 3的B细胞线性表位进行鉴定。
[0012]优选的，所述步骤(1)中的生物信息学技术选自DNAStar软件、SOPMA在线网站和Bcpreds在线网站中的一种或几种。
[0013]优选的，所述步骤(1)中的生物信息学技术为DNAStar软件、SOPMA在线网站和Bcpreds在线网站。
[0014]优选的，所述步骤(1)中预测得到的表位多肽氨基酸序列选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的两种以上。
[0015]优选的，所述步骤(1)中预测得到的表位多肽氨基酸序列选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的三种以上、四种以上、五种以上、六种以上、七种以上、八种以上或九种以上。
[0016]优选的，所述步骤(1)中预测得到的表位多肽氨基酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10的组合。
[0017]优选的，所述步骤(3)中将合成的预测表位多肽固定于硝酸纤维素膜上，并分别与含IgE抗体的芝麻过敏患者血清孵育，然后与带有辣根过氧化物酶标记的小鼠抗人IgE抗体孵育，并利用ECL进行染色，拍照，利用ImageJ软件对灰度值进行计算，根据分数建立免疫得分矩阵。
[0018]优选的，所述步骤(3)中合成的预测表位多肽与芝麻过敏患者血清孵育的时间为4小时，孵育的温度为37℃。
[0019]优选的，所述步骤(3)中合成的预测表位多肽与辣根过氧化物酶标记的小鼠抗人IgE抗体孵育的时间为3小时，孵育的温度为37℃。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种芝麻过敏原蛋白Sesi3的B细胞线性表位鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)通过生物信息学技术对芝麻过敏原Sesi3的B细胞线性表位进行预测；(2)通过Fmoc固相法合成相应抗原表位多肽；(3)通过slot
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blot免疫微阵列技术结合免疫得分矩阵，对芝麻过敏原Sesi3的B细胞线性表位进行鉴定。2.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中的生物信息学技术选自DNAStar软件、SOPMA在线网站和Bcpreds在线网站中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中预测得到的表位多肽氨基酸序列选自SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10中的两种以上。4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(1)中预测得到的表位多肽氨基酸序列为SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ IDNO.5、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10的组合。5.根据权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(3)中将合成的预测表位多肽固定于硝酸纤维素膜上，并分别与含IgE抗体的芝麻过敏患者血清孵育，然后与带有辣根过氧化物酶标记的小鼠抗人IgE抗体孵育，并利用ECL进行染色，拍照，利用Ima...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈颖，于宁，康文瀚，秦宇飞，张九凯，邓婷婷，邢冉冉，
申请(专利权)人：中国检验检疫科学研究院，
类型：发明
国别省市：