一种液体海藻肥料中多种植物激素的LC-MS检测方法技术

本发明专利技术提供了一种液体海藻肥料中多种植物激素的LC

【技术实现步骤摘要】
一种液体海藻肥料中多种植物激素的LC
‑
MS检测方法


[0001]本专利技术涉及分析化学
，具体涉及一种液体海藻肥料中多种植物激素的LC
‑
MS检测方法。

技术介绍

[0002]植物激素是植物接受一定的信号诱导后，在植物特定组织代谢合成的微量生理活性物质，植物激素通过与特定的蛋白质受体结合来调节植物生长发育。植物的生长发育以及作物产质量的提高都离不开植物激素的调控作用。
[0003]海藻是重要的海洋生物资源组成部分，具有重要的经济价值。随着有机农业、绿色生态概念的深化，海藻肥料得到了广泛的关注。作为一种环保的新型功能性肥料，具有促进作物生长、增产保质、增强作物抗虫抗病能力、提供微量元素等诸多优点。海藻中除了含有丰富的氨基酸、蛋白质、维生素、矿物质等营养元素外，还含有肥用价值评价中重要的一项元素，植物激素。但目前仍未有针对于液体海藻肥料植物激素的分析检测方法，因此亟须一种高灵敏度、可靠、可重复的液体海藻肥料植物激素检测方法以更高效合理地利用海藻肥料资源。
[0004]植物激素对植物的各种生理活动起着重要的调节作用，因此精确定量检测植物激素含量成为了研究学者们关注的焦点。目前针对植物激素的测定方法很多，存在有生物鉴定法、光谱分析法、色谱法、免疫检测法、电化学分析法和色谱质谱联用技术。后三者是目前的主流技术并且近年来技术发展进步显著。
[0005]免疫检测技术基于抗原和抗体的特异性结合，有较好的专一性，是测算植物激素水平的一种敏感且相对廉价的方法。该类方法主要包括放射免疫测定法、酶联免疫吸附测定法、荧光免疫法、化学发光法、免疫细胞化学技术。但植物激素与载体结合刺激了抗体的形成，会降低特异性。样品中的植物激素类似物，生物合成途径中间体和其他结构类似物也会干扰抗体识别。这两方面因素制约着免疫检测技术在植物激素检测上的应用。
[0006]电化学分析法利用生物传感器层将化学信号转换为可测量的电信号，而电流或电位差等各类电信号又能与电子活性物质水平成化学计量关系。近年来，生物传感器研究取得了巨大突破。高灵敏度、实时检测和连续动态监测等能力纷纷在生物传感器上得到实现，使其成为植物激素检测的一个理想选择。然而，稳定性和重现性的无法保证成为了生物传感器无法广泛应用并仍处于方法学探索阶段的重要原因。
[0007]色谱质谱联用技术结合了色谱对混合物的分离能力与质谱的高选择性、高灵敏度的检测能力。质谱通过离子源将植物激素分子电离，随后使用质量分析仪读取离子的质荷比(m/z)。在选择监测模式下，研究人员可以高灵敏度高选择性地监测目标化合物特征离子并进行定量。Xiangqing Pan等(Nature protocols,2010,5(6):986
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992)建立了一种基于液相色谱质谱联用技术的毫克量新鲜植物组织的植物激素定量方法，但未能涵盖异戊烯腺嘌呤和甜菜碱的检测，前者能在刺激植物细胞分裂中发挥作用，后者在提高植物抗逆性上效果显著，两者在海藻肥料中都有着较高的含量。李艳等(色谱,2014,32(08):863
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868)采
用液相色谱质谱联用技术建立了同时分析马尾藻羊栖菜五个部位中十种植物激素含量的方法，但根据专利技术人的实验可知，该方法存在峰形不佳的现象，且实验所得数据偏大，有一定的测量准确度不足的风险。专利CN111308006B公开了一种基于LC
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MS高通量高灵敏度检测植物激素的方法，但检测的定量限偏高、线性范围偏窄，也并未用精密度和准确度评价方法，对于植物中含量为纳克级别的植物激素，欠缺一定的灵敏度和可靠性。
[0008]液相色谱质谱联用技术克服了植物激素含量测定中存在的样品衍生化复杂、灵敏度低、选择性低等不足，并且能够实现多种激素同时测定，成为了目前激素分析的主流技术。因此，本专利技术围绕液体海藻肥料提供一种液体海藻肥料中多种植物激素的LC
‑
MS检测方法。

技术实现思路

[0009]本专利技术针对上述存在的问题，提供了一种液体海藻肥料中多种植物激素的LC
‑
MS检测方法。
[0010]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0011]提供了一种液体肥料中多种植物激素的LC
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MS检测方法，包含以下步骤：
[0012]1)液体肥料离心得到样品液体；
[0013]2)配制目标待测植物激素的标准溶液，溶剂为有机溶剂
‑
水混合体系，进行质谱分析条件优化；
[0014]液相色谱条件为：
[0015]色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱；
[0016]流速：0.1
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0.5mL/min；
[0017]柱温：20
‑
50℃；
[0018]进样体积：3
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8μL；
[0019]流动相：流动相A为0.1％甲酸
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水溶液，流动相B为0.1％甲酸
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甲醇溶液；
[0020]洗脱时间为20
‑
30min；
[0021]质谱条件为：
[0022]雾化气温度30
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400℃，雾化气气流2
‑
8L/min，鞘气温度250
‑
350℃，鞘气气流8
‑
15L/min，在正离子电离模式下喷雾电压为3
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4kV，负离子电离模式下喷雾电压为3
‑
5kV，采用多反应监测模式MRM扫描；
[0023]3)配制一系列不同浓度的混合目标待测植物激素标准溶液，溶剂为有机溶剂
‑
水混合体系，绘制标准曲线，求出相应的线性回归方程、相关系数、定量限、精密度、回收率。
[0024]4)在步骤2)优选的质谱分析条件下进样LC
‑
MS分析步骤1)得到的样品液体，得到液体海藻肥料中植物激素含量信息。
[0025]优选地，液相色谱条件为：
[0026]色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱；
[0027]流速：0.3mL/min；
[0028]柱温：30℃；
[0029]进样体积：5μL；
[0030]流动相：流动相A为0.1％甲酸
‑
水溶液，流动相B为0.1％甲酸
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甲醇溶液；
[0031]洗脱时间为26min。
[0032]优选地，质谱条件为雾化气温度350℃，雾化气气流5L/min，鞘气温度300℃，鞘气气流11L/min，在正离子电离模式下喷雾电压为3.5kV，负离子电离模式下喷雾电压为4kV，采用多反应监测模式MRM扫描。
[0033]优选地，所述离心的具体参数为速度10000
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13000rpm、时间8
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10分钟；进一步优选本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种液体肥料中多种植物激素的LC
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MS检测方法，其特征在于，包含以下步骤：1)液体肥料离心得到样品液体；2)配制目标待测植物激素的标准溶液，溶剂为有机溶剂
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水混合体系，进行质谱分析条件优化；液相色谱条件为：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC HSS T3色谱柱；流速：0.1
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0.5mL/min；柱温：20
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50℃；进样体积：3
‑
8μL；流动相：流动相A为0.1％甲酸
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水溶液，流动相B为0.1％甲酸
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甲醇溶液；洗脱时间为20
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30min；质谱条件为：雾化气温度300
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400℃，雾化气气流2
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8L/min，鞘气温度250
‑
350℃，鞘气气流8
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15L/min，在正离子电离模式下喷雾电压为3
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4kV，负离子电离模式下喷雾电压为3
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5kV，采用多反应监测模式MRM扫描；3)配制一系列不同浓度的混合目标待测植物激素标准溶液，溶剂为有机溶剂
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水混合体系，绘制标准曲线，求出相应的线性回归方程、相关系数、定量限、精密度、回收率；4)在步骤2)优选的质谱分析条件下进样LC
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MS分析步骤1)得到的样品液体，得到液体海藻肥料中植物激素含量信息。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1)所述离心的具体参数为速度10000
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13000rpm、时间8
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10分钟。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤1)所述液体肥料包括液体海藻肥料、液体羊栖菜提取物中的至少一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨振中，蒋剑平，朱越，艾玉廷，吴凤妙，
申请(专利权)人：浙江石原金牛生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：