鼠李糖基转移酶突变体、编码基因、制备方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种鼠李糖基转移酶突变体、编码基因、制备方法及应用。所述鼠李糖基转移酶突变体的酶活数据Kcat/km是对照菌酶活的136倍，相对于现有技术具有显著进步。将本发明专利技术所述鼠李糖基转移酶突变体应用于新橙皮苷的制备，可显著提升反应底物的鼠李糖基修饰效率，进而提升新橙皮苷的生产效率。本发明专利技术还提供了用于生产所述鼠李糖基转移酶突变体的重组质粒及工程菌；尤其包括具有稳定遗传的鼠李糖基转移酶突变体与UDP

【技术实现步骤摘要】
鼠李糖基转移酶突变体、编码基因、制备方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物合成
，尤其涉及一种鼠李糖基转移酶突变体、编码基因、制备方法及应用。

技术介绍

[0002]天然产物糖基化修饰的种类多样，其中，鼠李糖基化修饰是很重要的一种，且取代形式多样。鼠李糖基化修饰能显著提高天然产物的水溶性及稳定性，改善一些其生物活性，增加其生物利用度，增强靶向性作用并减少毒副作用等。因此，结构多样的鼠李糖苷类化合物在调节植物生长和发育方面发挥着不可替代的作用，且是药用活性先导物的重要来源。
[0003]鼠李糖基化修饰是由鼠李糖基转移酶催化完成的，鼠李糖基转移酶的活性是制约鼠李糖基化天然产物产量的重要因素。提高鼠李糖基转移酶酶活的蛋白质工程方法有两种，包括体外定向进化和理性设计。其中定向进化可以人为地创造特殊的进化条件，模拟自然进化机制，在体外改造基因，定向选择出所需性质的突变酶。上海交通大学冯雁课题组通过定向进化糖基转移酶UGT51，使其活性提高了近1500倍。中国科学院天津工业生物技术研究所孙媛霞团队通过定向进化使糖基转移酶UGT74AC1的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鼠李糖基转移酶突变体，其特征在于，所述鼠李糖基转移酶突变体的氨基酸序列包括SEQ ID NO:4。2.权利要求1所述鼠李糖基转移酶突变体的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列包括SEQ ID NO:3。3.用于获得权利要求2所述编码基因的定点突变引物对，其特征在于，所述定点突变引物对包括Q49A突变引物对和/或S50A突变引物对；所述Q49A突变引物对的上游引物序列包括SEQ ID NO:13；所述Q49A突变引物对的下游引物序列包括SEQ ID NO:14；所述S50A突变引物对的上游引物序列包括SEQ ID NO:15；所述S50A突变引物对的下游引物序列包括SEQ ID NO:16。4.用于生产权利要求1所述鼠李糖基转移酶突变体的生物材料，其特征在于，所述生物材料为重组质粒和/或工程菌，所述生物材料包括权利要求2所述编码基因。5.根据权利要求4所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料还包括UDP
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鼠李糖合酶基因。6.根据权利要求5所述的生物材料，其特征在于，所述UDP
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鼠李糖合酶基因的核苷酸序列包括SEQ ID NO:6。7.权利要求1所述鼠李糖基转移酶突变体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、构建权利要求4
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6任意一项所述的生物材料...

【专利技术属性】
技术研发人员：王彩霞，薛强，郝学密，于宛彤，苏新堯，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：