【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测SARS
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COV
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2、流感和RSV的方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年6月26日提交的美国临时申请号63/044,902和2020年9月4日提交的美国临时申请号63/074,809的优先权,出于任意目的,通过引用将其各自的全部内容并入本文。
[0003]提供了用于检测严重急性呼吸综合征冠状病毒2(SARS
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CoV
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2)、流感和呼吸道合胞病毒(RSV)的组合物和方法。特别地,提供了SARS
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CoV
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2、流感和RSV标志物以及可用于检测SARS
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CoV
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2、流感和RSV病毒的标志物组。
技术介绍
[0004]2019年12月31日,向世界卫生组织(WHO)报告了一起病因不明的呼吸道疾病暴发。鉴定了一种新型冠状病毒(2019
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nCoV),其已在全球多个省份造成数千例确诊的人感染。已经报告了严重疾病和一些死亡病例。国际病毒分类委员会(ICTV)将该病毒更名为SARS
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CoV
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2,其是“严重急性呼吸综合征冠状病毒2”的简称。世界卫生组织将SARS
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CoV
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2引起的疾病命名为冠状病毒病2019(COVID
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19)。COVID
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19与多种临床结果相关,包括无症状感染、轻度上呼吸道
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.检测受试者生物样品中甲型流感、乙型流感、RSV和SARS
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CoV
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2的存在或不存在的方法,其包括:a)使来自受试者的生物样品与检测甲型流感基因、乙型流感基因、RSV基因和SARS
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CoV
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2基因的引物组接触;b)进行一种或多种聚合酶链式反应(PCR);和c)检测由PCR产生的扩增子。2.确定受试者是否患有流感、RSV和/或COVID
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19的方法,其包括检测受试者样品中选自甲型流感或乙型流感、RSV和SARS
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CoV
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2的至少一个基因的存在或不存在,其包括:a)使来自受试者的生物样品与检测甲型流感基因、乙型流感基因、RSV基因和SARS
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CoV
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2基因的引物组接触;b)进行聚合酶链式反应(PCR);和c)检测由PCR产生的扩增子。3.权利要求1或权利要求2所述的方法,a)其中检测甲型流感的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测甲型流感PB2的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测流感PB2基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:1的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:1的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:17的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:18的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;ii)检测甲型流感PA的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测流感PA基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:2的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:2的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:20的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:21的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;iii)检测甲型流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测甲型流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:3的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:3的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:23的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:24的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;iv)检测禽流感MP的引物组,其选自:
1)正向和反向引物,其用于检测禽流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:4的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:4的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:26的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:27的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;b)其中检测乙型流感的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测乙型流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测乙型流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:6的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:6的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:32的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:33的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;ii)检测乙型流感NS的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测乙型流感NS基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:7的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:7的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:35的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:36的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;c)其中检测RSV的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测RSV A的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测RSV A基因的序列;和2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:38的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:39的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和ii)检测RSV B的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测RSV B基因的序列;和2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:41的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:42的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;和d)其中检测SARS
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CoV
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2的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测SARS
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CoV
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2E的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测SARS
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CoV
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2E基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:44的至少15个连续核苷酸具
有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:44的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:48的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:49的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;和ii)检测SARS
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CoV
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2N2的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测SARS
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CoV
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2N2基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:45的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:45的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:51的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:52的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列。4.权利要求1或权利要求2所述的方法,a)其中检测甲型流感的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测甲型流感PB2的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测流感PB2基因的序列;2)正向引物和正向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:1的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:1的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:17的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:18的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;ii)检测甲型流感PA的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测流感PA基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:2的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:2的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:20的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:21的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;iii)检测甲型流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测甲型流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:3的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:3的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:23的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:24的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;
iv)检测禽流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测禽流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:4的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:4的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:26的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:27的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;b)其中检测乙型流感的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测乙型流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测乙型流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:6的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:6的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:32的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:33的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;ii)检测乙型流感NS的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测乙型流感NS基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:7的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:7的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:35的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:36的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;c)其中检测RSV的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测RSV A的引物组,其选自:1)至少一种正向和至少一种反向引物,其用于检测RSV A基因的序列;和2)至少一种正向引物和至少一种反向引物,所述至少一种正向引物包含与SEQ ID NO:38和/或SEQ ID NO:67的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述至少一种反向引物包含与SEQ ID NO:39、SEQ IDNO:68和/或SEQ ID NO:69的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和ii)检测RSV B的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测RSV B基因的序列;和2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:41的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:42的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;和d)其中检测SARS
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CoV
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2的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测SARS
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CoV
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2E的引物组,其选自:
ID NO:32的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQ ID NO:33的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;和ii)检测乙型流感NS的引物组,其包含正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:35的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQ ID NO:36的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;c)其中检测RSV的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测RSV A的引物组,其包含至少一种正向引物和至少一种反向引物,所述至少一种正向引物包含与SEQ ID NO:38和/或SEQ ID NO:67的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述至少一种反向引物包含与SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:68和/或SEQ ID NO:69的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和ii)检测RSV B的引物组,其包含正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:41的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQ ID NO:42的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;和d)其中检测SARS
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CoV
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2的存在或不存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测SARS
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CoV
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2E的引物组,其包含正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:70的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQ ID NO:71的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;ii)检测SARS
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CoV
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2N2的引物组,其包含正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:73的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQ ID NO:52的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;和iii)检测SARS
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CoV
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2RdRP的引物组,其包含正向引物和至少一种反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:76的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述至少一种反向引物包含与SEQ ID NO:61和/或SEQ ID NO:78的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列。6.前述权利要求中任一项所述的方法,其中:a)甲型流感PA扩增子包含与SEQ ID NO:9具有至少85%同一性的序列;b)甲型流感PB2扩增子包含与SEQ ID NO:8具有至少85%同一性的序列;c)甲型流感MP扩增子包含与SEQ ID NO:10具有至少85%同一性的序列;d)禽流感MP扩增子包含与SEQ ID NO:11具有至少85%同一性的序列;e)乙型流感MP扩增子包含与SEQ ID NO:13具有至少85%同一性的序列;f)乙型流感NS扩增子包含与SEQ ID NO:14具有至少85%同一性的序列;g)RSV A扩增子包含与SEQ ID NO:15具有至少85%同一性的序列;h)RSV B扩增子包含与SEQ ID NO:16具有至少85%同一性的序列;i)SARS
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CoV
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2E扩增子包含与SEQ ID NO:46或SEQ ID NO:79具有至少85%同一性的序列;j)SARS
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CoV
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2N2扩增子包含与SEQ ID NO:47具有至少85%同一性的序列;和/或k)SARS
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CoV
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2RdRP扩增子包含与SEQ ID NO:80和/或SEQ IDNO:81具有至少85%同一性的序列。7.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述方法还包括使扩增子与至少一种探针
接触,所述至少一种探针选自甲型流感PA探针、甲型流感PB2探针、甲型流感MP探针、禽流感MP探针、乙型流感MP探针、乙型流感NS探针、RSV A探针、RSV B探针、SARS
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CoV
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2E探针、SARS
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2N2探针和SARS
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CoV
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2RdRP探针。8.权利要求7所述的方法,其中a)甲型流感PA探针包含与SEQ ID NO:22的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;b)甲型流感PB2探针包含与SEQ ID NO:19的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;c)甲型流感MP探针包含与SEQ ID NO:25的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;d)禽流感MP探针包含与SEQ ID NO:28的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;e)乙型流感MP探针包含与SEQ ID NO:34的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;f)乙型流感NS探针包含与SEQ ID NO:37的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;g)RSV A探针包含与SEQ ID NO:40的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;h)RSV B探针包含与SEQ ID NO:43的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;i)SARS
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CoV
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2E探针包含与SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:50或SEQ IDNO:56的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;j)SARS
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CoV
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2N2探针包含与SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:75和/或SEQ ID NO:53的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列;和/或k)SARS
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CoV
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2RdRP探针包含与SEQ ID NO:77的至少15个连续核苷酸至少85%相同或互补的序列。9.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述方法还包括检测外源性对照。10.权利要求9所述的方法,其中所述外源性对照是样品处理对照。11.权利要求9至10中任一项所述的方法,其中所述外源性对照是包装在噬菌体保护外壳中的RNA对照。12.权利要求9至11中任一项所述的方法,其中所述方法包括使来自样品的核酸与对照引物对接触以检测外源性对照。13.权利要求9至12中任一项所述的方法,其中所述方法包括形成外源性对照扩增子,并使所述外源性对照扩增子与能够选择性地与所述外源性对照扩增子杂交的对照探针接触。14.权利要求7至13中任一项所述的方法,其中每个探针包括可检测的标记。15.权利要求7至14中任一项所述的方法,其中每个探针包括荧光染料和猝灭剂分子。16.权利要求7至15中任一项所述的方法,其中用于检测不同靶分子的探针包括可检测标记,所述可检测标记可检测地不同。
17.权利要求7至16中任一项所述的方法,其中用于检测不同靶分子的探针包括可检测标记,所述可检测标记不是可检测地不同的。18.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述PCR是定量PCR。19.前述权利要求中任一项所述的方法,其中PCR反应从初始变性步骤到最终延伸步骤需要少于2小时。20.前述权利要求中任一项所述的方法,其中PCR反应从初始变性步骤到最终延伸步骤需要少于1小时。21.前述权利要求中任一项所述的方法,其中受试者具有流感、RSV和/或COVID
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19的一种或多种症状。22.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述受试者具有选自发烧、发冷、咳嗽、呼吸短促或呼吸困难、喉咙痛、流鼻涕、鼻塞、肌肉或身体疼痛、头痛、疲劳、新的味觉或嗅觉丧失、恶心或呕吐以及腹泻的一种或多种症状。23.前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述样品选自鼻咽拭子样品、口咽样品、鼻吸出物样品、鼻或中鼻甲拭子、鼻吸出物样品、鼻冲洗样品、咽拭子样品、支气管肺泡灌洗样品、支气管吸出物样品、支气管冲洗样品、气管内吸出物、气管内冲洗样品、气管吸出物、鼻分泌物样品、粘液样品、痰液样品、肺组织样品、尿液样品、唾液样品和粪便样品。24.组合物,其包含检测甲型流感基因、乙型流感基因、RSV基因和SARS
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CoV
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2基因的存在的引物组,a)其中所述检测甲型流感存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测甲型流感PB2的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测流感PB2基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:1的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:1的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:17的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:18的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;ii)检测甲型流感PA的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测流感PA基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:2的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:2的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:20的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:21的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;iii)检测甲型流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测甲型流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:3的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:3的至少15个连续核苷酸至少
85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:23的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:24的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;iv)检测禽流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测禽流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:4的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:4的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:26的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:27的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列;b)其中所述检测乙型流感存在的引物组包括以下中的至少一种:i)检测乙型流感MP的引物组,其选自:1)正向和反向引物,其用于检测乙型流感MP基因的序列;2)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:6的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:6的至少15个连续核苷酸至少85%互补的序列;和3)正向引物和反向引物,所述正向引物包含与SEQ ID NO:32的至少15个连续核苷酸具有至少85%同一性的序列,所述反向引物包含与SEQID NO:33的至少15个连续...
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