一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂制造技术

本发明专利技术提供了一种生物大分子纯化工艺，及固相萃取剂。该工艺包括：步骤S1,固相萃取剂的制备；S2，生物大分子料液调配，S3，目标分子吸附及捕获，S4，目标分子缓冲液洗涤，S5，目标分子洗脱与分步洗脱，S6，固相萃取剂的再生。本发明专利技术能够通过逆流，回流，并流，分流等工艺达到固相萃取剂发挥最佳性能，从生物大分子母液中提取纯度更高的多种产品。取纯度更高的多种产品。取纯度更高的多种产品。

【技术实现步骤摘要】
一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂


[0001]本专利技术涉及一种生物大分子分离
，并阐述了固相萃取剂的制备，具体为一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂。

技术介绍

[0002]当今有很多的大分子分离纯化技术，其中最重要的便是色谱分离技术。色谱分离采用硅胶，氧化铝等无机类，葡聚糖，琼脂糖等多糖类，聚苯烯，聚丙烯酸等聚合物类，无一不是通过孔径来实现比表面积的增大，来追求更大的结合载量，但是对于超大生物大分子来说，比如AAV，mRNA，pDNA来说，需要更大的孔径通过，现在的整体柱、纤维素膜、或者超大孔径的微球类产品均可实现上述大分子的分离提纯，但是只能够提纯指定分子，而且效率极低，回收率也很低全流程回收率约为30％。

技术实现思路

[0003]针对上述问题，本专利技术制备1微米左右的微球作为固相萃取剂，该1微米左右的微球具有6m2/ml的外表面积，与现使用的整体柱比表面积相当，兼具有流动性，能够快速的吸附目标分子，通过不同材质制备的固体萃取剂微球，具有亲水性，或疏水性，可以通过修饰其他的功能基团来实现各种各样的分离提纯需求。本专利技术采用离心机为萃取设备，能够很好的避免传统层析萃取因为微球粒径较小的原因，陡然增加的背压，还可以使吸附后的固体萃取剂和吸附剩余液体进行很好的分离，通过调节温度和缓冲液，可以满足活性较高的生物大分子进行分离提纯。本专利技术提供如下技术方案：
[0004]一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂，其步骤如下，固相相萃取剂制作，生物大分子料液调配，目标分子吸附及捕获，目标分子缓冲液洗涤，目标分子洗脱与分步洗脱，固相萃取剂的再生。
[0005]进一步的所属固相萃取剂为有机聚合物微球和多糖微球或包覆有机聚合物微球，本微球具有亲水性，不与生物大分子产生排斥作用，具有一定的强度，可以为实心球也可以为空心球。
[0006]更进一步的选择有机聚合物微球，所属的有机聚合物包括但不限于以下聚合物：丙烯酸聚合物，苯乙烯聚合物，聚乳酸，聚乙烯醇，甲基丙烯酸聚合物，尼伦类聚合物，甲基丙烯酸缩水甘油醚聚合物，环氧类聚合物等塑料及橡胶类聚合物。
[0007]所述聚合物形状为球形，有比较大的表面积，能够有比较大的配基密度，可以对生物大分子进行吸附，本专利技术主要应用于离子交换吸附类和亲和吸附类。
[0008]具体的离心萃取工艺如下：
[0009]生物大分子料液配置：料液配置应该选择与其对应的层析工艺料液相同，即有着相同的缓冲溶液，盐浓度等其他保持生物大分子活性的必备物质基础。生物大分子的浓度可以根据固体萃取剂的量来选择。一般选择为层析吸附法的120％～150％。
[0010]目标分子的吸附于捕获：首相把固体萃取剂加入到萃取离心机中，不断的喷入缓
冲溶液，以达到保证生物大分子活性的条件，对应层析工艺为缓冲步骤。上面步骤完成之后经过低速离心将缓冲液分离出来，加入配置好的料液量加入萃取离心机中，进行吸附和捕获目标分子，待捕获完成后进行低速离心或者切向流过滤，达到固液分离的效果。此步骤对应层析工艺中的上样。
[0011]目标分子洗涤：往萃取离心机中加入洗涤液，所述洗涤液与对应的层析工艺相同，将洗涤液加入萃取离心机中充分洗涤排除洗涤余液，可以采用一次洗涤，也可以多次洗涤，也可以采用不同浓度的洗涤液进行洗涤，以达到提纯或捕获的目的。
[0012]目标分子洗脱与分步洗脱：往萃取离心机中加入洗脱液，洗脱液与对应的层析工艺相同，将洗脱液和吸附生物大分子充分混合，收集洗脱余液，即为我们目标分子，可以采用梯度洗脱，等度洗脱或者阶梯洗脱。
[0013]固相萃取剂再生，也可为固相萃取剂再平衡，与所对应的层析工艺的再生液相同，能够重复使用6
‑
8次。
[0014]以上步骤为简单的一种用于生物大分子的离心萃取工艺及固相萃取剂的方式，此方式为构成离心萃取工艺的主要单元，即单级萃取。
[0015]单级萃取只包括一个混合过程和一个分离过程，我们的固体萃取剂与料液接触即为混合过程，低速离心分离即为分离过程。
[0016]有益效果
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0018]1.制备1微米左右的微球作为固相萃取剂，该1微米左右的微球具有6m2/ml的外表面积，与现使用的整体柱比表面积相当，兼具有流动性，能够快速的吸附目标分子，通过不同材质制备的固体萃取剂微球，具有亲水性，或疏水性，可以通过修饰其他的功能基团来实现各种各样的分离提纯需求。本专利技术采用离心机为萃取设备，能够很好的避免传统层析萃取因为微球粒径较小的原因，陡然增加的背压，还可以使吸附后的固体萃取剂和吸附剩余液体进行很好的分离，通过调节温度和缓冲液，可以满足活性较高的生物大分子进行分离提纯。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为本专利技术单级萃取装置示意图；
具体实施方式
[0021]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
[0022]本专利技术提供一种技术方案：一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂，其步骤如下，固相相萃取剂制作，生物大分子料液调配，目标分子吸附及捕获，目标分子缓冲液洗涤，目标分子洗脱与分步洗脱，固相萃取剂的再生。
[0023]本实施例中，所述固相萃取剂为有机聚合物微球和多糖微球或包覆有机聚合物微球，本微球具有亲水性，不与生物大分子产生排斥作用，具有一定的强度，可以为实心球也可以为空心球。
[0024]本实施例中，所述有机聚合物微球，所述的有机聚合物包括但不限于以下聚合物：丙烯酸聚合物，苯乙烯聚合物，聚乳酸，聚乙烯醇，甲基丙烯酸聚合物，尼伦类聚合物，甲基丙烯酸缩水甘油醚聚合物，环氧类聚合物等塑料及橡胶类聚合物。
[0025]本实施例中，所述聚合物形状为球形，有比较大的表面积，能够有比较大的配基密度，可以对生物大分子进行吸附。
[0026]一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺，具体的离心萃取工艺如下：
[0027]S1、生物大分子料液配置：料液配置应该选择与其对应的层析工艺料液相同，即有着相同的缓冲溶液，盐浓度等其他保持生物大分子活性的必备物质基础。生物大分子的浓度可以根据固体萃取剂的量来选择。一般选择为层析吸附法的120％～150％。
[0028]S2、目标分子的吸附于捕获：首相把固体萃取剂加入到萃取离心机中，不断的喷入缓冲溶液，以达到保证生物大分子活性的条件，对应层析工艺为缓冲步骤。上面步骤完成之后经过低速离心将缓冲液分离出来，加入配置好的料液量加入萃取离心机中，进行吸附和捕获目标分子，待捕获完成后进行低速离心或者切向流过滤，达到固液分离的效果。此步骤对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂，其步骤如下，固相相萃取剂制作，生物大分子料液调配，目标分子吸附及捕获，目标分子缓冲液洗涤，目标分子洗脱与分步洗脱，固相萃取剂的再生。2.根据权利要求1所述的一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂，其特征在于：所述固相萃取剂为有机聚合物微球和多糖微球或包覆有机聚合物微球，本微球具有亲水性，不与生物大分子产生排斥作用，具有一定的强度，可以为实心球也可以为空心球。3.根据权利要求2所述的一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂，其特征在于：所述有机聚合物微球，所述的有机聚合物包括但不限于以下聚合物：丙烯酸聚合物，苯乙烯聚合物，聚乳酸，聚乙烯醇，甲基丙烯酸聚合物，尼伦类聚合物，甲基丙烯酸缩水甘油醚聚合物，环氧类聚合物等塑料及橡胶类聚合物。4.根据权利要求1所述的一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺及固相萃取剂，其特征在于：所述聚合物形状为球形，有比较大的表面积，能够有比较大的配基密度，可以对生物大分子进行吸附。5.根据权利要求1～4任一项所述的一种用于生物大分子纯化的离心萃取工艺，具体的离心萃取工艺如下：S1、生物大分子料液配置：料液配置应该选择与其对应的层析工艺料液相同，即有着相同的缓冲溶液，盐浓度等其他保持生物大分子活性...

【专利技术属性】
技术研发人员：邢郁明，陈晓琳，陈晓辉，
申请(专利权)人：无锡萃纯生物材料科技有限公司，
类型：发明
国别省市：