奶牛乳房炎主要致病菌的检测基因芯片及检测方法技术

技术编号:3799896 阅读:368 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术提供了奶牛乳房炎主要致病菌的检测基因芯片及检测方法。所述基因芯片包括固相载体和固定在固相载体上的特异性检测探针,所述特异性检测探针包含以大肠杆菌16S rDNA保守区为基底序列设计的通用引物序列之间的6种奶牛乳房炎主要致病菌的可变区域内设计的特异性寡核苷酸杂交探针;所述6种奶牛乳房炎主要致病菌为无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌和金黄色葡萄球菌。本发明专利技术精确限定了PCR反应的退火温度、优化了PCR扩增的核酸片段和基因芯片进行杂交的条件,获得很好的杂交效果,最终得到准确的检测结果。本发明专利技术特异性好,准确率高,稳定性可靠,检测结果假阳性率低,同时操作步骤简单,易于推广使用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于检测
,涉及一种快速检测技术,具体涉及。
技术介绍
奶牛乳房炎不但严重影响乳的品质,造成奶牛生产力严重下降以至被淘汰,而且危害人类健康,奶牛乳房炎的流行已日益成为公认的公共卫生、社会和经济问题。引起奶牛乳房炎的致病菌种类众多,目前已知的致病菌大约有220多种,其中常见的就有20多种,而90。X奶牛乳房炎致病菌主要为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌、停乳链球菌、无乳链球菌、乳房链球菌、沙门氏菌、绿脓杆菌、志贺氏菌、蜡样芽胞杆菌等。中国专利申请200710166530.3中论述了奶制品中致病菌的检测基因芯片,荧光标记于探针,所述探针为16S-23S ri)NA之间筛选得到,但所述区间只有二百多个碱基,要筛选出10个探针,实际操作十分困难,不能应用于奶牛乳房炎的主要致病菌的准确检测。现有的奶牛乳房炎致病菌的检测方法有常规的生理生化鉴定法、PCR、 ELISA和实时荧光定量PCR技术等,常规的生理生化鉴定法操作复杂、检测周期长、费时费力、需要有很强的专业知识和专业操作能力;PCR和ELISA法应用到致病菌的检测中,虽然大大地縮短了检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种奶牛乳房炎主要致病菌的检测基因芯片,包括固相载体和固定在固相载体上的特异性检测探针,其特征在于所述特异性检测探针包含以大肠杆菌16S rDNA保守区为基底序列设计的通用引物序列之间的6种奶牛乳房炎主要致病菌的可变区域内设计的特异性寡核苷酸杂交探针;所述6种奶牛乳房炎主要致病菌为无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌、奇异变形杆菌和金黄色葡萄球菌。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:李守军杨林邢会杰
申请(专利权)人:华南农业大学
类型:发明
国别省市:81[中国|广州]

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