复合体制造技术

目的是提供一种将CpG寡核苷酸和疏水化多糖形成复合体的技术。该目的通过包含修饰CpG寡核苷酸和修饰多糖的复合体实现，所述CpG寡核苷酸含有具有甾醇骨架的疏水基团A，所述修饰多糖包含疏水基团B。饰多糖包含疏水基团B。饰多糖包含疏水基团B。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】复合体


[0001]本专利技术涉及例如包含修饰多糖的复合体。

技术介绍

[0002]免疫细胞，特别是巨噬细胞(肿瘤相关巨噬细胞，缩写为“TAM”)在癌症组织中的重要性已被指出是影响癌症恶性程度的一个因素。已知TAM具有免疫刺激性(M1)和免疫抑制性(M2)。M2 TAM通过减少对癌症的免疫攻击，促进癌症的恶性转化和生长。如果免疫抑制的M2 TAM可以转化为免疫刺激的M1 TAM，则可以增强对癌症的免疫攻击，并抑制癌症的恶性转化和生长。
[0003]CpG寡核苷酸能够刺激先天免疫受体，从而将M2 TAM转化为M1 TAM。还可以提高对其他免疫疗法(例如免疫检查点抑制剂)的敏感性。然而，CpG寡核苷酸在药物动力学和安全性方面存在全身给药(例如静脉给药)的问题。
[0004]据报道，由于疏水化多糖，如胆甾醇基普鲁兰多糖，可以自组装形成纳米凝胶，具有高度生物相容性，用作蛋白质载体，并具有抑制所含蛋白质降解和聚集的能力，因此它们与蛋白质形成复合体，用作抗原载体(NPL 1)。此外，已经发现胆固醇基普鲁兰多糖以肿瘤内TAM选择性方式积累(NPL 2)，并且可用作TAM选择性递送系统。
[0005]引文列表
[0006]专利文献
[0007]NPL 1：Muraoka,D.等人,ACS Nano,8(9),9209
‑
9218,2014
[0008]NPL 2：Muraoka D.等人,J Clin Invest.129(3):1278
‑
1294,2019。

技术实现思路

[0009]技术问题
[0010]在研究过程中，本专利技术人专注于将疏水化多糖和CpG寡核苷酸形成复合体。这可以预期将疏水化多糖的上述优点赋予CpG寡核苷酸，并补偿CpG寡核苷酸的上述问题。然而，CpG寡核苷酸和疏水化多糖不能直接形成复合体。
[0011]本专利技术的目的是提供一种将CpG寡核苷酸和疏水化多糖形成复合体的技术。
[0012]问题的解决方案
[0013]当难以将疏水化多糖和其他物质形成复合体时，通常尝试在改变或修饰作为递送载体的疏水化多糖之后形成复合体。鉴于具有这种背景的上述问题，作为深入研究的结果，本专利技术人专注于CpG寡核苷酸的改变或修饰。作为进一步研究的结果，本专利技术人发现，包含含有具有甾醇骨架的疏水基团A的修饰CpG寡核苷酸和含有疏水基团B的修饰多糖的复合体可以解决上述问题。作为基于该发现的进一步研究的结果，本专利技术人完成了本专利技术。具体地，本专利技术包括以下方面。
[0014]第1项.一种复合体，其包括含有具有甾醇骨架的疏水基团A的修饰CpG寡核苷酸和含有疏水基团B的修饰多糖。
[0015]第2项.根据第1项所述的复合体，其中形成所述修饰CpG寡核苷酸的CpG寡核苷酸包括选自A类CpG寡核苷酸和B类CpG寡核苷酸的至少一个成员。
[0016]第3项.根据第1项或第2项所述的复合体，其中所述疏水基团A包括选自胆固醇衍生基团、胆甾烷醇衍生基团、羊毛甾醇衍生基团、麦角甾醇衍生基团、β
‑
谷甾醇衍生基团、菜油甾醇衍生基团、豆甾醇衍生基团和菜子甾醇衍生基团的至少一个成员。
[0017]第4项.根据第1项至第3项中任一项所述的复合体，其中形成所述修饰CpG寡核苷酸的核苷酸的数目为8至50。
[0018]第5项.根据第1项至第4项中任一项所述的复合体，其中形成所述修饰多糖的多糖包括选自普鲁兰多糖、葡聚糖、直链淀粉、支链淀粉和甘露聚糖的至少一个成员。
[0019]第6项.根据第1项至第5项中任一项所述的复合体，其中形成所述修饰多糖的多糖包括普鲁兰多糖。
[0020]第7项.根据第1项至第6项中任一项所述的复合体，其中所述疏水基团B包括具有甾醇骨架的疏水基团。
[0021]第8项.根据第1项至第7项中任一项所述的复合体，其中所述修饰多糖具有5000至2000000的重均分子量。
[0022]第9项.根据第1项至第8项中任一项所述的复合体，其每摩尔份的修饰CpG寡核苷酸含有0.1至10摩尔份的修饰多糖。
[0023]第10项.根据第1项至第8项中任一项所述的复合体，其为纳米凝胶颗粒。
[0024]第11项.一种试剂，其包含根据第1项至第10项中任一项所述的复合体。
[0025]第12项.一种药物，其包含根据第1项至第10项中任一项所述的复合体。
[0026]第13项.根据第12项所述的药物，其为免疫调节剂、抗癌剂、佐剂或抗病毒剂。
[0027]本专利技术的有利效果
[0028]本专利技术可提供将CpG寡核苷酸和疏水化多糖形成复合体的技术。
附图说明
[0029]图1显示了试验例1
‑
6中Chol
‑
CpG(K3)：20μM和CHP纳米凝胶：20μm情况下HPLC分析结果的色谱图。
[0030]图2显示了当将CHP纳米凝胶的终浓度在0至40μM的范围内改变，同时将Chol
‑
CpG(K3)的终浓度设置为20μM时，试验例1
‑
6中HPLC分析结果的复合化率。
[0031]图3显示了试验例1
‑
7中通过DLS测量的粒度分布。
[0032]图4显示了试验例1
‑
8中的TEM观察图像。
[0033]图5显示了试验例2
‑
4中HPLC分析结果的色谱图。
[0034]图6显示了试验例2
‑
4中HPLC分析结果的复合化率。
[0035]图7显示了试验例3
‑
2中的共聚焦激光扫描显微照片。
[0036]图8显示了试验例3
‑
3中流式细胞仪分析的散点图。
[0037]图9显示了试验例4的ELISA结果。
具体实施方式
[0038]在本说明书中，术语“包括”和“包含”包括“包括”、“包含”、“基本上由...组成”和
“
由...组成”的概念。
[0039]1.复合体
[0040]在一个实施方式中，本专利技术涉及包含含有具有甾醇骨架的疏水基团A的修饰CpG寡核苷酸和含有疏水基团B的修饰多糖的复合体(在本说明书中，也称为“本专利技术的复合体”)。下文将对此进行描述。
[0041]修饰CpG寡核苷酸是通过修饰CpG寡核苷酸获得的化合物，并且没有特别限制，只要其包含具有甾醇骨架的疏水基团A作为修饰基团即可。
[0042]形成修饰CpG寡核苷酸的CpG寡核苷酸(即，修饰前的CpG寡核苷酸)没有特别限制，只要它是含有未甲基化胞嘧啶
‑
鸟嘌呤二核苷酸(5'
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CpG
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3')基序(CpG基序)的单链寡核苷酸即可。已知CpG寡核苷酸可用作疫苗佐剂，因为它们通过Toll样受体(TLR)诱导获得性免疫应答。CpG寡核苷酸可含有至少本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种复合体，其包含含有具有甾醇骨架的疏水基团A的修饰CpG寡核苷酸和含有疏水基团B的修饰多糖。2.根据权利要求1所述的复合体，其中形成所述修饰CpG寡核苷酸的CpG寡核苷酸包括选自A类CpG寡核苷酸和B类CpG寡核苷酸的至少一个成员。3.根据权利要求1或2所述的复合体，其中所述疏水基团A包括选自胆固醇衍生基团、胆甾烷醇衍生基团、羊毛甾醇衍生基团、麦角甾醇衍生基团、β
‑
谷甾醇衍生基团、菜油甾醇衍生基团、豆甾醇衍生基团和菜子甾醇衍生基团的至少一个成员。4.根据权利要求1至3中任一项所述的复合体，其中形成所述修饰CpG寡核苷酸的核苷酸的数目为8至50。5.根据权利要求1至4中任一项所述的复合体，其中形成所述修饰多糖的多糖包括选自普鲁兰多糖、葡聚糖、直链淀粉、支链淀粉和甘露聚糖的至少一个成员。...

【专利技术属性】
技术研发人员：原田直纯，秋吉一成，泽田晋一，
申请(专利权)人：国立大学法人京都大学，
类型：发明
国别省市：