痘病毒mRNA疫苗及用途制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种痘病毒mRNA疫苗及用途。具体地，本发明专利技术涉及一种分离的mRNA分子，其包含编码区，所述编码区编码目标蛋白，所述目标蛋白包含如下4个蛋白：痘苗病毒表面抗原A27、L1、A33和B5；其中，相邻的两个蛋白独立地为直接连接或通过相同或不同的Linker连接。动物免疫结果显示，本发明专利技术的mRNA分子具有良好的候选疫苗潜力，为痘病毒疫苗的开发提供一种创新思路。开发提供一种创新思路。开发提供一种创新思路。

【技术实现步骤摘要】
痘病毒mRNA疫苗及用途


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种痘病毒mRNA疫苗及用途。

技术介绍

[0002]痘病毒是一种包膜DNA病毒，属于痘病毒科痘病毒属；一些痘病毒可感染人类，引起严重的疾病，甚至威胁人类生命；例如可感染人类的4种正痘病毒：天花病毒(VARV)、猴痘病毒(MPXV)、牛痘病毒(CPXV)和痘苗病毒(VACV)。减毒痘苗病毒疫苗接种所提供的交叉保护使在人类历史上曾引起多次大流行的天花病毒从人群中灭绝，证实疫苗乃是防控病毒感染与传播的最有效手段之一。目前，全球仅有少数国家储备天花疫苗，用于应对天花或类似的正痘病毒疫情；猴痘病毒疫情的频频出现，再次引起对人用痘病毒疫苗研发的关注。
[0003]出于安全性与产量考虑，越来越多的关注集中到基因工程痘病毒疫苗的开发上，用于预防天花或猴痘病毒感染。痘苗病毒表面抗原A27、L1、A33和B5含有大量优质保守中和抗体表位，已被证实可被作为天花疫苗和猴痘病毒新型疫苗的候选抗原。通过诱导高水平交叉体液与细胞免疫提供体内保护，多抗原设计理论上可以极大降低病毒突变逃逸风险。
[0004]mRNA疫苗作为一种新型疫苗类型，已被证实拥有在动物体内和人体内诱导良好体液免疫与细胞免疫的潜能，背后的免疫学机理是：mRNA递送至细胞内后，可表达原始构象抗原，通过MHC
‑
I/II类递呈方式诱导细胞免疫，通过与B细胞相互作用，诱导一定体液免疫。相较于传统的疫苗制备技术，mRNA技术的优势在于：在获得足够抗原信息的情况下，疫苗原型制备概念验证、工艺开发可缩短至数月，产量极高、生产周期较短，可满足大规模突发疫情的接种防控需求。
[0005]现有的基因工程候选痘病毒疫苗(亚单位/DNA)未能诱导高水平均衡的体液免疫与细胞免疫；且常需要佐剂配伍和四抗原分开设计，增加了工艺开发的难度。
[0006]目前，尚需要开发新型痘病毒mRNA疫苗。

技术实现思路

[0007]本专利技术人经过深入的研究和创造性的劳动，通过将A27、L1、A33和B5通过合理的抗原组合设计，构建了一种痘病毒mRNA分子，动物免疫结果显示，所述mRNA分子具有良好的候选疫苗潜力，为痘病毒疫苗的开发提供一种创新思路。由此提供了下述专利技术：
[0008]本专利技术的一个方面涉及一种分离的mRNA分子，其包含编码区，所述编码区编码目标蛋白，所述目标蛋白包含如下4个蛋白：
[0009]痘苗病毒表面抗原A27、L1、A33和B5；
[0010]其中，相邻的两个蛋白独立地为直接连接或通过相同或不同的Linker连接。
[0011]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其中：
[0012]A27的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，
[0013]L1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，
[0014]A33的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，和/或
[0015]B5的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。
[0016]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其中，所述目标蛋白中，A27、L1、A33和B5依次排列；
[0017]优选地，所述目标蛋白中，A27、Linker、L1、Linker、A33、Linker和B5依次排列。
[0018]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其中，所述目标蛋白由A27、Linker、L1、Linker、A33、Linker和B5依次排列组成。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其中，Linker的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。
[0020]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其中，所述目标蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其中，编码区的序列如SEQ ID NO:11所示。
[0022]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其还包含选自如下的一项或者多项：
[0023]5’
UTR、终止密码子、3
’
UTR和PolyA；
[0024]优选地，所述分离的mRNA分子依次包含：
[0025]5’
UTR、编码区、终止密码子、3
’
UTR和PolyA。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其由5
’
UTR、编码区、终止密码子、3
’
UTR和PolyA组成。
[0027]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其中：
[0028]5’
UTR的序列如SEQ ID NO:12所示，
[0029]终止密码子的序列为UGAUAA，
[0030]3’
UTR的序列如SEQ ID NO:13所示，和/或
[0031]PolyA的序列如SEQ ID NO:14所示。
[0032]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的mRNA分子，其序列如SEQ ID NO:1所示。
[0033]本专利技术中，如果没有特别说明，5
’
端帽子结构和Kozak属于5
’
UTR序列，即视为5
’
UTR序列的一部分。
[0034]本专利技术的另一方面涉及一种分离的DNA分子，其能够转录出本专利技术中任一项所述的分离的mRNA分子。
[0035]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的DNA分子，其包含SEQ ID NO:3或SEQ ID NO:4所示序列的DNA片段。
[0036]本专利技术人发现，相对于SEQ ID NO:3所示序列的DNA片段，SEQ ID NO:4所示序列的DNA片段在体内或体外的蛋白表达水平更高。
[0037]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的DNA分子，其还包含位于上游的启动子，优选为T7启动子。
[0038]在本专利技术的一些实施方式中，所述的分离的DNA分子，其序列如SEQ ID NO:5所示。
[0039]本专利技术的再一方面涉及一种重组质粒，其包含本专利技术中任一项所述的分离的DNA分子。
[0040]本专利技术的再一方面涉及一种重组宿主细胞，其包含本专利技术中任一项所述的分离的DNA分子或者包含本专利技术的重组质粒。
[0041]本专利技术的再一方面涉及一种mRNA疫苗制剂，包含本专利技术中任一项所述的分离的mRNA分子，以及mRNA疫苗载体；
[0042]优选地，所述mRNA疫苗载体为脂质纳米颗粒或聚合物纳米颗粒；
[0043]优选地，所述脂质纳米颗粒；
[0044]优选地，mRNA疫苗制的平均粒径为50
‑
100nm、70
‑
90nm、80
‑
90nm或85nm；。
[004本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.分离的mRNA分子，其包含编码区，所述编码区编码目标蛋白，所述目标蛋白包含如下4个蛋白：痘苗病毒表面抗原A27、L1、A33和B5；其中，相邻的两个蛋白独立地为直接连接或通过相同或不同的Linker连接。2.根据权利要求1所述的分离的mRNA分子，其中：A27的氨基酸序列如SEQ ID NO:6所示，L1的氨基酸序列如SEQ ID NO:7所示，A33的氨基酸序列如SEQ ID NO:8所示，和/或B5的氨基酸序列如SEQ ID NO:9所示。3.根据权利要求1至2中任一权利要求所述的分离的mRNA分子，其中，所述目标蛋白中，A27、L1、A33和B5依次排列；优选地，所述目标蛋白中，A27、Linker、L1、Linker、A33、Linker和B5依次排列。4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的分离的mRNA分子，其中，Linker的氨基酸序列如SEQ ID NO:10所示。5.根据权利要求1至4中任一权利要求所述的分离的mRNA分子，其中，所述目标蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。6.根据权利要求1至5中任一权利要求所述的分离的mRNA分子，其中，编码区的序列如SEQ ID NO:11所示。7.根据权利要求1至6中任一权利要求所述的分离的mRNA分子，其还包含选自如下的一项或者多项：5
’
UTR、终止密码子、3
’
UTR和PolyA；优选地，所述分离的mRNA分子依次包含：5
’
UTR、编码区、终止密码子、3
’
UTR和PolyA。8.根据权利要求7所述的分离的mRNA分子，其中：5
’
UTR的序列如SEQ ID NO:12所示，终止密码子的序列为UGAUAA，3
...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘志华，熊野林，苏彩霞，安有才，
申请(专利权)人：江苏中慧元通生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：