淀粉样蛋白β的抗体制造技术

本公开涉及结合A

【技术实现步骤摘要】
淀粉样蛋白
β
的抗体
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请是申请日为2017年7月18日、申请号为201780043930.7、标题为“淀粉样蛋白β的抗体”的中国专利技术专利申请的分案申请。
[0003]所述中国专利技术专利申请要求于2016年7月18日提交的美国临时申请序列号62/363566，2016年11月9日提交的国际申请PCT/CA2016/051303，2017年5月17日提交的美国临时序列号62/507587和2017年5月17日提交的美国临时序列号62/507633的优先权，其各自通过引用整体并入本文。


[0004]公开涉及对淀粉样蛋白β(A
‑
β或Aβ)寡聚体具有选择性的抗体以及其组合物和用途。

技术介绍

[0005]淀粉样蛋白
‑
β(A
‑
β)作为36
‑
43个氨基酸的肽存在，是通过β和γ分泌酶从淀粉样蛋白前体蛋白(APP)释放的产物。在AD患者中，A
‑
β可存在于可溶性单体、不溶性原纤维和可溶性寡聚体中。在单体形式中，A
‑
β作为主要是非结构化的多肽链存在。在原纤维形式中，A
‑
β可聚集成不同的形态，通常称为品系。这些结构中的一些已经通过固态NMR确定。
[0006]例如，几种原纤维品系的结构可在蛋白质数据库(PDB)中获得，PDB是原子分辨率三维结构数据的晶体学数据库，包括3重对称Aβ结构(PDB入口，2M4J)；Aβ
‑
40单体的双重对称结构(PDB入口2LMN)，以及Aβ
‑
42单体的单链平行对位结构(PDB入口2MXU)。
[0007]Lu等人[8]报道了2M4J的结构，Xiao等人[9]报道了2MXU的结构。Petkova等人[10]报道了2LMN的结构。
[0008]已显示A
‑
β寡聚体杀死培养物中的细胞系和神经元并阻断在切片培养物和活动物中促进记忆的关键突触活性，称为长期增强(LTP)。
[0009]迄今尚未确定寡聚体的结构。此外，NMR和其它证据表明，寡聚体不是存在于单个明确定义的结构中，而是存在于具有有限规律性的构象
‑
塑性可延展的结构集合中。此外，有毒寡聚体种类的浓度远低于单体或原纤维的浓度(估计值各不相同，但大约低于或多于1000倍)，使得该目标难以实现。
[0010]已经描述了结合A
‑
β的抗体。
[0011]标题为抗淀粉样蛋白抗体在眼部疾病中的用途的WO2009048538A2公开了嵌合抗体，其识别A
‑
β上的一个或多个结合位点并且可用于治疗眼部疾病。
[0012]标题为用于治疗与淀粉样蛋白或类淀粉样蛋白相关的疾病的化合物的US9221812B2描述了结合A
‑
β的药物组合物和不连续抗体，其包括氨基酸残基12至24之间的表位，用于治疗淀粉样蛋白相关疾病。
[0013]标题为抗淀粉样蛋白β抗体及其用途的WO2003070760A2公开了识别A
‑
β不连续表位的抗体，其中第一区域包含氨基酸序列AEFRHDSGY或其片段，并且其中第二区域包含氨基
酸序列VHHQKLVFFAEDVG或其片段。
[0014]标题为治疗淀粉样变性的化合物的US20110171243A1公开了能够诱导体内形成结合HQKLVF和/或HQKLVFFAED的抗体的肽模拟表位及其用途。
[0015]WO2008088983A1和WO2001062801A2公开了结合A
‑
β氨基酸13
‑
28的聚乙二醇化抗体片段及其在治疗A
‑
β相关疾病中的用途。Solanezumab和Crenezumab结合A
‑
β上的氨基酸16
‑
26。Crenezumab与单体、寡聚体和原纤维相互作用。Midregion抗体包括solanezumab(皮摩尔亲和力)和crenezumab(纳摩尔亲和力)，似乎优先结合单体A
‑
β[13]。
[0016]标题为用于治疗与帕金森氏病相关的症状的化合物的WO2009149487A2描述了包含对具有特异于A
‑
β表位例如EVHHQKL，HQKLVF和HQKLVFFAED的抗体具有结合能力的肽的化合物。
[0017]如Giulian D等人[11]和Winkler等人[12]所述，描述了HHQK(SEQ ID NO：7)结构域涉及人小胶质细胞中神经毒性的斑块诱导。已经公开了结合HHQK(SEQ ID NO：7)的非抗体治疗剂用于治疗蛋白质折叠疾病(US20150105344A1，WO2006125324A1)。
[0018]美国专利5,766,846；5837672和5,593,846(其通过引用并入本文)描述了针对Aβ肽中心结构域的鼠单克隆抗体的产生。WO01/62801描述了在氨基酸13
‑
28之间结合A
‑
β的抗体。WO2004071408公开了人源化抗体。
[0019]标题为治疗和预防淀粉样变性的WO2009086539A2涉及淀粉样变性和淀粉样蛋白轻链淀粉样变性，通过施用包含新表位的肽，例如来自AA的C末端区域的淀粉样蛋白A(AA)片段，以及对聚集的淀粉样蛋白的新表位特异的抗体，例如，对AA原纤维的C末端区域特异的抗体。
[0020]标题为抗淀粉样β抗体及其用途的WO2003070760涉及能够特异性识别R
‑
A4肽的两个区域的抗体分子，其中第一区域包含氨基酸序列AEFRHDSGY或其片段，并且其中第二区域包含氨基酸序列VHHAEDVFFAEDVG或其片段。
[0021]标题为用于改善认知的人源化淀粉样抗体的WO2006066089涉及用于治疗与β淀粉样蛋白相关的疾病的改进的药剂和方法，特别是用于鉴定和表征特异性结合Aβ肽并且有效减少与淀粉样蛋白形成疾病(例如AD)相关的斑块负荷的单克隆抗体12A11。
[0022]标题为可变区糖基化的针对淀粉样蛋白4的抗体的WO2007068429涉及纯化的抗体分子制剂，其特征在于至少一个抗原结合位点包含重链(V
H
)可变区中的糖基化天冬酰胺(Asn)。
[0023]WO03/016466涉及经改造以在重链的CDR2内缺乏N
‑
糖基化位点的变体266抗体，其药物组合物，以及用于表达变体抗体的多核苷酸序列、载体和转化细胞。描述了变体以从人生物流体中螯合可溶性A
‑
β肽并特异性结合淀粉样蛋白β肽的位置13
‑
28内包含的表位。
[0024]Yu等人描述了与PADRE或源自毒素的载体蛋白融合的六价可折叠Aβ1
‑
15(6Aβ15)。Wang等人201本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
NO：54和68，或序列与其具有至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％序列同一性的序列，其中所述CDR维持其中下划线所示(SEQ ID No：74
‑
79也是)。10.根据权利要求1所述的人源化抗体，其中，所述人源化抗体具有如表4A或4B所示的重链可变序列和轻链可变序列。11.根据权利要求1至10中任一项所述的人源化抗体，其中，所述抗体是单链抗体。12.一种免疫缀合物，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的抗体和可检测标记或细胞毒性剂。13.根据权利要求12所述的免疫缀合物，其中，所述可检测标记包括发射正电子的放射性核素，其任选地用于受试者成像，例如PET成像。14.一种组合物，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，或根据权利要求36或37所述的免疫缀合物，任选地具有稀释剂。15.一种核酸分子，其编码根据权利要求1至11中任一项所述的抗体。16.一种载体，其包含根据权利要求15所述的核酸。17.一种细胞，其表达根据权利要求1至11中任一项所述的抗体，任选地其中所述细胞是包含根据权利要求40所述的载体的杂交瘤。18.一种试剂盒，其包含根据权利要求1至11中任一项所述的抗体、根据权利要求15所述的核酸分子、根据权利要求16所述的载体或根据权利要求17所述的细胞。19.一种制备根据权利要求1所述的抗体的方法，其包括将具有SEQ ID NO：12的A
‑
β序列的环肽或包含所述环肽的组合物施用于受试者，例如非人哺乳动物，以及分离抗体和/或表达抗体的细胞，所述抗体具有CDR或与包含选自表2中SEQ ID No的CDR或由其组成的抗体竞争。20.一种确定生物样品是否包含A
‑
β的方法，所述方法包括：a.使所述生物样品与根据权利要求1至11中任一项所述的抗体或根据权利要求12或13所述的免疫缀合物接触；以及b.检测任何抗体复合物的存在。21.根据权利要求20所述的方法，其用于确定所述生物样品是否含有A
‑
β寡聚体，所述方法包括：a.使所述样品与根据权利要求1至11中任一项所述的抗体或根据权利要求12或13所述的免疫缀合物接触，所述抗体或免疫缀...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：普罗米斯神经科学公司，
类型：发明
国别省市：