针对错误折叠的TDP-43的单链抗体和胞内抗体及其使用方法技术

本公开涉及例如在DAGWGNL(SEQ ID NO:1)的上下文中与W68特异性结合的单链抗体、编码所述抗体的核酸和载体以及向有需要的受试者施用所述单链抗体、核酸和载体的方法。核酸和载体的方法。核酸和载体的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】针对错误折叠的TDP
‑
43的单链抗体和胞内抗体及其使用方法
[0001]相关申请
[0002]本文是要求于2020年4月29日提交的美国临时专利申请第63/017,363号的优先权的专利合作条约申请。在先申请的公开内容被认为是本申请公开内容的一部分，并且所述在先申请整体并入本申请。
[0003]序列表的并入
[0004]于2021年4月29日创建的序列表“P61456PC00 Sequence ListingST25.txt”(154,654字节)的计算机可读形式通过引用并入本文。


[0005]本公开涉及TDP
‑
43单链抗体并且更具体地涉及用于靶向胞内错误折叠的TDP
‑
43的胞内抗体。

技术介绍

[0006]43kDa(TDP
‑
43)的反式应答(TAR)元件DNA结合蛋白是414个氨基酸的蛋白质，并且由N末端泛素样结构域(NTD，残基1
‑
80)、两个RNA识别基序(RRM，由残基106
‑
177(RRM1)和残基192
‑
259(RRM2)组成)和C末端结构域(CTD，残基274
‑
414)组成。NTD位于指导核定位的结构域(残基82
‑
98、NLS1 K82RK84和K95VKR98中的NLS基序)的两侧。RRM2包含从残基239至250的核输出信号(NES)。
[0007]TDP
‑
43主要是在RNA代谢中起核心作用的核蛋白。TDP
‑
43已成为肌萎缩侧索硬化症(ALS)和额颞叶痴呆(FTD)疾病谱的研究焦点，因为受影响的神经元内的致病性包涵体可能含有经翻译后修饰的TDP
‑
43。TDP
‑
43的CTD与疾病特别相关，因为在TDP
‑
43中发现了几乎所有家族性ALS/FTD相关突变。
[0008]发现TDP
‑
43在散发性和家族性ALS和FTD患者的神经元包涵体中过度磷酸化、泛素化和片段化[4]。
[0009]功能性TDP
‑
43可以作为核寡聚体存在，与细胞应激时形成的细胞质聚集体不同。功能性TDP
‑
43寡聚化是其RNA剪接功能所必需的。NTD驱动的TDP
‑
43在细胞核中的寡聚化可以抑制细胞质错误定位和病理性聚集的形成[9]。
[0010]生理TDP
‑
43寡聚化是由其N末端结构域介导的，所述N末端结构域可以采用动态的螺线管状结构，由核磁共振波谱和电子显微镜结合的2.1A晶体结构揭示[9]。
[0011]现在几乎所有(大约97％)的ALS病例和大约一半(大约40％)的FTD病例中都发现了TDP
‑
43的聚集体(包涵体)。TDP
‑
43是在ALS患者的运动神经元和神经胶质细胞中发现的细胞质包涵体的主要组分之一。
[0012]TDP
‑
43内含物前体的浓度可能远低于功能性TDP
‑
43的浓度。错误折叠的TDP
‑
43的低浓度使这个目标难以捉摸。
[0013]在表达细胞质人TDP
‑
43的转基因小鼠和非转基因小鼠中脑内注射脑源性病理性TDP
‑
43FTLD
‑
TDP种子，并导致诱导以时间依赖性方式通过大脑传播的从头TDP
‑
43病理学
[10]。
[0014]已经描述了与TDP
‑
43结合的抗体。
[0015]标题为神经退行性疾病的预后和/或诊断方法、鉴定候选化合物和用于治疗神经退行性疾病的化合物的方法(METHODS FOR THE PROGNOSTIC AND/OR DIAGNOSTIC OF NEURODEGENERATIVE DISEASE,METHODS TO IDENTIFY CANDIDATE COMPOUNDS AND COMPOUNDS FOR TREATING NEURODEGENERATIVE DISEASE)的WO2012174666公开了用于通过评估TDP
‑
43与NF
‑
κB p65之间的相互作用使用抗TDP
‑
43抗体来诊断如ALS和FTD等神经退行性疾病的方法。
[0016]标题为用于治疗神经退行性疾病的TDP
‑
43结合多肽(TDP
‑
43
‑
BINDING POLYPEPTIDES USEFUL FOR THE TREATMENT OF NEURODEGENERATIVE DISEASES)的WO2016086320公开了与TDP
‑
43的RRM1结构域结合以破坏其与NF
‑
κB相互作用以治疗ALS和FTD的抗体。
[0017]可以在胞内表达并优先与错误折叠的TDP
‑
43而不是天然折叠的TDP
‑
43结合的抗体是期望的。

技术实现思路

[0018]本专利技术人已经鉴定出可以靶向细胞质错误折叠的TDP
‑
43并且例如当在包括细胞质错误折叠的TDP
‑
43的细胞中表达时可以增加其降解的单链胞内抗体。
[0019]所述单链胞内抗体源自与构象N末端表位结合的抗体，所述表位在错误折叠的TDP
‑
43中是可接近的，但在天然折叠的非疾病相关TDP
‑
43中是不可接近的。针对包括N末端TDP
‑
43序列DAGWGNL(SEQ ID NO:1)的免疫原产生的抗体，优先与错误折叠的TDP
‑
43聚集体结合。发现残基W68是赋予错误折叠的TDP
‑
43聚集体抗体特异性的重要残基。
[0020]一方面包含一种单链抗体，所述单链抗体与错误折叠的TDP
‑
43结合并包括包含互补决定区CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3的重链可变区和包含互补决定区CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3的轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区通过连接子连接。所述重链可变区和所述轻链可变区和连接子的取向可以是重链可变区
‑
连接子
‑
轻链可变区或轻链可变区
‑
连接子
‑
重链可变区。
[0021]在一实施例中，所述单链抗体是scFv、纳米抗体或微型抗体。
[0022]另外的方面包括一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包括本文所描述的抗体和可检测标记，如正电子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种核酸，其包括编码单链抗体的序列，所述单链抗体与错误折叠的TDP
‑
43中的Trp
‑
68结合并包括包含互补决定区CDR
‑
H1、CDR
‑
H2和CDR
‑
H3的重链可变区和包含互补决定区CDR
‑
L1、CDR
‑
L2和CDR
‑
L3的轻链可变区，其中所述重链可变区和所述轻链可变区通过连接子连接并且其中所述CDR的氨基酸序列包括以下序列：
优选地其中所述CDR序列包括SEQ ID No:10
‑
15、16
‑
21、120
‑
125或130
‑
135。2.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:98中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:98具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:10
‑
12中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:99中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:99具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:13
‑
15中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:76中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码和/或所述轻链可
变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:77中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码。3.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:100中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:100具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:16
‑
18中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:101中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:101具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:19
‑
21中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:78中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码和/或所述轻链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:79中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码。4.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:102中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:102具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:22
‑
24中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:103中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:103具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:25
‑
27中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:80中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码和/或所述轻链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:81中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码。5.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:104中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:104具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:28
‑
30中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:105中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:105具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:31
‑
33中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:82中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码和/或所述轻链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:83中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码。6.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:106中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:106具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:34
‑
36中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:107中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:107具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:37
‑
39中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:84中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码和/或所述轻链
可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:85中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码。7.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:108中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:108具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:40
‑
42中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:109中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:109具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:43
‑
45中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:86中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码和/或所述轻链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:87中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码。8.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:110中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:110具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:46
‑
48中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:111中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:111具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:49
‑
51中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:88中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码和/或所述轻链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:89中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化版本编码。9.根据权利要求1所述的核酸，其中所述抗体包括重链可变区，所述重链可变区包括：i)如SEQ ID NO:128中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:128具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:120
‑
122中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，和/或其中所述抗体包括轻链可变区，所述轻链可变区包括如SEQ ID NO:129中所示的氨基酸序列；ii)与SEQ ID NO:129具有至少80％、至少85％、至少90％或至少95％序列同一性的氨基酸序列，其中所述CDR序列如SEQ ID NO:123
‑
125中所示，或iii)i)的经保守取代的氨基酸序列，任选地其中所述重链可变区氨基酸序列由如SEQ ID NO:126中所示的核苷酸序列或其密码子简并或优化...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：普罗米斯神经科学公司，
类型：发明
国别省市：