【技术实现步骤摘要】
重组人三型胶原蛋白、注射剂及医学美容产品中的应用
[0001]本专利技术涉及人三型胶原蛋白
,具体重组人三型胶原蛋白、注射剂及医学美容产品中的应用。
技术介绍
[0002]胶原蛋白由原胶原组成,每个原胶原都有一种特殊的三重螺旋结构,由3条α螺旋的肽链缠绕而成,长度约为1000个氨基酸残基;每条α肽链通过左手螺旋缠绕,3条肽链一起形成一个大的右手螺旋结构。Nokelainen等构建了两株杆状病毒表达系统,其中一株编码人Ⅲ型原胶原α1链,另一株编码人P4H的α和β亚基,通过共感染昆虫细胞,成功表达了人胶原蛋白,并具有稳定三螺旋结构,表达量达50mg/L。由于动、植物细胞的培养难度大,成本高,想要大规模生产不太理想。因此,采用微生物作为宿主仍然是较为理想的选择。
[0003]Vuorela等于1997年成功利用毕赤酵母表达了人Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白全序列。大量研究表明胶原蛋白与关键酶P4H在宿主细胞的共表达是一个较好的策略。使用α
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MF信号肽也只能够极少量地提高其分泌量,同时又会减少Ⅰ型胶原蛋白的表达总量。重组酵母表达得到的胶原分子其结构、性质等都接近于天然的胶原蛋白,同样也能在体外组装成胶原纤维,仅四基因的单拷贝重组子的胶原蛋白表达量就高达0.5g/L,比在同样条件下表达Ⅰ型胶原蛋白提高了1.5~3倍。
技术实现思路
[0004]本专利技术人利用人源胶原蛋白III型a1链目的基因的两端目的基因M1和M2与一段目的序列M3融合构建了重组表达质粒,并将该重组表达质粒转入毕赤酵母 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种重组人三型胶原蛋白的制备方法,其特征在于,包括:构建重组人三型胶原蛋白的重组表达质粒;将所述重组质粒转入毕赤酵母,得到重组菌株;以及对所述重组菌株进行诱导表达,收集发酵液,纯化即可得到所述重组人三型胶原蛋白;其中,所述重组表达质粒的构建包括:构建质粒pUC57
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M3;依据所述质粒pUC57
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M3构建质粒pUC57
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M3
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M1;依据质粒pUC57
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M3
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M1构建质粒pUC57
‑
M3
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M1
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M2;依据质粒pUC57
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M3
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M1
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M2构建重组表达质粒pPICZαA
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M3
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M1
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M2;其中,M1、M2、M3的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1~3所示。2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,构建质粒pUC57
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M3的步骤包括:对M3序列进行PCR扩增,得到携带pUC57同源臂的M3序列;对pUC57采用SacI和BSP681进行使用的双酶切反应,得到pUC57的线性化序列;将携带pUC57同源臂的M3序列与pUC57的线性化序列进行同源重组反应,得到质粒pUC57
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M3。3.根据权利要求2所述的制备方法,其特征在于,M3序列进行PCR扩增过程中,采用M3
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F和M3
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R为引物对,M3
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F和M3
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R的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4~5所示。4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,“依据所述质粒pUC57
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M3构建质粒pUC57
‑
M3
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M1”的步骤包括:对M1序列进行PCR扩增,得到携带pUC57
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M3同源臂的M1序列;采用Mpln103I和BamH1对pUC57
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M3进行双酶切,得到pUC57
技术研发人员:请求不公布姓名,
申请(专利权)人:广东瀚润生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:
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