重组人三型胶原蛋白、注射剂及医学美容产品中的应用制造技术

本发明专利技术涉及人三型胶原蛋白技术领域，具体重组人三型胶原蛋白、注射剂及医学美容产品中的应用。通过构建重组表达质粒，并将该重组表达质粒转入毕赤酵母，得到高效胞外表达重组人三型胶原蛋白的菌株，通过该菌株诱导表达可得到该重组人三型胶原蛋白，不仅表达量可达到5g/L，而于菌株胞外表达，诱导表达条件宽泛，易于分离纯化；得到的重组人三型胶原蛋白能够作用医用美容产品的原料，前景可观。前景可观。前景可观。

【技术实现步骤摘要】
重组人三型胶原蛋白、注射剂及医学美容产品中的应用


[0001]本专利技术涉及人三型胶原蛋白
，具体重组人三型胶原蛋白、注射剂及医学美容产品中的应用。

技术介绍

[0002]胶原蛋白由原胶原组成，每个原胶原都有一种特殊的三重螺旋结构，由3条α螺旋的肽链缠绕而成，长度约为1000个氨基酸残基；每条α肽链通过左手螺旋缠绕，3条肽链一起形成一个大的右手螺旋结构。Nokelainen等构建了两株杆状病毒表达系统，其中一株编码人Ⅲ型原胶原α1链，另一株编码人P4H的α和β亚基，通过共感染昆虫细胞，成功表达了人胶原蛋白，并具有稳定三螺旋结构，表达量达50mg/L。由于动、植物细胞的培养难度大，成本高，想要大规模生产不太理想。因此，采用微生物作为宿主仍然是较为理想的选择。
[0003]Vuorela等于1997年成功利用毕赤酵母表达了人Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型胶原蛋白全序列。大量研究表明胶原蛋白与关键酶P4H在宿主细胞的共表达是一个较好的策略。使用α
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MF信号肽也只能够极少量地提高其分泌量，同时又会减少Ⅰ型胶原蛋白的表达总量。重组酵母表达本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人三型胶原蛋白的制备方法，其特征在于，包括：构建重组人三型胶原蛋白的重组表达质粒；将所述重组质粒转入毕赤酵母，得到重组菌株；以及对所述重组菌株进行诱导表达，收集发酵液，纯化即可得到所述重组人三型胶原蛋白；其中，所述重组表达质粒的构建包括：构建质粒pUC57
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M3；依据所述质粒pUC57
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M3构建质粒pUC57
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M3
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M1；依据质粒pUC57
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M3
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M1构建质粒pUC57
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M3
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M1
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M2；依据质粒pUC57
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M3
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M1
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M2构建重组表达质粒pPICZαA
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M3
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M1
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M2；其中，M1、M2、M3的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.1～3所示。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，构建质粒pUC57
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M3的步骤包括：对M3序列进行PCR扩增，得到携带pUC57同源臂的M3序列；对pUC57采用SacI和BSP681进行使用的双酶切反应，得到pUC57的线性化序列；将携带pUC57同源臂的M3序列与pUC57的线性化序列进行同源重组反应，得到质粒pUC57
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M3。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，M3序列进行PCR扩增过程中，采用M3
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F和M3
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R为引物对，M3
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F和M3
‑
R的核苷酸序列依次如SEQ ID NO.4～5所示。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，“依据所述质粒pUC57
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M3构建质粒pUC57
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M3
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M1”的步骤包括：对M1序列进行PCR扩增，得到携带pUC57
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M3同源臂的M1序列；采用Mpln103I和BamH1对pUC57
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M3进行双酶切，得到pUC57

【专利技术属性】
技术研发人员：请求不公布姓名，
申请(专利权)人：广东瀚润生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：