一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备、使用方法及其应用技术

本发明专利技术涉及细菌检测技术领域，公开了一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备方法，具体如下：将巨噬细胞经平板培养密度后达70％～85％后，加入磁性氧化铁纳米颗粒溶液继续孵育一段时间，待细胞吞噬磁性颗粒后，消化获得悬浮磁化细胞；将光引发剂2

【技术实现步骤摘要】
一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备、使用方法及其应用


[0001]本专利技术属于细菌检测
，具体涉及一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备、使用方法及其应用。

技术介绍

[0002]细菌感染严重影响人类健康，快速、准确和高灵敏性的细菌分离与检测方法能够为细菌性传染病的早期诊断提供有力支持。目前，细菌分析主要依赖传统的分离培养试验、普通PCR法和酶联免疫实验等。分离培养法操作步骤多、耗时长且需要特定的操作培养条件，无法实现病原细菌的快速鉴定。普通PCR检测技术利用核酸引物进行核酸检测(如聚合酶链反应)具有良好的灵敏度，但核酸检测的流程较为复杂，涉及如细胞裂解、核酸提取、磁分离、洗涤和扩增等)，并且需要额外的变温设备。免疫学检测法如免疫胶体金试纸，由于其简单、成本低、信号生成速度快，十分适合病原体的快速鉴定分析。然而，免疫检测法通常需要花费大量精力去筛选和优化一对高特异性的生物受体(抗体)。同时，免疫试纸条的使用必须提前知晓样品中是否含有目标细菌，当样本中存在未知的病原体时，则难以部署实施。此外，细菌在感染人体过程中，会分泌多种外毒素攻击宿主。目本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备方法，其特征在于，具体如下：将巨噬细胞经平板培养密度后达70％～85％后，加入磁性氧化铁纳米颗粒溶液继续孵育一段时间，待细胞吞噬磁性颗粒后，消化获得悬浮磁化细胞；将光引发剂2
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羟基
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(2
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羟基乙氧基)
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甲基丙苯酮与聚乙二醇二丙烯酸酯混合，制备凝胶液；然后，在细胞悬液中加入一定浓度的凝胶液，孵育后，低速离心收集细胞，并用磷酸缓冲液重悬细胞，使用波长为365nm的紫外灯照射细胞，引发聚合反应，获得胶体化的巨噬细胞；将DNA核酶链与胶体化巨噬细胞孵育，通过磁分离去除多余的DNA，并将得到的保存在4℃中以供后续使用，所述DNA核酶/底物链的终浓度为50～250nM，与胶体化巨噬细胞孵育时间为15～20分钟；所述反应缓冲液组分为1
×
PBS。2.如权利要求1所述的一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所使用的磁性氧化铁纳米颗粒浓度为40～70μg/mL，与巨噬细胞孵育8～24小时。3.如权利要求1所述的一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述凝胶液中聚乙二醇二丙烯酸酯浓度为5～10wt％，分子量范围为500～1000Da。4.如权利要求1所述的一种DNA修饰胶体化巨噬细胞的制备方法，其特征在于，所述光引发剂2
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羟基
‑4’‑
(2
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羟基乙氧基)
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【专利技术属性】
技术研发人员：李超，桂悦悦，倪敏，汪丽，
申请(专利权)人：合肥工业大学，
类型：发明
国别省市：