在蛋白质纯化过程中降低宿主细胞蛋白质含量的方法技术

本公开涉及用于在将要施用给患者的蛋白质的制备过程中降低在宿主细胞中重组地产生的蛋白质制剂中宿主细胞蛋白质含量的方法。的蛋白质制剂中宿主细胞蛋白质含量的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】在蛋白质纯化过程中降低宿主细胞蛋白质含量的方法
[0001]本专利技术涉及重组蛋白质制备领域。更具体地，本专利技术提供了一种用于在将要给病人施用的蛋白质(诸如治疗性或诊断性蛋白质)的制备过程中降低包含在宿主细胞中重组地生产的目的蛋白质的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质含量的方法目的蛋白质。
[0002]宿主细胞蛋白质(HCP)是参与细胞的维持和生长及蛋白质的合成和加工的宿主细胞的蛋白质。然而，在治疗性或诊断性蛋白质领域，HCP的存在威胁着产品质量和病人安全，因为它会造成诸如聚集、产品因催化活性和/或免疫原性而碎片化等问题。因此，HCP被视为蛋白质制剂的一个关键质量属性(CQA)。不希望的聚集和产品碎片化的形成要求通过额外的纯化步骤来降低/去除HCP，而这些额外的纯化步骤经常会导致目标蛋白质的产量减少和整体制造制备的增加。
[0003]从制备过程中消除HCP的挑战，以及改进工艺以降低HCP的尝试已经公开，例如在以下资料中所述的，Gilgunn等；Goey等,Biotechnology Advances 36(2018)1223
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1237；以及Cur本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种降低包含在宿主细胞中重组地产生的目的蛋白质的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质的含量的方法，所述方法包括以下步骤：a.使蛋白质制剂经过亲和层析柱；b.用由弱酸和强酸组成的酸组合从层析柱中洗脱目的蛋白质，以获得包含目的蛋白质的洗脱液；c.将洗脱液的pH值提高到约6.0以上；及d.将洗脱液进行深度过滤，获得经过滤的蛋白质制剂。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述层析柱包括蛋白A、蛋白G或蛋白L亲和层析柱。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述弱酸有不多于一个小于7.0的pKa值，并且所述强酸有不多于一个小于7.0的pKa值。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述弱酸是乙酸，所述强酸是磷酸或乳酸。5.根据权利要求4所述的方法，其中乙酸的浓度为约20mM，并且其中所述强酸是磷酸，以及其中磷酸的浓度为约5mM至约10mM。6.根据权利要求4所述的方法，其中乙酸的浓度为约20mM，并且中所述强酸是乳酸，以及其中乳酸的浓度为约5mM。7.根据权利要求1所述的方法，进一步包括进行病毒灭活的步骤。8.根据权利要求1所述的方法，进一步包括进行病毒灭活的步骤，其包括调整来自所述的从层析柱上洗脱蛋白质的步骤的洗脱液的pH值至约4.0以下，并且其中洗脱液在约pH 4.0以下的状态下维持约0分钟至约180分钟。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述调整洗脱液的pH值的步骤包括将洗脱液的pH值调整到约pH 3.3至约pH 3.7。10.根据权利要求9所述的方法，其中调整洗脱液的pH值至约pH 3.5。11.根据权利要求8至10中任一项所述的方法，其中调整洗脱液的pH值包括加入HCl、磷酸或乙酸和磷酸的组合中的任一种。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述提高洗脱液的pH值的步骤包括将pH值提高到约pH 6.5至约pH 7.5。13.根据权利要求12所述的方法，其中提高洗脱液的pH值至约pH 7.0。14.根据权利要求12或13中任一项所述的方法，其中提高洗脱液的pH值的步骤包括添加Tris。15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中在所述将pH值提高至约6.0以上的步骤中，洗脱液具有约10mM至约45mM的离子强度。16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，进一步包括将经深度过滤的蛋白质制剂进行离子交换层析的步骤。17.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中经过滤的蛋白质制剂中的宿主细胞蛋白质的含量被降低至低于100ppm。18.根据权利要求1至16中任一项所述的方法，其中经过滤的蛋白制剂中的宿主细胞蛋白质的含量包括PLBL2，并且其中PLBL2被降低至低于100ppm。19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述蛋白质制剂包括收获的细胞培养液、捕获池或回收的蛋白池。
20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是治疗性或诊断性蛋白质。21.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是抗体、Fc融合蛋白、肽、免疫粘附素、酶、生长因子、受体、激素、调控因子、细胞因子、抗原、肽或结合剂。22.根据权利要求21所述的方法，其中所述抗体是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、人抗体、双特异性抗体，或抗体片段。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述抗体是IgG1抗体。24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中所述蛋白质是抗SARS
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2抗体。25.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体是巴姆拉尼单抗(bamlanivimab)。26.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体包含SEQ ID NO:1的VH和SEQ ID NO:2的VL。27.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体包含SEQ ID NO:3的HC和SEQ ID NO:4的LC。28.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体是埃特司韦单抗(etesevimab)。29.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体包含SEQ ID NO:5的VH和SEQ ID NO:6的VL。30.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体包含SEQ ID NO:7的HC和SEQ ID NO:8的LC。31.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体是贝特洛韦单抗(bebtelovimab)。32.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体包含SEQ ID NO:9的VH和SEQ ID NO:10的VL。33.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗SARS
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2抗体包含SEQ ID NO:11的HC和SEQ ID NO:12的LC。34.一种降低在宿主细胞中重组地产生的抗SARS

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：